發(fā)布時間：2017-10-14 11:29

  本文關(guān)鍵詞：表達(dá)人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc的CHO-DG44細(xì)胞的培養(yǎng)溫度優(yōu)化研究

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【摘要】：目的優(yōu)化表達(dá)人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc(TNFR-Fc)融合蛋白的重組CHO-DG44細(xì)胞的培養(yǎng)溫度,并考察該細(xì)胞株在最佳溫度放大培養(yǎng)下純化后的產(chǎn)物純度及活性。方法采用批次培養(yǎng)方式,將重組中國倉鼠卵巢細(xì)胞培養(yǎng)于37℃、37℃轉(zhuǎn)31℃、31℃3種不同的溫度下,每日取樣檢測細(xì)胞密度、細(xì)胞活率、葡萄糖濃度、乳酸濃度、人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc融合蛋白濃度,并選擇最佳的培養(yǎng)溫度對重組中國倉鼠卵巢細(xì)胞進(jìn)行放大(10、50、200 mL、2 L)培養(yǎng),所得培養(yǎng)上清經(jīng)Protein A親和色譜柱純化,并采用SDS-PAGE,SE-HPLC,WST-8對人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc融合蛋白進(jìn)行相對分子質(zhì)量,純度和生物活性檢測。結(jié)果研究發(fā)現(xiàn),37℃轉(zhuǎn)31℃的轉(zhuǎn)溫度培養(yǎng)條件可在保持高密度活細(xì)胞的同時維持細(xì)胞活率,延長培養(yǎng)周期,顯著提高人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc融合蛋白產(chǎn)量,并且該轉(zhuǎn)溫度培養(yǎng)工藝可成功地應(yīng)用于重組CHO細(xì)胞的規(guī)模放大培養(yǎng)中。純化后的人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc融合蛋白相對分子質(zhì)量約為150×103,純度在93%以上,生物活性檢測顯示其可中和重組人腫瘤壞死因子α的細(xì)胞毒效應(yīng)。結(jié)論相比單一的37℃培養(yǎng)條件,37℃轉(zhuǎn)31℃的轉(zhuǎn)溫度培養(yǎng)工藝可明顯提高重組CHO-DG44細(xì)胞的人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc融合蛋白表達(dá)量,且該工藝具有可放大性,這為該工藝的更大規(guī)模應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 暨南大學(xué)生物醫(yī)藥研究開發(fā)基地;暨南大學(xué)藥學(xué)院;暨南大學(xué)基因藥物國家工程中心;暨南大學(xué)廣東省生物工程藥物重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 腫瘤壞死因子 人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc融合蛋白 溫度 規(guī)模放大
【基金】：國家重大新藥創(chuàng)制資助項目(2012ZX09103301-033,2012ZX09202301) 暨南大學(xué)科研培育與創(chuàng)新基金杰出人才培育資助項目(1161-1206) 抗體規(guī)模制備技術(shù)及腫瘤抗體藥物的研究(2010U1-E00541)
【分類號】：R392.1
【正文快照】： 近年來,生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展,使得大規(guī)模哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)廣受關(guān)注。中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)因其表達(dá)的蛋白無論是在分子結(jié)構(gòu)還是在生物學(xué)方面都類似于天然蛋白分子,因而被視為重組蛋白藥物生產(chǎn)的首選宿主細(xì)胞[1]。但是,由于受細(xì)胞株、載體以及培養(yǎng)工藝的影響,重組CH

【共引文獻(xiàn)】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 范里;GS-CHO細(xì)胞無血清培養(yǎng)過程的開發(fā)與優(yōu)化[D];華東理工大學(xué);2010年

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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2 覃魯寧;成年大鼠下丘腦POAH區(qū)神經(jīng)元L-型鈣通道全細(xì)胞電流特性及溫度敏感性[D];中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué);2003年

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5 徐江;大鼠DAF功能區(qū)的重組表達(dá)純化和功能鑒定[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

6 李飛;不同腦溫對樹，

本文編號：1030828