本文關(guān)鍵詞：抗人軟骨寡聚基質(zhì)蛋白單克隆抗體的研制及表位鑒定

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【摘要】：目的:為了揭示循環(huán)血液中存在的軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(Cartilage Oligomeric Matrix Protein,COMP)片段,探索COMP逃避自身免疫耐受的途徑及機制,需制備高效、專一的識別COMP不同結(jié)構(gòu)域的單克隆抗體。方法:利用真核表達系統(tǒng)對人COMP進行了一系列的表達、并用親和層析法結(jié)合離子交換層析法進行純化。純化的COMP為抗原免疫BALB/c小鼠,采用雜交瘤技術(shù)結(jié)合有限稀釋傳代法篩選得到穩(wěn)定分泌抗人COMP單克隆抗體的雜交瘤細胞株,用COMP單結(jié)構(gòu)域片段結(jié)合生物信息學(xué)方法分析鑒定單克隆抗體結(jié)合表位。用不同種屬來源的COMP分析單克隆抗體結(jié)合表位的保守性。結(jié)果:COMP及單結(jié)構(gòu)域片段為分泌到細胞外的可溶性分子利于蛋白的純化,篩選獲得4株穩(wěn)定分泌抗人COMP單克隆抗體細胞株,4株單克隆抗體的亞型為IgG1,經(jīng)COMP單結(jié)構(gòu)域片段檢測證明4株單克隆抗體識別不同的表位,表位預(yù)測軟件初步確定4株單克隆抗體識別表位所在區(qū)域,間接ELISA及免疫組化證實其中3株單克隆抗體與不同種屬來源的COMP有較好的結(jié)合特性。結(jié)論:成功制備了4株識別不同表位的抗COMP單克隆抗體,為揭示血液中存在的COMP片段和進一步研究COMP逃避自身免疫耐受機理提供了研究工具。
【作者單位】： 華中師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院
【關(guān)鍵詞】： 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白 單克隆抗體 表位 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.30972693) 38批留學(xué)回國人員啟動基金 中央高校基本科研業(yè)務(wù)費專項資金(CCNU11A02011)等基金資助
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種以慢性關(guān)節(jié)損害為主要表現(xiàn)并可累及全身各器官的復(fù)雜綜合癥,RA發(fā)病的自身免疫學(xué)說已被國內(nèi)外廣大學(xué)者所普遍接受。自身靶抗原的發(fā)現(xiàn)、自身抗體的存在以及與MHCⅡ類分子的某些等位基因型(如HLA-DRB1*0401、DRB1*0404、DRB1*0408

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本文編號：1059783