本文關(guān)鍵詞：細(xì)粒棘球絳蟲重組BCG-EgG1Y162菌株的構(gòu)建和表達(dá)

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【摘要】：目的構(gòu)建和表達(dá)細(xì)粒棘球絳蟲重組卡介苗(BCG)菌株rBCG-EgG1Y162。方法通過(guò)基因工程技術(shù)將細(xì)粒棘球絳蟲抗原EgG1Y162的編碼基因與大腸埃希菌(E.coli)-分枝桿菌穿梭表達(dá)質(zhì)粒載體pMV361重組,并轉(zhuǎn)化E.coli后進(jìn)行擴(kuò)增。重組質(zhì)粒pMV-EgG1Y162經(jīng)PCR和雙酶切鑒定后,進(jìn)行測(cè)序。將鑒定正確的rpMV-EgG1Y162通過(guò)電穿孔技術(shù)轉(zhuǎn)化至感受態(tài)BCG菌株中,構(gòu)建rBCG-EgG1Y162。經(jīng)PCR和雙酶切鑒定正確后,擴(kuò)增培養(yǎng)2周,并于45℃放置30 min,誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá),十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析蛋白表達(dá)情況,并以兔抗原核表達(dá)重組蛋白EgG1Y162血清為一抗進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)分析。結(jié)果重組質(zhì)粒rpMV-EgG1Y162經(jīng)PCR擴(kuò)增和雙酶切后,均獲得約360 bp的EgG1Y162目的基因片段,與預(yù)期片段長(zhǎng)度一致,測(cè)序結(jié)果表明插入序列正確。將其通過(guò)電穿孔轉(zhuǎn)化BCG菌株后,rBCG-EgG1Y162生長(zhǎng)良好,經(jīng)酶切和PCR鑒定正確。SDS-PAGE和Western blotting結(jié)果顯示,目的表達(dá)產(chǎn)物的相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)約為71 000。結(jié)論構(gòu)建和表達(dá)了細(xì)粒棘球絳蟲rBCG-EgG1Y162菌株。
【作者單位】： 新疆重大疾病醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地 新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院;新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 細(xì)粒棘球絳蟲 EgGY 重組卡介苗
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.31000411,81160378) 新疆維吾爾自治區(qū)高�？蒲杏�(jì)劃(No.XJEDU2010S25)~~
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 細(xì)粒棘球蚴病是由細(xì)粒棘球絳蟲幼蟲感染中間宿主引起的一種地方性和自然疫源性的人獸共患寄生蟲病[1]。疫苗的研制有利于對(duì)該病流行的控制[2]。重組卡介苗(BCG)是借助基因工程學(xué)技術(shù)對(duì)BCG基因進(jìn)行合理的重組改造,并利用BCG的活疫苗載體的特點(diǎn),構(gòu)建單次免疫誘導(dǎo)持久作用的新型

【相似文獻(xiàn)】

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