本文關(guān)鍵詞：融合基因CPA-LTB在大腸埃希菌中表達(dá)條件的優(yōu)化

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【摘要】：目的在構(gòu)建含有CPA-LTB融合基因的重組菌株基礎(chǔ)上,對(duì)其表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化,以獲得高效表達(dá)的CPALTB融合蛋白。方法采用限制性內(nèi)切酶酶切鑒定含CPA-LTB融合基因的重組質(zhì)粒pCPA-LTB,然后采用均勻設(shè)計(jì)法對(duì)影響目的蛋白表達(dá)的因素和水平進(jìn)行優(yōu)化:設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案,分別以不同濃度的IPTG和乳糖為誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)融合蛋白的表達(dá),SDS-PAGE檢測(cè)不同條件下融合蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果雙酶切鑒定重組質(zhì)粒含有CPA-LTB融合基因(1700bp),且閱讀框架正確。以IPTG為誘導(dǎo)劑在pH 7.5、誘導(dǎo)溫度31℃、轉(zhuǎn)化菌菌液A600值為1.2、IPTG終濃度0.4mmol/L誘導(dǎo)6h,目的蛋白表達(dá)量最大,占菌體總蛋白相對(duì)含量的54%;以乳糖為誘導(dǎo)劑在pH 6.5、溫度34℃、轉(zhuǎn)化菌菌液A600值為0.6、乳糖終濃度0.1mmol/L誘導(dǎo)6h,融合蛋白的表達(dá)量最大,占菌體總蛋白相對(duì)含量的61%。優(yōu)化前后兩種誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)表達(dá)的蛋白量分別增加63%和42%。結(jié)論 CPA-LTB融合基因表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸埃希菌在優(yōu)化的表達(dá)條件下高效表達(dá)目的蛋白,為研制α毒素基因工程亞單位疫苗奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 大同大學(xué)呼吸病與職業(yè)病研究所;大同大學(xué)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素 不耐熱腸毒素B亞單位 基因融合 基因表達(dá) 優(yōu)化表達(dá)
【基金】：山西大同大學(xué)科研項(xiàng)目(No.2009-Q-19)
【分類號(hào)】：R378.21
【正文快照】： 產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)是引起人類食物中毒和動(dòng)物腸毒血癥、壞死性腸炎的主要病原菌之一,菌體產(chǎn)生的外毒素是其致病因子[1]。目前發(fā)現(xiàn)和鑒定的外毒素有20余種,但起主要作用的毒素只有4種,即α、β、ε和ι。據(jù)此該菌被分為A、B、C、D、E等5個(gè)毒素型,各型均產(chǎn)

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5 李煥婷;多氯聯(lián)苯和多溴聯(lián)苯醚對(duì)非洲爪蟾生長(zhǎng)發(fā)育和性腺發(fā)育的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

6 劉連成;高溫堿性果膠酶菌株的分離、特性研究及果膠酶基因的表達(dá)[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

7 馬強(qiáng);HCMV UL82基因重組質(zhì)粒在HFF中的表達(dá)與純化鑒定[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

8 王德解;羧肽酶B在畢酵母中的表達(dá)、純化與活性鑒定[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2005年

9 李曉霞;Lrrc10蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建及在心肌分化細(xì)胞中的表達(dá)研究[D];西華大學(xué);2006年

10 袁鐵錚;兩種酸性耐熱α-淀粉酶的表達(dá)研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

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