本文關(guān)鍵詞：單鏈抗體2F5和4E10的原核表達(dá)、純化和鑒定

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【摘要】：為深入研究2F5和4E10抗體,構(gòu)建了特異性識(shí)別HIV-1病毒MPER區(qū)域的2F5和4E10單鏈抗體的重組質(zhì)粒,進(jìn)行了融合蛋白的表達(dá)、純化及鑒定。利用重疊PCR擴(kuò)增及基因重組技術(shù),獲得2F5-scFv和4E10-scFv基因,將其插入原核表達(dá)載體pET-28a(+)上,獲得表達(dá)質(zhì)粒。轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)及Rosetta-gami2(DE3)pLysS中,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE檢測(cè)發(fā)現(xiàn),2F5-scFv和4E10-scFv在兩種表達(dá)菌中均以包涵體形式存在,重組蛋白分子量分別約為27 kD、29 kD。變性條件下,利用鎳離子螯合層析方法對(duì)包涵體蛋白進(jìn)行純化,經(jīng)復(fù)性后獲得可溶性單鏈抗體。ELISA檢測(cè)表明,制備的單鏈抗體與原核和真核表達(dá)的MPER抗原都有特異性結(jié)合活性。
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： HIV- gp MPER F E 單鏈抗體
【基金】：教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才計(jì)劃(NCET-09-0625)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 自1981年美國(guó)發(fā)現(xiàn)首例由HIV-1型引發(fā)的艾滋病病例以來(lái),至2010年為止,全球有近6 500萬(wàn)人感染了艾滋病[1]。艾滋病已成為危害全球的一種嚴(yán)重傳染性疾病[2],但是目前尚無(wú)有效的治療方法。HIV-1的包膜蛋白gp41包含大量特異性的抗原表位,是一種良好的早期診斷HIV感染的抗原標(biāo)志物[3

【參考文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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4 吳沁航;王彤;張_";張娟;王e，

本文編號(hào)：1054129