發(fā)布時(shí)間：2017-10-16 18:38

  本文關(guān)鍵詞：粉塵螨變應(yīng)原DerfMag29的克隆、表達(dá)及生物信息學(xué)分析

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【摘要】：提取粉塵螨總RNA,根據(jù)GenBank中的序列(登錄號(hào)為AY283281.1)設(shè)計(jì)并合成引物,RT-PCR擴(kuò)增Mag 29全長(zhǎng)基因,克隆至pCold TF DNA載體,轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌(E.coli)JM109,取陽(yáng)性克隆測(cè)序鑒定。將pCold TF-Mag 29質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至BL21,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)驗(yàn)證表達(dá)產(chǎn)物,采用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)Mag 29的結(jié)構(gòu)、理化特性和生物進(jìn)化關(guān)系。RT-PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果顯示,在429 bp處有一條帶,與Mag 29基因大小一致,測(cè)序鑒定表明質(zhì)粒構(gòu)建成功。SDS-PAGE結(jié)果顯示,表達(dá)產(chǎn)物的全細(xì)胞、上清和沉淀物中均有相對(duì)分子質(zhì)量(M r)為63 000的蛋白表達(dá),與預(yù)測(cè)值一致,其中上清中蛋白表達(dá)量高于沉淀。生物信息學(xué)分析顯示,該蛋白是由142個(gè)氨基酸組成的M r15 100的分子,二級(jí)結(jié)構(gòu)由α螺旋(55.63%)、延伸主鏈(3.52%)和無(wú)規(guī)則卷曲(40.85%)組成,是親水性細(xì)胞質(zhì)蛋白,與熱休克蛋白70家族具有較高同源性。
【作者單位】： 鹽城衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 粉塵螨 變應(yīng)原 生物信息學(xué)
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.31272369,81001330,30660166)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R384.4
【正文快照】： 塵螨是室內(nèi)變應(yīng)原的最主要來(lái)源之一,與哮喘、過(guò)敏性皮炎等過(guò)敏性疾病的發(fā)生密切相關(guān)。其中與人類(lèi)過(guò)敏性疾病關(guān)系最為密切的有屋塵螨(Dermatophagoides pteronyssinus)和粉塵螨(Dermatophagoides farinae)。國(guó)內(nèi)關(guān)于粉塵螨主要變應(yīng)原1類(lèi)、2類(lèi)變應(yīng)原相關(guān)研究較多[1,2],本課題組

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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1 鐘建敏,溫廷桓;粉塵螨變應(yīng)原的提純及其物理化學(xué)特征鑒定[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;1993年03期

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本文編號(hào)：1044318