本文關(guān)鍵詞：人去唾液酸糖蛋白受體單克隆抗體制備及其初步應(yīng)用

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【摘要】：目的制備人去唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)的小鼠單克隆抗體,并應(yīng)用該抗體檢測(cè)ASGPR在細(xì)胞系和組織中的表達(dá)。方法對(duì)ASGPR H1大亞基進(jìn)行序列分析,選取ASGPR1全長(zhǎng)序列制備免疫原。通過(guò)RT-PCR合成ASGPR1cDNA,構(gòu)建ASGPR1表達(dá)重組載體,在E.coli BL21中表達(dá)后純化,獲得目的抗原。應(yīng)用傳統(tǒng)融合雜交瘤技術(shù)制備小鼠單克隆抗體,常規(guī)檢測(cè)單抗亞類和效價(jià),競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)鑒定單抗特異性。用流式細(xì)胞術(shù)和免疫組織化學(xué)法分別檢測(cè)ASGPR在多種肝源性與非肝源性細(xì)胞系以及多種肝組織中的表達(dá)。結(jié)果制備的單克隆抗體亞型為IgG1,效價(jià)達(dá)1鐩12 800。競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該單抗具有很好的ASGPR結(jié)合特異性,而且識(shí)別的肽段位于ASGPR胞外段。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,ASGPR不同程度地表達(dá)于肝源性細(xì)胞系,但不表達(dá)于非肝源性細(xì)胞系。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示,ASGPR專一性表達(dá)于正常肝組織和肝癌組織,在肝癌組織的表達(dá)與分化程度有關(guān),高分化肝癌中的陽(yáng)性率高于低分化肝癌(75.0%vs 28.6%,P0.05)。結(jié)論成功制備高特異性人ASGPR小鼠單克隆抗體,適用于用流式細(xì)胞術(shù)和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)ASGPR表達(dá),可用于臨床病理鑒定原發(fā)性肝癌與轉(zhuǎn)移性肝癌。
【作者單位】： 蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部臨床醫(yī)學(xué)院;第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院分子腫瘤研究室;
【關(guān)鍵詞】： 去唾液酸糖蛋白受體 單克隆抗體 肝腫瘤 流式細(xì)胞術(shù) 免疫組織化學(xué)
【基金】：國(guó)家傳染病重大專項(xiàng)課題(2012ZX10002012-010) 國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(“863”計(jì)劃,2007AA02Z461) 國(guó)家自然科學(xué)基金(81172207,81272669)~~
【分類號(hào)】：R392.1
【正文快照】： 去唾液酸糖蛋白受體(asialoglycoprotein recep-tor,ASGPR)又稱肝凝集素或肝糖凝集蛋白[1],專一性表達(dá)于肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞表面,主要生理功能為清除外周血循環(huán)中含有D-半乳糖殘基或N-乙酰半乳糖胺殘基的糖蛋白、脂蛋白和凋亡細(xì)胞[1-2]。鑒于其肝細(xì)胞表達(dá)特異性及獨(dú)特的生理功能,ASGPR

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 杜雪梅;唐麗;任飛W，

本文編號(hào)：1044541