本文關(guān)鍵詞：抗CML單鏈免疫毒素載體的構(gòu)建、表達(dá)及活性鑒定

  更多相關(guān)文章： 慢性粒細(xì)胞白血病 重組免疫毒素 克隆 原核表達(dá) 凋亡

【摘要】：目的:構(gòu)建單鏈免疫毒素hscFv-ETA'的原核表達(dá)載體,經(jīng)表達(dá)后鑒定其對(duì)CML細(xì)胞的特異性殺傷作用。方法:采用亞克隆技術(shù),首先將hscFv與截短的假單胞菌外毒素基因ETA'通過(guò)酶切及連接反應(yīng),在載體pWW20上構(gòu)建hscFvETA'單鏈免疫毒素基因;再將其亞克隆入pET32a(+)原核表達(dá)載體中,轉(zhuǎn)化BL21(DH3)宿主菌,IPTG誘導(dǎo)表達(dá);SDS-PAGE觀察其表達(dá)水平并建立目的蛋白的純化方法,Western blot鑒定純化的目的蛋白,FCM鑒定融合蛋白hscFv-ETA'與細(xì)胞結(jié)合的活性以及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力。結(jié)果:限制性酶切圖譜和序列分析證實(shí),在pET32a(+)原核表達(dá)載體上成功地構(gòu)建了hscFvETA'單鏈免疫毒素載體;該基因在pET32a(+)載體中獲得高效表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物的相對(duì)分子質(zhì)量與預(yù)期值相符;經(jīng)Western blot鑒定證實(shí)純化后的重組免疫毒素hscFv-ETA'融合蛋白是正確的;經(jīng)FCM證實(shí)hscFv-ETA'蛋白能特異性結(jié)合CML細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。結(jié)論:已成功構(gòu)建并原核表達(dá)單鏈免疫毒素hscFv-ETA',證明該蛋白能發(fā)揮特異性結(jié)合并誘導(dǎo)CML細(xì)胞凋亡。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院臨床血液學(xué)教研室 臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;重慶醫(yī)科大學(xué);
【關(guān)鍵詞】： 慢性粒細(xì)胞白血病 重組免疫毒素 克隆 原核表達(dá) 凋亡
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.30871102) 重慶醫(yī)科大學(xué)優(yōu)秀博士論文基金(2009年)資助項(xiàng)目
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 慢性粒細(xì)胞白血病(Chronic myelogenous leuke-mia,CML)是由伴有獲得性染色體異常的多能干細(xì)胞水平上的惡性病變而引起的,目前耐藥和復(fù)發(fā)仍然是CML的兩大難題[1-3]。近年來(lái),隨著基因重組技術(shù)產(chǎn)生和發(fā)展,基因重組免疫毒素已成為腫瘤治療研究中的重點(diǎn)和熱點(diǎn),并獲得了迅猛的發(fā)展

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【相似文獻(xiàn)】

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