本文關(guān)鍵詞：PPP1R26-AS1調(diào)控單核細胞抗新生隱球菌免疫應(yīng)答及其疾病機制研究

  更多相關(guān)文章： 新生隱球菌病 單核細胞 長鏈非編碼RNA Toll樣受體2

【摘要】：第一部分篩選并鑒定單核細胞抗新生隱球菌免疫應(yīng)答中關(guān)鍵性差異長鏈非編碼RNA本部分將篩選在單核細胞抗新生隱球菌免疫應(yīng)答中差異性表達的長鏈非編碼RNA(LncRNA)。通過密度梯度離心法分離健康人外周血單個核細胞,通過CD14磁珠分選試劑盒分離單核細胞。用熱滅活新生隱球菌刺激單核細胞12hr后,收集RNA,通過去核糖體二代測序技術(shù)篩選并鑒定其中關(guān)鍵性差異基因的表達譜,并用實時熒光定量PCR驗證關(guān)鍵性LncRNA的表達情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與未刺激組相比,刺激組一共存在893個上調(diào)表達基因和349個下調(diào)表達基因;采用GeneOntology分析,其中701 個基因?qū)儆?Biological Process,698 個基因?qū)儆?Molecular Function,751 個基因?qū)儆贑ellular Component。與未刺激組相比,用熱滅活新生隱球菌刺激組中LncRNA PPP1R26-AS1表達明顯下降(P0.05)。納入在上海長海醫(yī)院和上海長征醫(yī)院確診為新生隱球菌病患者(n=20)和同期入院體檢人員作為健康對照(n=20),分離單個核細胞,經(jīng)實時熒光定量PCR檢測PPP1R26-AS1的表達水平,結(jié)果顯示,與健康對照組相比,新生隱球菌病患者外周血單個核細胞中PPP1R26-AS1表達顯著增高(P0.05),且與患者疾病嚴重程度相關(guān)。本部分結(jié)果提示PPP1R26-AS1可能通過影響患者單核細胞抗新生隱球菌免疫應(yīng)答而參與發(fā)病機制。第二部分PPP1R26-AS1負向調(diào)節(jié)熱滅活新生隱球菌誘導(dǎo)單核細胞促炎因子的產(chǎn)生本部分將探討PPP1R26-AS1在單核細胞抗新生隱球菌免疫應(yīng)答中的作用。構(gòu)建PPP1R26-AS1過表達腺病毒載體,并轉(zhuǎn)染入健康人原代單核細胞。通過Agilent Whole Human Genome Oligo Microarray 檢測系統(tǒng)對 ADV-PPP1R26-AS1、ADV-NC、BLANK組mRNA表達譜進行分析后,篩選其中與免疫相關(guān)信號通路有關(guān)的關(guān)鍵分子并用實時熒光定量PCR進行驗證;進一步在新生隱球菌病患者和健康對照組外周血單個核細胞中檢測相關(guān)分子的蛋白表達情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對照組相比,ADV-PPP1R26-AS1組中IL-1B和CCL3水平明顯下降(P0.05)。與健康對照組相比,新生隱球菌病患者血清中IL-1B蛋白水平明顯下降(P0.05),但CCL3差異無統(tǒng)計學(xué)意義。本部分結(jié)果提示PPP1R26-AS1可以抑制新生隱球菌誘導(dǎo)的單核細胞IL-1B的產(chǎn)生。第三部分PPP1R26-AS1通過TLR2負向調(diào)節(jié)熱滅活新生隱球菌誘導(dǎo)單核細胞IL-1B的產(chǎn)生本部分將探討PPP1R26-AS1對新生隱球菌誘導(dǎo)的單核細胞IL-1B產(chǎn)生的調(diào)控機制。采用實時熒光定量PCR檢測過表達PPP1R26-AS1對熱滅活新生隱球菌誘導(dǎo)的健康人原代單核細胞Toll樣受體相關(guān)分子的表達。采用實時熒光定量PCR及western blot檢測新生隱球菌病患者與健康對照組外周血單個核細胞中TLR2信號通路分子的水平。利用TLR2功能獲得與缺失實驗,檢測熱滅活隱球菌誘導(dǎo)后單核細胞IL-1B的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對照組相比,ADV-PPP1R26-AS1組TLR2表達明顯下降(P0.05)。與健康對照組相比,TLR2、MyD88和TRAF6在新生隱球菌病患者中的表達顯著降低(P0.05)。拮抗健康人原代單核細胞TLR2后,熱滅活新生隱球菌誘導(dǎo)的單核細胞IL-1B表達被部分抑制;TLR2激動劑可以部分抵消PPP1R26-AS1對熱滅活新生隱球菌誘導(dǎo)的單核細胞IL-1B的抑制作用(P0.05)。本部分結(jié)果提示PPP1R26-AS1可以通過抑制TLR2表達調(diào)節(jié)新生隱球菌誘導(dǎo)的單核細胞IL-1B的產(chǎn)生。
【關(guān)鍵詞】：新生隱球菌病 單核細胞 長鏈非編碼RNA Toll樣受體2
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R379.5
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-11
• 前言11-13
• 第一部分 篩選并鑒定單核細胞抗新生隱球菌免疫應(yīng)答中關(guān)鍵性差異長鏈非編碼RNA13-30
• 一、材料和方法13-20
• 二、結(jié)果20-28
• 三、討論28-30
• 第二部分 PPP1R26-AS1負向調(diào)節(jié)熱滅活新生隱球菌誘導(dǎo)單核細胞促炎因子的產(chǎn)生30-48
• 一、材料和方法30-43
• 二、結(jié)果43-47
• 三、討論47-48
• 第三部分 PPP1R26-AS1通過TLR2負向調(diào)節(jié)熱滅活新生隱球菌誘導(dǎo)單核細胞IL-1B的產(chǎn)生48-56
• 一、材料和方法48-52
• 二、結(jié)果52-55
• 三、討論55-56
• 參考文獻56-62
• 綜述 單核細胞在抗感染免疫中的研究進展62-75
• 參考文獻67-75
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文目錄75-77
• 致謝77

【參考文獻】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 孔偉;單核細胞抗隱球菌反應(yīng)中“miR-155-IRF2BP2-干擾素”軸的調(diào)控機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

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本文編號：1071519