本文關(guān)鍵詞：Ⅰ、Ⅱ型膠原酶分離心肌細胞的效果比較及分析

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【摘要】：目的比較Ⅰ型和Ⅱ膠原酶對大鼠心肌細胞分離的分離效果,并對其成因進行分析。方法利用Ⅰ、Ⅱ型膠原酶分別消化心肌組織,比較兩種酶對心肌細胞的分離效果;采用免疫組織化學、免疫熒光和Western blotting技術(shù)檢測成年大鼠心肌組織中是否存在Ⅱ型膠原;用大鼠劍突軟骨部組織的Ⅱ型膠原和心肌組織的Ⅲ型膠原作為陽性對照;用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測Ⅱ型膠原酶試劑的成分。結(jié)果Ⅰ、Ⅱ型膠原酶分別消化心肌組織,所獲心肌細胞數(shù)量分別為(5.66±0.83)×106和(5.61±1.01)×106,心肌細胞存活率分別為(74.17±6.27)%及(75.50±9.07)%,兩者差異無顯著性。分離的心肌細胞大部分不搏動,極少數(shù)細胞保持自律性收縮;Ⅱ型膠原在成年大鼠心肌組織中呈陰性表達,在劍突的軟骨組織中呈陽性表達,Ⅲ型膠原在心肌組織中呈陽性表達;Western blotting檢測顯示,心肌組織中并無Ⅱ型膠原表達;SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果顯示,Ⅱ型膠原酶試劑是一種包括5種蛋白的混合物。結(jié)論成年大鼠心肌組織中無Ⅱ型膠原,用Ⅱ型膠原酶分離大鼠心肌細胞不具有針對性。
【作者單位】： 新鄉(xiāng)醫(yī)學院 河南省醫(yī)用組織再生重點實驗室;新鄉(xiāng)醫(yī)學院第三附屬醫(yī)院腫瘤科;
【關(guān)鍵詞】： Ⅱ型膠原酶 Ⅱ型膠原 心肌 免疫組織化學 免疫熒光 大鼠
【基金】：河南省21世紀優(yōu)秀人才支持計劃資助項目(2005HANCET215) 河南省重點攻關(guān)資助項目(072102310012)
【分類號】：R329
【正文快照】： 心肌細胞外基質(zhì)是心肌組織的重要組成部分,它們對心肌細胞的生長、分化等發(fā)揮重要作用[1]。心肌細胞外基質(zhì)的主要成分包括:結(jié)構(gòu)蛋白(膠原蛋白、彈性蛋白等)、黏連蛋白(層黏連蛋白、纖黏連蛋白等)、蛋白聚糖等[2~5]。其中,膠原是細胞外基質(zhì)中含量最豐富的成分,在成年動物心臟中

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【相似文獻】

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本文編號：1016329