本文關鍵詞：細粒棘球絳蟲重組BCG-EgG1Y162菌株的構建和表達

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【摘要】：目的構建和表達細粒棘球絳蟲重組卡介苗(BCG)菌株rBCG-EgG1Y162。方法通過基因工程技術將細粒棘球絳蟲抗原EgG1Y162的編碼基因與大腸埃希菌(E.coli)-分枝桿菌穿梭表達質粒載體pMV361重組,并轉化E.coli后進行擴增。重組質粒pMV-EgG1Y162經PCR和雙酶切鑒定后,進行測序。將鑒定正確的rpMV-EgG1Y162通過電穿孔技術轉化至感受態(tài)BCG菌株中,構建rBCG-EgG1Y162。經PCR和雙酶切鑒定正確后,擴增培養(yǎng)2周,并于45℃放置30 min,誘導目的蛋白表達,十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析蛋白表達情況,并以兔抗原核表達重組蛋白EgG1Y162血清為一抗進行蛋白質印跡(Western blotting)分析。結果重組質粒rpMV-EgG1Y162經PCR擴增和雙酶切后,均獲得約360 bp的EgG1Y162目的基因片段,與預期片段長度一致,測序結果表明插入序列正確。將其通過電穿孔轉化BCG菌株后,rBCG-EgG1Y162生長良好,經酶切和PCR鑒定正確。SDS-PAGE和Western blotting結果顯示,目的表達產物的相對分子質量(Mr)約為71 000。結論構建和表達了細粒棘球絳蟲rBCG-EgG1Y162菌株。
【作者單位】： 新疆重大疾病醫(yī)學重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地 新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院;新疆醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院;
【關鍵詞】： 細粒棘球絳蟲 EgGY 重組卡介苗
【基金】：國家自然科學基金(No.31000411,81160378) 新疆維吾爾自治區(qū)高校科研計劃(No.XJEDU2010S25)~~
【分類號】：R392
【正文快照】： 細粒棘球蚴病是由細粒棘球絳蟲幼蟲感染中間宿主引起的一種地方性和自然疫源性的人獸共患寄生蟲病[1]。疫苗的研制有利于對該病流行的控制[2]。重組卡介苗(BCG)是借助基因工程學技術對BCG基因進行合理的重組改造,并利用BCG的活疫苗載體的特點,構建單次免疫誘導持久作用的新型

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本文編號：1003980