本文關(guān)鍵詞：Ezrin多克隆抗體制作及應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 原核表達(dá)純化 Ezrin蛋白 動(dòng)物免疫 抗血清 抗體鑒定

【摘要】：構(gòu)建Ezrin原核重組表達(dá)載體pET-28a(+)-ezrin,將其轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中,誘導(dǎo)獲得Ezrin蛋白,將經(jīng)鎳柱親和層析純化后的蛋白分別免疫新西蘭大耳兔和昆明小鼠(KM),獲得抗血清,采用ELISA和Western blotting,免疫熒光測(cè)定其效價(jià)和特異性。ELISA對(duì)抗血清進(jìn)行效價(jià)測(cè)定表明抗血清可與抗原發(fā)生特異性免疫反應(yīng);通過(guò)Western blotting對(duì)抗血清進(jìn)行鑒定表明抗血清可以識(shí)別幾種細(xì)胞株內(nèi)的特異性條帶,其相對(duì)分子量為82 kD,與預(yù)測(cè)分子量相符;免疫熒光試驗(yàn)表明抗血清可以識(shí)別細(xì)胞內(nèi)的Ezrin蛋白,且定位情況與文獻(xiàn)報(bào)道相符。最后通過(guò)protein G對(duì)抗血清進(jìn)行了純化。結(jié)果表明用該方法制備的Ezrin多克隆抗體有較高的特異性和靈敏度。
【作者單位】： 清華大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;清華大學(xué)深圳研究生院生命與健康學(xué)部生物醫(yī)藥研究中心和基因與抗體治療重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 原核表達(dá)純化 Ezrin蛋白 動(dòng)物免疫 抗血清 抗體鑒定
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30570960,30900749) 深圳市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)與提升計(jì)劃
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 埃茲蛋白(Ezrin)是一種重要的膜-細(xì)胞骨架連接分子,屬于ERM家族(Ezrin,Radixin,Moesin)中的一員。ERM家族蛋白的同源性主要體現(xiàn)在他們都在N-末端有一個(gè)同源性很高的FERM功能域(FERM domain),以及在C-末端的不同氨基酸位置上有一個(gè)關(guān)鍵的、與其激活有關(guān)的蘇氨酸磷酸化位點(diǎn),FER

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1010601