本文關(guān)鍵詞：周期型馬來絲蟲復(fù)合基因真核表達(dá)體系的建立

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【摘要】：目的將含周期型馬來絲蟲3-磷酸甘油醛脫氫酶(BmGAPDH)和半胱氨酸蛋白酶抑制劑(BmCPI)復(fù)合基因的重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH轉(zhuǎn)染人宮頸癌細(xì)胞(Hela)細(xì)胞獲得復(fù)合重組質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,并純化所表達(dá)的重組蛋白,為研制新型的抗周期型馬來絲蟲重組蛋白疫苗提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法將成功構(gòu)建的pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH和空載體pcDNA3.1(+)分別轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,以G418篩選轉(zhuǎn)染細(xì)胞,進(jìn)而通過RT-PCR和SDS-PAGE鑒定G418篩選后的單克隆抗性細(xì)胞株。對(duì)陽性克隆進(jìn)行無血清懸浮培養(yǎng),收集細(xì)胞及其培養(yǎng)液。親和層析純化所表達(dá)的重組蛋白并通過Western-blotting對(duì)純化的重組蛋白進(jìn)行生物學(xué)鑒定。結(jié)果重組真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH經(jīng)轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,G418持續(xù)篩選14 d獲得穩(wěn)定表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Western-blotting法鑒定能夠與相應(yīng)的免疫鼠血清反應(yīng),相對(duì)分子質(zhì)量Mr約為54×103。結(jié)論成功建立了周期型馬來絲蟲復(fù)合重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株并獲得了相應(yīng)的重組蛋白。
【作者單位】： 南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 周期型馬來絲蟲 -磷酸甘油醛脫氫酶 半胱氨酸蛋白酶抑制劑 復(fù)合基因 重組蛋白
【基金】：江蘇省高等學(xué)校大學(xué)生實(shí)踐創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(2012JSSPITP1571) 南通市應(yīng)用研究計(jì)劃(BK2012017)
【分類號(hào)】：R382
【正文快照】： 絲蟲病是一種嚴(yán)重危害人類健康的寄生蟲病,世界上在超過100個(gè)國家和地區(qū)流行,11億人口受到感染的威脅,其中慢性絲蟲病患者4 000萬[1,2],在我國目前已基本消除絲蟲病,但由于全球氣候變暖,傳播媒介廣泛存在,加之大量外來流動(dòng)人口的涌入,尤其是沿海經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū),外來務(wù)工者中較多

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 黃為群;方政;陳陽;姜聲揚(yáng);吳建軍;謝東方;;周期型馬來絲蟲半胱氨酸蛋白酶基因的擴(kuò)增、克隆及序列分析[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2007年13期

2 張賽楠;方政;童海燕;方浩;謝東方;黃為群;徐邦生;;周期型馬來絲蟲GAPDH部分編碼基因原核及真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2010年22期

3 傅斌,李桂玲,胡穎新,曹新春,孫傳紅,李懷菊;輸入性傳染源對(duì)山東省消除絲蟲病影響的調(diào)查[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2003年02期

4 張賢昌;黃少玉;鄧卓暉;歐作炎;伍衛(wèi)平;駱雄才;陳錫欣;張啟明;林榮幸;阮彩文;王金龍;崔惠兒;;廣東省輸入性絲蟲病病例調(diào)查[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2008年06期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 李錦輝;;淺談廣西消除瘧疾病例偵查和病灶處置措施[J];應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2011年01期

2 季洪健;王輝;;絲蟲病胸腔積液的診斷與治療[J];臨床肺科雜志;2013年01期

3 張賽楠;方政;童海燕;方浩;謝東方;黃為群;徐邦生;;周期型馬來絲蟲GAPDH部分編碼基因原核及真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2010年22期

4 王繼學(xué),陳鳳義,趙永勝,李小娟,崔淑明,申錦玉,鄭莉莉;大連市首例外源性絲蟲病個(gè)案分析[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2005年01期

5 張賽楠;方政;陸施娟;王慧;徐邦生;;周期型馬來絲蟲CPI基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建和免疫學(xué)研究[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2011年06期

6 吳巨龍;王絢;呂剛;蘇娟;逯召蓮;孫萃萍;景濤;;細(xì)粒棘球絳蟲GAPDH蛋白的生物信息學(xué)分析及其重組表達(dá)純化和酶活性檢測(cè)[J];中國人獸共患病學(xué)報(bào);2014年02期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 林琳;應(yīng)用微衛(wèi)星DNA標(biāo)志研究我國雷氏按蚊群體遺傳結(jié)構(gòu)[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 黃少玉,陳佩璣,潘波,歐作炎,鄧卓暉,劉美珍,劉勇鷹,張啟明;廣東省基本消滅絲蟲病后肅清殘存?zhèn)魅驹吹拇胧┖托Ч治鯷J];廣東衛(wèi)生防疫;1999年04期

2 宋海紅,徐紅梅;上海市南匯區(qū)流動(dòng)人口血吸蟲病、瘧疾、絲蟲病監(jiān)測(cè)10年分析[J];疾病監(jiān)測(cè);2005年02期

3 朱素貞;鐘永良;劉美濤;饒雋;;周期型馬來絲蟲基因組文庫構(gòu)建中某些實(shí)驗(yàn)方法的比較[J];實(shí)用寄生蟲病雜志;1993年04期

4 黃為群;方政;陳陽;姜聲揚(yáng);吳建軍;謝東方;;周期型馬來絲蟲半胱氨酸蛋白酶基因的擴(kuò)增、克隆及序列分析[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2007年13期

5 仲崇祜;盛琦;許金范;楊寶金;李文備;房繼誥;孫中孚;丁立慶;曹彥文;杜宗寺;劉慶順;陳超;;山東省絲蟲病基本消滅后流行病學(xué)動(dòng)態(tài)調(diào)查研究[J];中國寄生蟲病防治雜志;1989年01期

6 黃少玉,駱雄才,歐作炎,潘波,崔惠兒,張啟明;廣東省絲蟲病的流行與防治[J];中國寄生蟲病防治雜志;2004年06期

7 張選明,白禮益,張富南,溫成麟,王明盛,盧素惠,錢曉紅,吳芳,王文超;四川樂山地區(qū)雷氏按蚊嗜人亞種傳播馬來絲蟲病的媒介能量調(diào)查[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1987年03期

8 史宗俊,袁以真,孫家振,李中興,鄭學(xué)修,李國培,陳賀先,趙慶法,丁善根,施恒華,羅幸福,石福田,黃倩,藺西萌,姚潤林,王學(xué)成;絲蟲病防治后期低密度微絲蚴血癥者傳播作用的研究[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1988年02期

9 史宗俊,孫德建,王兆俊,陶增厚,潘士賢,劉心機(jī),張紹清,歐作炎,朱素貞,李慶俊,常江,吳讓莊,鄧珊珊,鄭賢球;中國阻斷淋巴絲蟲病傳播的策略和技術(shù)措施的研究成果簡介[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2001年02期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;周期型馬來絲蟲皮下注射接種長爪沙鼠的實(shí)驗(yàn)觀察[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1976年01期

2 ;周期型馬來絲蟲皮下注射接種長爪沙鼠的繼續(xù)觀察[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1978年01期

3 鄭惠君;程文芳;陶增厚;方仁麗;;周期型馬來絲蟲—長爪沙鼠模型實(shí)驗(yàn)技術(shù)的改進(jìn)[J];貴州醫(yī)藥;1982年03期

4 萬啟惠;黃蕙芳;;周期型馬來絲蟲感染期幼蟲在人卵巢癌細(xì)胞中的體外培養(yǎng)(科研簡報(bào))[J];貴州醫(yī)藥;1988年01期

5 朱良;;海群生對(duì)班氏和馬來絲蟲微絲蚴的白天誘出作用[J];國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1976年04期

6 晉雪香;屈孟卿;尹清源;毛福榮;;周期型馬來絲蟲實(shí)驗(yàn)感染長爪沙鼠技術(shù)方法的改進(jìn)[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);1982年03期

7 ;中華按蚊人工感染周期型馬來絲蟲的實(shí)驗(yàn)觀察[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1976年01期

8 馬云祥;董晉豫;馬新愛;鄭學(xué)修;;長爪沙鼠人工感染周期型馬來絲蟲實(shí)驗(yàn)報(bào)告[J];河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;1981年02期

9 仇錦波;用種特異的DNA探針鑒別蚊媒體內(nèi)的馬來絲蟲[J];國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1987年03期

10 王冠群,劉景元,劉心機(jī),陳樾楠,屠昭平,翁少鵬;馬來絲蟲在不同宿主間相互感染的實(shí)驗(yàn)觀察[J];中國人獸共患病雜志;1988年06期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 方政;謝東方;黃為群;沈勤;童海燕;徐邦生;;周期型馬來絲蟲肌球蛋白部分編碼基因Bm-M55的克隆與真核表達(dá)[A];第十屆中國科協(xié)年會(huì)論文集（三）[C];2008年

2 付寶權(quán);吳秀萍;劉明遠(yuǎn);張亞蘭;原麗紅;李蓮瑞;盧強(qiáng);陳啟軍;P.Boireau;;旋毛蟲新生幼蟲p46 000抗原基因的克隆及序列分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲學(xué)分會(huì)第五次代表大會(huì)暨第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

3 陳海峰;陳觀今;鄭煥欽;郭虹;呂芳麗;;陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的弓形蟲SAG1/ROP1復(fù)合基因的DNA免疫[A];中國動(dòng)物學(xué)會(huì)第八次全國寄生蟲學(xué)學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編[C];2001年

4 劉杰;王海燕;劉新;王文亭;劉娟;李寧;劉芙君;靳韶華;李建遠(yuǎn);;人類附睪表達(dá)精子結(jié)合蛋白HEL-38的生物學(xué)研究[A];山東生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2009年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

5 李彬先;張建實(shí);;3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPD)診斷試劑盒的研制及對(duì)心硬病人診斷價(jià)值的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2008年

6 張潔;何深一;薛明福;崔玉玲;;小鼠白介素-12對(duì)弓形蟲復(fù)合基因疫苗SAG1-ROP2免疫增強(qiáng)作用的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)熱帶病與寄生蟲學(xué)分會(huì)機(jī)會(huì)性感染學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2007年

7 黃良夫;畢大衛(wèi);;性激素一原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥一治療進(jìn)展[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)骨傷科專業(yè)委員會(huì)第十一次學(xué)術(shù)年會(huì)暨省級(jí)繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2005年

8 張明方;于天祥;毛碧增;何祖華;;西瓜轉(zhuǎn)葡聚糖酶及幾丁質(zhì)酶復(fù)合基因研究[A];蔬菜分子育種研討會(huì)論文集[C];2004年

9 楊躍進(jìn);陳躍峰;阮英茆;陳曦;孫瑞成;王清峙;張連莊;田毅;周燕文;陳紀(jì)林;高潤霖;陳在嘉;;卡維地洛對(duì)大鼠急性心肌梗死后心肌細(xì)胞凋亡和bcl-2/bax基因表達(dá)的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病分會(huì)第八次全國心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議匯編[C];2004年

10 陳躍峰;楊躍進(jìn);陳曦;阮英茆;張寶杰;王清峙;張連莊;田毅;周燕文;陳紀(jì)林;高潤霖;陳在嘉;;大鼠急性心肌梗死后的心肌細(xì)胞凋亡和調(diào)亡相關(guān)基因的表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病分會(huì)第八次全國心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議匯編[C];2004年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 ;全球?qū)筍ARS[N];中華工商時(shí)報(bào);2003年

2 記者 顏亮 毛磊;非典科研熱，引發(fā)專利搶奪戰(zhàn)[N];新華每日電訊;2003年

3 記者 牛澤剛;“863”計(jì)劃項(xiàng)目課題在延吉啟動(dòng)[N];延邊日?qǐng)?bào);2009年

4 記者 孫娜;我市企業(yè)對(duì)接海外研發(fā)機(jī)構(gòu)[N];徐州日?qǐng)?bào);2008年

5 本報(bào)記者 黃朝武;全球第二輪生物技術(shù)發(fā)展浪潮已經(jīng)開始[N];農(nóng)民日?qǐng)?bào);2010年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 賈立軍;牛源犬新孢子蟲NcSRS2-NcGRA7復(fù)合基因核酸疫苗與重組腺病毒疫苗的研究[D];延邊大學(xué);2012年

2 樊麗超;克—雅氏病腦脊液Cystatin C、IL-4的檢測(cè)、免疫組織化學(xué)及基因的研究[D];吉林大學(xué);2007年

3 聶華麗;尼龍親和膜的制備及其在木瓜蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶抑制劑純化中的應(yīng)用研究[D];東華大學(xué);2007年

4 張育才;海馬CA1區(qū)神經(jīng)元缺氧去極化的機(jī)制及半胱氨酸蛋白酶抑制劑對(duì)缺氧神經(jīng)元保護(hù)作用的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2004年

5 蘇帕漢尼（SUBHANI，，F(xiàn)）;惡性瘧原蟲保護(hù)性抗原復(fù)合基因與人白細(xì)胞介素-2基因的重組、表達(dá)及其表達(dá)產(chǎn)物的鑒定[D];中山醫(yī)科大學(xué);1996年

6 朱國志;大鼠血糖調(diào)節(jié)相關(guān)基因的克隆和功能研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

7 姚朗;惡性瘧原蟲保護(hù)性抗原復(fù)合基因DNA疫苗的構(gòu)建及免疫學(xué)特征研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2000年

8 陳海峰;陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的弓形蟲SAG1/ROP1復(fù)合基因的DNA免疫[D];中山醫(yī)科大學(xué);2001年

9 叢華;弓形蟲多價(jià)和多表位核酸疫苗黏膜免疫的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2006年

10 陳棟;MMP-2，MMP-9和TIMP-2啟動(dòng)子區(qū)基因多態(tài)性與侵襲性牙周炎相關(guān)性的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 齊文娟;囊尾蚴病多期復(fù)合基因疫苗的構(gòu)建及免疫效應(yīng)評(píng)價(jià)[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2011年

2 劉亞斌;半胱氨酸蛋白酶抑制劑C與冠心病的關(guān)系[D];大連醫(yī)科大學(xué);2009年

3 李天藝;糖尿病微血管病變經(jīng)葛根素治療前后3-磷酸甘油醛脫氫酶活性變化[D];鄭州大學(xué);2007年

4 楊婷婷;弓形蟲P30單基因疫苗與P30-ROP2復(fù)合基因疫苗免疫小鼠的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2005年

5 趙紅;弓形蟲SAG1-ROP2復(fù)合基因疫苗與免疫佐劑大腸埃希菌腸毒素B亞基對(duì)小鼠的免疫保護(hù)性研究[D];山東大學(xué);2010年

6 江樂;人源抗HBsAg dsFv抗體靶向干擾素復(fù)合基因的克隆和表達(dá)[D];曲阜師范大學(xué);2010年

7 劉彪;重組人BMP-4/7復(fù)合基因腺病毒轉(zhuǎn)染SD大鼠BMSCs并誘導(dǎo)其向類髓核細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

8 李首慶;弓形蟲SAG1、GRA2單基因疫苗及SAG1-GRA2復(fù)合基因疫苗的免疫效果研究[D];山東大學(xué);2007年

9 黃丹翊;魚藤酮在帕金森病大鼠發(fā)病機(jī)制中的作用[D];華中科技大學(xué);2006年

10 姚遠(yuǎn);弓形蟲SAG1-MIC8復(fù)合基因疫苗對(duì)小鼠的免疫保護(hù)性研究[D];山東大學(xué);2009年

本文編號(hào)：1012968