本文關鍵詞：單鏈抗體2F5和4E10的原核表達、純化和鑒定

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【摘要】：為深入研究2F5和4E10抗體,構(gòu)建了特異性識別HIV-1病毒MPER區(qū)域的2F5和4E10單鏈抗體的重組質(zhì)粒,進行了融合蛋白的表達、純化及鑒定。利用重疊PCR擴增及基因重組技術,獲得2F5-scFv和4E10-scFv基因,將其插入原核表達載體pET-28a(+)上,獲得表達質(zhì)粒。轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)及Rosetta-gami2(DE3)pLysS中,IPTG誘導表達,SDS-PAGE檢測發(fā)現(xiàn),2F5-scFv和4E10-scFv在兩種表達菌中均以包涵體形式存在,重組蛋白分子量分別約為27 kD、29 kD。變性條件下,利用鎳離子螯合層析方法對包涵體蛋白進行純化,經(jīng)復性后獲得可溶性單鏈抗體。ELISA檢測表明,制備的單鏈抗體與原核和真核表達的MPER抗原都有特異性結(jié)合活性。
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學生命科學學院;
【關鍵詞】： HIV- gp MPER F E 單鏈抗體
【基金】：教育部新世紀優(yōu)秀人才計劃(NCET-09-0625)
【分類號】：R392
【正文快照】： 自1981年美國發(fā)現(xiàn)首例由HIV-1型引發(fā)的艾滋病病例以來,至2010年為止,全球有近6 500萬人感染了艾滋病[1]。艾滋病已成為危害全球的一種嚴重傳染性疾病[2],但是目前尚無有效的治療方法。HIV-1的包膜蛋白gp41包含大量特異性的抗原表位,是一種良好的早期診斷HIV感染的抗原標志物[3

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【相似文獻】

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本文編號：1054129