本文關(guān)鍵詞：DNA疫苗的不同構(gòu)象在體內(nèi)外表達差異研究

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【摘要】：目的:研究DNA疫苗構(gòu)象對體內(nèi)和體外表達的影響。方法:分別構(gòu)建綠色熒光蛋白表達質(zhì)粒(pcDNA3.1-EGFP)和螢火蟲熒光素酶表達質(zhì)粒(pDRVISV1.0-Fluc),對其存在的3種拓撲形式(包括超螺旋、線性、閉環(huán)切刻等)和反復(fù)凍融狀態(tài)對表達效率的影響進行分析,前者用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染293FT細胞,用流式細胞儀檢測EGFP的表達情況;后者通過接種BALB/c小鼠,用活體成像技術(shù)監(jiān)測熒光素酶的表達情況。結(jié)果:對pcDNA3.1-EGFP質(zhì)粒,流式細胞儀檢測其轉(zhuǎn)染293FT細胞48 h后顯示,4種處理組的質(zhì)粒表達EGFP的效率和熒光強度有所差異,依次為新鮮制備質(zhì)粒(89.76%,2682.68)反復(fù)凍融處理質(zhì)粒(76.35%,2313.48)閉環(huán)切刻質(zhì)粒(68.45%,1245.95)線性質(zhì)粒(38.28%,929.5)。對pDRVISV1.0-Fluc質(zhì)粒,采用小鼠活體成像技術(shù)持續(xù)觀察接種后28 d的體內(nèi)熒光素酶的熒光信號強度情況,結(jié)果顯示:接種后0.2 d觀察到熒光,之后強度持續(xù)開始增強,至第5 d達到平臺期,維持至18 d。質(zhì)粒各處理組的熒光強度組間有顯著差異,依次為新鮮制備質(zhì)粒(108.6)反復(fù)凍融處理質(zhì)粒(108.4)線性質(zhì)粒(108.3)切刻質(zhì)粒(108.0)。2種質(zhì)粒不同構(gòu)象的體內(nèi)體外表達中,均是新鮮制備質(zhì)粒的表達量最高,因其中超螺旋為其主要構(gòu)象。結(jié)論:質(zhì)粒中超螺旋比例高時其轉(zhuǎn)染效率及表達量最高,提高超螺旋比例是DNA疫苗質(zhì)量控制的關(guān)鍵。
【作者單位】： 中國食品藥品檢定研究院
【關(guān)鍵詞】： 拓撲形式 構(gòu)象 超螺旋 熒光素酶 活體成像技術(shù) 疫苗質(zhì)量控制
【基金】：國家科技重大專項十二五課題基金(2012ZX10004701-001)
【分類號】：R392.1
【正文快照】： DNA疫苗是20世紀(jì)90年代初從基因治療領(lǐng)域發(fā)展起來的一種全新免疫制劑。隨著人們對核酸疫苗的研究日益深入,也逐漸發(fā)現(xiàn)了其諸多優(yōu)點,例如可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生細胞和體液免疫應(yīng)答;在細胞內(nèi)產(chǎn)生抗原多肽,以天然的構(gòu)象遞呈給免疫識別系統(tǒng),更接近于自然感染;不同的核酸疫苗具有共同的理

【共引文獻】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李文化;Ca～(2+)誘導(dǎo)大腸桿菌攝取外源DNA的研究[D];武漢大學(xué);2004年

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本文編號：1078420