本文關(guān)鍵詞：用大腸桿菌制備O157多糖-菌毛蛋白結(jié)合物的研究

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【摘要】：目的以大腸桿菌O157型多糖與菌毛蛋白PilE為模型,在大腸桿菌中重構(gòu)腦膜炎奈瑟球菌的O-糖基化修飾系統(tǒng),為建立一步生物交聯(lián)法制備多糖-蛋白結(jié)合疫苗技術(shù)提供基礎(chǔ)。方法用Red重組技術(shù)敲除大腸桿菌W3110的O抗原連接酶基因waaL,構(gòu)建CLM24菌株。在該菌株中共表達(dá)腦膜炎奈瑟球菌菌毛蛋白基因pilE、寡糖轉(zhuǎn)移酶基因pglL,構(gòu)建O-糖基化修飾系統(tǒng)。分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌鼠李糖轉(zhuǎn)移酶基因wbbL與大腸桿菌O157型多糖表達(dá)載體于構(gòu)建了O-糖基化修飾系統(tǒng)的大腸桿菌,再利用Western印跡檢測(cè)菌毛蛋白PilE的修飾情況。結(jié)果利用抗His-tag單抗進(jìn)行Western印跡檢測(cè),16℃IPTG誘導(dǎo)條件下,轉(zhuǎn)化大腸桿菌鼠李糖轉(zhuǎn)移酶基因wbbL于構(gòu)建了O-糖基化修飾系統(tǒng)的大腸桿菌,重組菌CLM24/pMMB66EH-pilE-his/pETtac28-wbbL-pglL與其他對(duì)照菌相比,不僅在相對(duì)分子質(zhì)量為19×103處有特異性條帶,而且在相對(duì)分子質(zhì)量(40～60)×103處也出現(xiàn)了特異的梯狀條帶;轉(zhuǎn)化大腸桿菌O157的O多糖基因簇克隆載體于構(gòu)建了O-糖基化修飾系統(tǒng)的大腸桿菌,重組菌CLM24/pMMB66EHpilE-his/pETtac28-pglL/pACYC184-O157用抗O157多抗和抗His-tag單抗進(jìn)行Western印跡檢測(cè),在相對(duì)分子質(zhì)量(40～60)×103處均產(chǎn)生特異的梯狀條帶。結(jié)論在大腸桿菌中重建的O-糖基化修飾系統(tǒng)可以利用自身的O16型O多糖或異源的O157型O多糖修飾菌毛蛋白PilE,獲得多糖-蛋白結(jié)合物。本研究為建立一步生物交聯(lián)法制備多糖-蛋白結(jié)合疫苗提供了技術(shù)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所;
【關(guān)鍵詞】： 奈瑟球菌 腦膜炎 O-糖基化修飾系統(tǒng) PilE PglL 大腸桿菌 O型多糖基因簇 多糖-蛋白結(jié)合疫苗
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31200082)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 在細(xì)菌疫苗研制領(lǐng)域,多糖疫苗一直占據(jù)著重要位置。然而,多糖作為T細(xì)胞非依賴型抗原,免疫原性較弱[1]。目前,多糖疫苗的研究重點(diǎn)已轉(zhuǎn)向更有優(yōu)勢(shì)的多糖-蛋白結(jié)合疫苗[2,3],但其制備多為化學(xué)方法,存在修飾產(chǎn)物不均一和成本高的缺陷[3,4]。近年來,在細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)了多種蛋白質(zhì)糖基化

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 李艷青;夏海波;張修國(guó);;辣椒疫霉(Phytophthora capsici)多聚半乳糖醛酸酶PCIPG2N-糖基化突變體的構(gòu)建與表達(dá)分析[J];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年05期

2 白國(guó)旺;朱力;王恒j;;病原細(xì)菌糖蛋白研究進(jìn)展[J];軍事醫(yī)學(xué);2013年10期

3 潘超;朱力;王恒j;;病原細(xì)菌多糖疫苗和多糖結(jié)合疫苗研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通訊;2013年05期

4 馬中瑞;韓東雷;趙駿菲;陳夢(mèng)琳;陳敏;;利用大腸桿菌生產(chǎn)N-糖蛋白和糖蛋白疫苗的研究進(jìn)展[J];中國(guó)生物工程雜志;2013年11期

5 王雯;孫鵬;徐敏銳;徐威;吳軍;;病原菌多糖基因簇在大腸桿菌中的克隆[J];生物技術(shù)通訊;2014年06期

6 鄭恒光;陳君琛;湯葆莎;吳俐;翁敏R，

本文編號(hào)：1062566