發(fā)布時(shí)間：2017-10-13 11:05

  本文關(guān)鍵詞：穩(wěn)定表達(dá)HBx的肝前體細(xì)胞株的構(gòu)建及其對(duì)增殖的影響

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【摘要】：目的構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前體細(xì)胞株,檢測(cè)對(duì)肝前體細(xì)胞增殖,細(xì)胞周期及Wnt/β-catenin信號(hào)通路的影響。方法重組質(zhì)粒pSEB-Flag-HBx與包裝質(zhì)粒pAmpho共同轉(zhuǎn)染人胚胎腎上皮細(xì)胞系293T細(xì)胞,包裝獲得攜帶HBx基因的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒,并感染小鼠肝前體細(xì)胞HP14.5,稻瘟菌素(blasticidin)篩選出穩(wěn)定表達(dá)HBx基因的細(xì)胞克隆并擴(kuò)大培養(yǎng)(HP14.5/HBx組),設(shè)HP14.5/Rv(空質(zhì)粒pSEEB-Flag感染組)及空細(xì)胞組HP14.5組為對(duì)照組。MTS比色法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖活力,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期中各時(shí)相所占的比例,熒光定量PCR檢測(cè)cyclin D1和c-myc mRNA的表達(dá)量,Western blot法檢測(cè)HBx、GSK3β、p-GSK3β(ser-9)、β-catenin、cyclin D1以及c-myc等蛋白的表達(dá)。結(jié)果 RT-PCR和Westernblot法檢測(cè)到HBx基因和蛋白陽性表達(dá),與對(duì)照組相比,HP14.5/HBx細(xì)胞增殖活力顯著增加(P0.05);G1細(xì)胞比例明顯減少(P0.05),S期和G2細(xì)胞比例顯著升高(P0.05);cyclin D1和c-myc mRNA的表達(dá)量顯著升高(P0.05);GSK3β蛋白水平表達(dá)無明顯變化(P0.05),p-GSK3β、β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白的表達(dá)水平顯著升高(P0.05)。結(jié)論成功篩選出穩(wěn)定表達(dá)HBx的肝前體細(xì)胞株,HBx通過活化Wnt/β-catenin信號(hào)途徑促進(jìn)肝前體細(xì)胞的增殖。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心;重慶醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)遺傳學(xué)教研室;重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 乙型肝炎病毒X蛋白 肝前體細(xì)胞 細(xì)胞增殖 wnt/β-catenin信號(hào)途徑
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81071770,81201679)
【分類號(hào)】：R363
【正文快照】： 近年來,越來越多的研究證實(shí),乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)與原發(fā)性肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的發(fā)生,轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)有著密切的關(guān)系,這個(gè)過程中所涉及的機(jī)制尚不清楚[1]。HBV基因組包括4個(gè)開放閱讀框(S、C、P、X),其中HBx是一個(gè)多功能蛋白,影響宿主細(xì)胞的增殖、

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉蔚,王建軍,成軍,張連峰,紀(jì)冬,劉妍,郭江;乙型肝炎病毒X蛋白上調(diào)白細(xì)胞介素-18基因的表達(dá)[J];中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志;2004年03期

2 張p，

本文編號(hào)：1024490