本文關(guān)鍵詞：PPP1R26-AS1調(diào)控單核細(xì)胞抗新生隱球菌免疫應(yīng)答及其疾病機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 新生隱球菌病 單核細(xì)胞 長鏈非編碼RNA Toll樣受體2

【摘要】：第一部分篩選并鑒定單核細(xì)胞抗新生隱球菌免疫應(yīng)答中關(guān)鍵性差異長鏈非編碼RNA本部分將篩選在單核細(xì)胞抗新生隱球菌免疫應(yīng)答中差異性表達(dá)的長鏈非編碼RNA(LncRNA)。通過密度梯度離心法分離健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞,通過CD14磁珠分選試劑盒分離單核細(xì)胞。用熱滅活新生隱球菌刺激單核細(xì)胞12hr后,收集RNA,通過去核糖體二代測序技術(shù)篩選并鑒定其中關(guān)鍵性差異基因的表達(dá)譜,并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證關(guān)鍵性LncRNA的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與未刺激組相比,刺激組一共存在893個(gè)上調(diào)表達(dá)基因和349個(gè)下調(diào)表達(dá)基因;采用GeneOntology分析,其中701 個(gè)基因?qū)儆?Biological Process,698 個(gè)基因?qū)儆?Molecular Function,751 個(gè)基因?qū)儆贑ellular Component。與未刺激組相比,用熱滅活新生隱球菌刺激組中LncRNA PPP1R26-AS1表達(dá)明顯下降(P0.05)。納入在上海長海醫(yī)院和上海長征醫(yī)院確診為新生隱球菌病患者(n=20)和同期入院體檢人員作為健康對(duì)照(n=20),分離單個(gè)核細(xì)胞,經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測PPP1R26-AS1的表達(dá)水平,結(jié)果顯示,與健康對(duì)照組相比,新生隱球菌病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中PPP1R26-AS1表達(dá)顯著增高(P0.05),且與患者疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。本部分結(jié)果提示PPP1R26-AS1可能通過影響患者單核細(xì)胞抗新生隱球菌免疫應(yīng)答而參與發(fā)病機(jī)制。第二部分PPP1R26-AS1負(fù)向調(diào)節(jié)熱滅活新生隱球菌誘導(dǎo)單核細(xì)胞促炎因子的產(chǎn)生本部分將探討PPP1R26-AS1在單核細(xì)胞抗新生隱球菌免疫應(yīng)答中的作用。構(gòu)建PPP1R26-AS1過表達(dá)腺病毒載體,并轉(zhuǎn)染入健康人原代單核細(xì)胞。通過Agilent Whole Human Genome Oligo Microarray 檢測系統(tǒng)對(duì) ADV-PPP1R26-AS1、ADV-NC、BLANK組mRNA表達(dá)譜進(jìn)行分析后,篩選其中與免疫相關(guān)信號(hào)通路有關(guān)的關(guān)鍵分子并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行驗(yàn)證;進(jìn)一步在新生隱球菌病患者和健康對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞中檢測相關(guān)分子的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比,ADV-PPP1R26-AS1組中IL-1B和CCL3水平明顯下降(P0.05)。與健康對(duì)照組相比,新生隱球菌病患者血清中IL-1B蛋白水平明顯下降(P0.05),但CCL3差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本部分結(jié)果提示PPP1R26-AS1可以抑制新生隱球菌誘導(dǎo)的單核細(xì)胞IL-1B的產(chǎn)生。第三部分PPP1R26-AS1通過TLR2負(fù)向調(diào)節(jié)熱滅活新生隱球菌誘導(dǎo)單核細(xì)胞IL-1B的產(chǎn)生本部分將探討PPP1R26-AS1對(duì)新生隱球菌誘導(dǎo)的單核細(xì)胞IL-1B產(chǎn)生的調(diào)控機(jī)制。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測過表達(dá)PPP1R26-AS1對(duì)熱滅活新生隱球菌誘導(dǎo)的健康人原代單核細(xì)胞Toll樣受體相關(guān)分子的表達(dá)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR及western blot檢測新生隱球菌病患者與健康對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞中TLR2信號(hào)通路分子的水平。利用TLR2功能獲得與缺失實(shí)驗(yàn),檢測熱滅活隱球菌誘導(dǎo)后單核細(xì)胞IL-1B的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,ADV-PPP1R26-AS1組TLR2表達(dá)明顯下降(P0.05)。與健康對(duì)照組相比,TLR2、MyD88和TRAF6在新生隱球菌病患者中的表達(dá)顯著降低(P0.05)。拮抗健康人原代單核細(xì)胞TLR2后,熱滅活新生隱球菌誘導(dǎo)的單核細(xì)胞IL-1B表達(dá)被部分抑制;TLR2激動(dòng)劑可以部分抵消PPP1R26-AS1對(duì)熱滅活新生隱球菌誘導(dǎo)的單核細(xì)胞IL-1B的抑制作用(P0.05)。本部分結(jié)果提示PPP1R26-AS1可以通過抑制TLR2表達(dá)調(diào)節(jié)新生隱球菌誘導(dǎo)的單核細(xì)胞IL-1B的產(chǎn)生。
【關(guān)鍵詞】：新生隱球菌病 單核細(xì)胞 長鏈非編碼RNA Toll樣受體2
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R379.5
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-11
• 前言11-13
• 第一部分 篩選并鑒定單核細(xì)胞抗新生隱球菌免疫應(yīng)答中關(guān)鍵性差異長鏈非編碼RNA13-30
• 一、材料和方法13-20
• 二、結(jié)果20-28
• 三、討論28-30
• 第二部分 PPP1R26-AS1負(fù)向調(diào)節(jié)熱滅活新生隱球菌誘導(dǎo)單核細(xì)胞促炎因子的產(chǎn)生30-48
• 一、材料和方法30-43
• 二、結(jié)果43-47
• 三、討論47-48
• 第三部分 PPP1R26-AS1通過TLR2負(fù)向調(diào)節(jié)熱滅活新生隱球菌誘導(dǎo)單核細(xì)胞IL-1B的產(chǎn)生48-56
• 一、材料和方法48-52
• 二、結(jié)果52-55
• 三、討論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-62
• 綜述 單核細(xì)胞在抗感染免疫中的研究進(jìn)展62-75
• 參考文獻(xiàn)67-75
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文目錄75-77
• 致謝77

【參考文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 孔偉;單核細(xì)胞抗隱球菌反應(yīng)中“miR-155-IRF2BP2-干擾素”軸的調(diào)控機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：1071519