本文關(guān)鍵詞：表達(dá)人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc的CHO-DG44細(xì)胞的培養(yǎng)溫度優(yōu)化研究

  更多相關(guān)文章： 腫瘤壞死因子 人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc融合蛋白 溫度 規(guī)模放大

【摘要】：目的優(yōu)化表達(dá)人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc(TNFR-Fc)融合蛋白的重組CHO-DG44細(xì)胞的培養(yǎng)溫度,并考察該細(xì)胞株在最佳溫度放大培養(yǎng)下純化后的產(chǎn)物純度及活性。方法采用批次培養(yǎng)方式,將重組中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞培養(yǎng)于37℃、37℃轉(zhuǎn)31℃、31℃3種不同的溫度下,每日取樣檢測(cè)細(xì)胞密度、細(xì)胞活率、葡萄糖濃度、乳酸濃度、人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc融合蛋白濃度,并選擇最佳的培養(yǎng)溫度對(duì)重組中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞進(jìn)行放大(10、50、200 mL、2 L)培養(yǎng),所得培養(yǎng)上清經(jīng)Protein A親和色譜柱純化,并采用SDS-PAGE,SE-HPLC,WST-8對(duì)人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc融合蛋白進(jìn)行相對(duì)分子質(zhì)量,純度和生物活性檢測(cè)。結(jié)果研究發(fā)現(xiàn),37℃轉(zhuǎn)31℃的轉(zhuǎn)溫度培養(yǎng)條件可在保持高密度活細(xì)胞的同時(shí)維持細(xì)胞活率,延長(zhǎng)培養(yǎng)周期,顯著提高人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc融合蛋白產(chǎn)量,并且該轉(zhuǎn)溫度培養(yǎng)工藝可成功地應(yīng)用于重組CHO細(xì)胞的規(guī)模放大培養(yǎng)中。純化后的人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc融合蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約為150×103,純度在93%以上,生物活性檢測(cè)顯示其可中和重組人腫瘤壞死因子α的細(xì)胞毒效應(yīng)。結(jié)論相比單一的37℃培養(yǎng)條件,37℃轉(zhuǎn)31℃的轉(zhuǎn)溫度培養(yǎng)工藝可明顯提高重組CHO-DG44細(xì)胞的人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc融合蛋白表達(dá)量,且該工藝具有可放大性,這為該工藝的更大規(guī)模應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 暨南大學(xué)生物醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)基地;暨南大學(xué)藥學(xué)院;暨南大學(xué)基因藥物國(guó)家工程中心;暨南大學(xué)廣東省生物工程藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 腫瘤壞死因子 人腫瘤壞死因子受體Ⅱ-Fc融合蛋白 溫度 規(guī)模放大
【基金】：國(guó)家重大新藥創(chuàng)制資助項(xiàng)目(2012ZX09103301-033,2012ZX09202301) 暨南大學(xué)科研培育與創(chuàng)新基金杰出人才培育資助項(xiàng)目(1161-1206) 抗體規(guī)模制備技術(shù)及腫瘤抗體藥物的研究(2010U1-E00541)
【分類號(hào)】：R392.1
【正文快照】： 近年來(lái),生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展,使得大規(guī)模哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)廣受關(guān)注。中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)因其表達(dá)的蛋白無(wú)論是在分子結(jié)構(gòu)還是在生物學(xué)方面都類似于天然蛋白分子,因而被視為重組蛋白藥物生產(chǎn)的首選宿主細(xì)胞[1]。但是,由于受細(xì)胞株、載體以及培養(yǎng)工藝的影響,重組CH

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 范里;GS-CHO細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)過(guò)程的開(kāi)發(fā)與優(yōu)化[D];華東理工大學(xué);2010年

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 官浩,賈赤宇,陳璧,孟慶延,何飛,駱寧;不同復(fù)溫溫度對(duì)-10℃處理的體外培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞形態(tài)和Ⅰ型膠原代謝的影響[J];中華燒傷雜志;2005年05期

2 嚴(yán)鈺鋒;李滬生;李慈珍;劉遠(yuǎn)謀;;溫度對(duì)心臟自律性的影響機(jī)制[J];心臟雜志;2006年02期

3 李執(zhí)如;周英;張溶;呂文彬;高加良;江波;楊群身;;溫度時(shí)間對(duì)馬來(lái)酰亞胺苯甲胺酯聚乙二醇遮蔽Rh抗原的影響[J];中國(guó)輸血雜志;2007年06期

4 裴俊瑞;周令望;劉明法;閆麗佳;李少臣;陳潔;張輝;車承波;王銅;;采用析因設(shè)計(jì)分析時(shí)間和溫度對(duì)血中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力的影響[J];中國(guó)地方病防治雜志;2008年06期

5 趙小平;余紅;黃燕;稅青林;;外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)及染色體G顯帶標(biāo)本制備技術(shù)的改良[J];中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志;2009年06期

6 柯俊龍;許志恩;李華;陳靜娟;;較高溫度下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的復(fù)蘇率及復(fù)蘇后分化[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2010年27期

7 劉云霞;董承紅;王麗春;吳練秋;管瑩;劉龍丁;李琦涵;;不同溫度培養(yǎng)的3株EV71毒株的增殖動(dòng)力學(xué)分析[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2010年09期

8 代秀松;肖玉周;吳敏;徐偉;;冷凍預(yù)處理溫度對(duì)胎兔許旺細(xì)胞免疫原性的影響[J];骨科;2011年01期

9 李剛;賈方榮;林凌;萬(wàn)里;;不同物理因子對(duì)紅細(xì)胞作用的研究現(xiàn)狀與展望[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜志;2007年03期

10 袁霖;馬麗英;鄧素英;紀(jì)燕;邵一鳴;;HIV病毒對(duì)溫度敏感性的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)自然醫(yī)學(xué)雜志;2008年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 趙敬國(guó);李建文;;溫度對(duì)蟾蜍腓腸肌收縮能力的影響[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第21屆全國(guó)代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2002年

2 曾廣春;馮占軍;李春梅;;適宜的溫度有助于脫鈣[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

3 安蓓;陳卓;李仁德;;溫度對(duì)荒漠沙蜥體內(nèi)肝臟組織中SOD活性的影響[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第六屆應(yīng)用生理學(xué)委員會(huì)全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

4 王瓞;宣海星;景乃禾;林其誰(shuí);;影響SA陽(yáng)離子脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染效率的因素[A];第七屆全國(guó)生物膜學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編[C];1999年

5 朱華;張兵林;高虹;黃瀾;秦川;;從陳舊組織標(biāo)本中提取DNA用于制備組織原位雜交探針[A];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)青年科技協(xié)會(huì)第二屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2001年

6 錢(qián)民全;趙篤鳳;彭榮蕤;錢(qián)大興;蕭藍(lán);;血栓形成中的激發(fā)機(jī)理和血液成分的作用探討[A];全國(guó)第九屆生物力學(xué)和流變學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2001年

7 張純清;李聯(lián)祥;;改良無(wú)味標(biāo)本保存液研制及應(yīng)用[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

8 鄒飛;蔡春青;;鉀離子通道參與SD大鼠下丘腦神經(jīng)元熱敏感性發(fā)育分化的研究[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第六屆應(yīng)用生理學(xué)委員會(huì)全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 清華大學(xué)第一附屬醫(yī)院 張東亞;腦保護(hù)研究有進(jìn)展[N];健康報(bào);2007年

2 董飛俠;人為何出汗[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2007年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 姚成燦;900 MHz電磁波和有關(guān)理化因素對(duì)人紅細(xì)胞的即時(shí)作用[D];暨南大學(xué);2004年

2 蔡春青;鉀通道參與SD大鼠出生后下丘腦神經(jīng)元興奮性發(fā)育的研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 關(guān)維;原子力顯微鏡對(duì)正常細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞及加熱后細(xì)胞的細(xì)胞膜表面形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2005年

2 覃魯寧;成年大鼠下丘腦POAH區(qū)神經(jīng)元L-型鈣通道全細(xì)胞電流特性及溫度敏感性[D];中國(guó)人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué);2003年

3 朱亮;人卵母細(xì)胞紡錘體的觀測(cè)在人類輔助生殖領(lǐng)域的初步臨床應(yīng)用[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

4 盧靖;重稀堿金屬Rb～+/Cs～+與人紅細(xì)胞的相互作用及其跨膜途徑的研究[D];陜西師范大學(xué);2006年

5 徐江;大鼠DAF功能區(qū)的重組表達(dá)純化和功能鑒定[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

6 李飛;不同腦溫對(duì)樹(shù)，

本文編號(hào)：1030828