本文關(guān)鍵詞：構(gòu)建p53雙熒光報(bào)告載體及其功能驗(yàn)證

  更多相關(guān)文章： 高通量篩選 p 野生型 雙熒光載體 轉(zhuǎn)染

【摘要】：目的:構(gòu)建p53雙熒光報(bào)告載體,驗(yàn)證其能否模擬野生型p53的生物學(xué)活性并適用于高通量篩選。方法:用PCR在p53和螢火蟲(chóng)熒光素酶的開(kāi)放閱讀框兩端引入酶切位點(diǎn)并移除p53的終止密碼和螢火蟲(chóng)熒光素酶的起始密碼,然后將二者插入到由內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)引導(dǎo)的海腎熒光素酶的上游,從而構(gòu)建出一個(gè)能表達(dá)P53螢火蟲(chóng)熒光素融合蛋白的p53FL/IRES/RL雙熒光報(bào)告載體。轉(zhuǎn)染該報(bào)告載體后,檢測(cè)被表達(dá)的P53熒光素融合蛋白是否被MDM2降解、該融合蛋白的亞細(xì)胞定位和它對(duì)p53特異性啟動(dòng)子的誘導(dǎo)。結(jié)果:成功構(gòu)建出p53雙熒光報(bào)告載體。該載體在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的P53熒光素融合蛋白能被MDM2降解;主要分布于細(xì)胞核;具有野生型p53的轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)論:新構(gòu)建的p53雙熒光報(bào)告載體p53FL/IRES/RL能有效模擬野生型p53的功能,適用于高通量篩選調(diào)節(jié)P53蛋白含量的藥物、基因或化合物。
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院泌尿外科;
【關(guān)鍵詞】： 高通量篩選 p 野生型 雙熒光載體 轉(zhuǎn)染
【分類(lèi)號(hào)】：R341
【正文快照】： 自從科學(xué)家在1979年提出抑瘤蛋白P53在腫瘤發(fā)病學(xué)中有重要作用以來(lái),以P53及其調(diào)節(jié)蛋白為靶位點(diǎn)的新藥開(kāi)發(fā)一直是生物醫(yī)學(xué)的研究重點(diǎn)和熱點(diǎn)之一。例如,2004年2月出版的《Science》雜志刊登了堅(jiān)果素(nutlins)能夠通過(guò)阻止MDM2和P53的結(jié)合、抑制MDM2介導(dǎo)的P53降解、上調(diào)P53抑瘤活

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 李建宇;李靈芝;龔海英;李怡;張新寧;;蕨麻對(duì)缺氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的影響[J];中華老年心腦血管病雜志;2007年09期

2 李韶菁;杜冠華;;細(xì)胞水平的高通量藥物篩選技術(shù)研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2008年02期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王書(shū)敬;;生物新技術(shù)在天然藥物研究中的應(yīng)用[J];北京聯(lián)合大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年03期

2 陳修建;景華;;缺血后處理對(duì)深低溫停循環(huán)大鼠腦保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2010年06期

3 謝德平;陸國(guó)權(quán);;幾種常見(jiàn)藥物篩選的新技術(shù)[J];現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐;2009年04期

4 李鑫;鞏江;趙兵;姚默;徐文進(jìn);張歡;陳小向;倪士峰;;抗高原反應(yīng)藥物研究概況[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2013年03期

5 李瑞;徐建棟;鄧玉林;;微流控細(xì)胞培養(yǎng)芯片及其應(yīng)用[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2013年04期

6 陳榮譽(yù);鄭文嶺;吳清華;張寶;馬文麗;;含人P21啟動(dòng)子雙熒光素酶基因載體的構(gòu)建[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2011年03期

7 陳陽(yáng);徐榕;司書(shū)毅;何琪楊;;流式細(xì)胞儀高通量藥物篩選技術(shù)的建立和應(yīng)用[J];齊魯藥事;2011年01期

8 梅晶;祖桂芳;趙曉紅;何穎;孫健;;北京早園竹葉不同提取組分對(duì)CHO細(xì)胞Akt信號(hào)通路的影響[J];食品科學(xué);2012年03期

9 李廣策;董培;王魯君;田軍;;急性高原病藥物防治研究進(jìn)展[J];武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年03期

10 李建宇;李怡;龔海英;趙曉博;李靈芝;;蕨麻正丁醇提取部位對(duì)小鼠急性心肌缺血損傷的保護(hù)作用[J];中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào);2009年01期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 譚靖;i諶縊岫鄖傲邢侔┫赴曛濾雷饔眉襖嗨瓶拱┮┪鍔稈》椒ǖ難芯縖D];中南大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 謝飛博;Fragment-based Bcl-2抑制劑的分子設(shè)計(jì)、合成和抗癌活性研究[D];大連理工大學(xué);2011年

2 張晉煜;氰化鈉對(duì)缺氧犬心臟功能的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

3 馬琳;過(guò)表達(dá)大鼠ACE細(xì)胞模型的建立與ACE抑制劑篩選模型的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2011年

4 陳榮譽(yù);基于P21途徑抗腫瘤藥物篩選的雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)的建立[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

5 鐘加滕;氯丙嗪對(duì)缺氧缺糖PC-12細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制的探討[D];吉林大學(xué);2009年

6 陳修建;缺血后處理對(duì)深低溫停循環(huán)大鼠腦保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

7 張朝霞;慢性高原病患者骨髓組織Bcl-2和Bcl-XL蛋白表達(dá)研究[D];青海大學(xué);2012年

8 閆寒;綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因裸鼠的應(yīng)用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

9 魏弘宜;3個(gè)腺苷酸合成酶超基因家族成員（ACS-1，，ACS-2，ACS-3）的克隆與性質(zhì)分析[D];北京林業(yè)大學(xué);2013年

10 陳陽(yáng);博來(lái)霉素水解酶蛋白降解的機(jī)制研究逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性的藥物篩選及其機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 劉戎,宣昭林;活性氧、線(xiàn)粒體與細(xì)胞凋亡[J];中國(guó)地方病防治雜志;2005年05期

2 馬春花;;藏藥蕨麻的化學(xué)成分及藥理作用研究概況[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;2006年08期

3 李園媛,袁勤生;青藏高原蕨麻植物抗氧化作用的研究[J];藥物生物技術(shù);2004年01期

4 回晶,尚德靜,李慶偉;西藏人參果對(duì)小鼠抗疲勞及抗缺氧能力的影響[J];營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2003年02期

5 周舟,王小華,朱光旭,余爭(zhēng)平;缺氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡與Caspase-3激活及細(xì)胞內(nèi)鈣超載的關(guān)系[J];中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志;2005年01期

6 陳炅然,王琴;蕨麻多糖的提取及其清除自由基的作用[J];中國(guó)獸醫(yī)科技;2004年04期

7 李靈芝;張麗;龔海英;李建宇;陳洋;張嶺;朱毅;李廣策;趙赤;;蕨麻石油醚部位的抗缺氧及其初步機(jī)制研究[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2006年19期

8 陳炅然,胡庭俊,張瑞孝,程富勝,孟聚誠(chéng),高芳;蕨麻多糖對(duì)小鼠免疫功能的影響[J];中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志;2005年02期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐志紅,蔣志勝;藥物篩選新方法——高通量篩選[J];生物學(xué)通報(bào);2003年03期

2 徐仿周,吳繼洲;基因芯片技術(shù)在中藥中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊(cè);2005年05期

3 梁乾德,王升啟;藥物高通量篩選分析技術(shù)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊(cè);2002年01期

4 ;生物技術(shù)文摘[J];中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志;2006年06期

5 王少鵬;李際仙;彭志剛;曹婧;;高通量篩選瞬時(shí)受體勢(shì)V3通道調(diào)節(jié)劑細(xì)胞模型的建立[J];生物工程學(xué)報(bào);2008年11期

6 范鳴浩;;高通量藥物篩選技術(shù)研究[J];醫(yī)學(xué)信息(中旬刊);2011年08期

7 陳燕,柳曉泉,王廣基;創(chuàng)新藥物藥動(dòng)學(xué)高通量篩選[J];中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2003年04期

8 黃麟;張慶林;;高通量分離純化技術(shù)在天然產(chǎn)物化學(xué)中的應(yīng)用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(藥學(xué)分冊(cè));2006年05期

9 朱深銀;周遠(yuǎn)大;劉慶山;杜冠華;;黃嘌呤氧化酶抑制劑高通量篩選模型的建立及應(yīng)用[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2007年03期

10 趙金伴;喻希;;化學(xué)技術(shù)的前沿——高內(nèi)涵篩選技術(shù)的研究及應(yīng)用[J];化工技術(shù)與開(kāi)發(fā);2008年08期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 傅新巧;張?zhí)K明;褚倩;肖文伍;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染人TH基因的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

2 王錫山;趙旭海;王軼慧;姜世雄;;肽核酸(PNA)對(duì)大腸癌LS-174T細(xì)胞生長(zhǎng)影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];第四屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

3 李建軍;陳延治;李光;顧菲;王志宇;辛彥;;外源性PTEN增強(qiáng)放射線(xiàn)誘導(dǎo)胰腺癌ASPC-1細(xì)胞G_2／M期阻滯[A];第四屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

4 劉顏顏;武軍駐;何春燕;李小明;;人a-保護(hù)素1在細(xì)胞氧化低密度脂蛋白中的作用[A];湖北省暨武漢市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)第八屆第十七次學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

5 葉芳;張嵐;楊濤;喬振華;楊林花;;人全長(zhǎng)Survivin表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

6 祁麗;邢麗娜;馬景光;;轉(zhuǎn)染VEGF-C反義寡核苷酸對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖和調(diào)亡的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)放射腫瘤治療學(xué)分會(huì)六屆二次暨中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)腫瘤放療專(zhuān)業(yè)委員會(huì)二屆二次學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

7 車(chē)興華;陳洪;徐振明;尚超;孫開(kāi)來(lái);富偉能;;14-3-3epsilon通過(guò)影響癌細(xì)胞凋亡及侵襲能力在喉癌中發(fā)揮抑癌作用[A];北方遺傳資源的保護(hù)與利用研討會(huì)論文匯編[C];2010年

8 張書(shū)霞;步志高;陳萬(wàn)芳;;雞bcl—2表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞凋亡的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十一次獸醫(yī)病理學(xué)、第十次動(dòng)物病理生理學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2001年

9 劉旭;李殿俊;田長(zhǎng)富;李天天;;腺病毒介導(dǎo)的hIL-2基因轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性研究[A];第七屆全國(guó)腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2001年

10 鄭義;史斌;崔建英;;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)多藥抗性基因轉(zhuǎn)染臍帶血CD34+細(xì)胞[A];第三屆全國(guó)血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2003年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馬云;我國(guó)學(xué)者發(fā)明抗HIV藥高通量篩選新法[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

2 馮世容;CD95基因轉(zhuǎn)染可提高胰腺癌對(duì)化療藥物敏感性[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2001年

3 本報(bào)記者　 賀彩麗;傳統(tǒng)優(yōu)勢(shì)助陣高通量藥物篩選[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

4 ;高通量篩選和樣本處理的自動(dòng)化[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

5 王雪飛;高通量篩選抗艾藥物方法建立[N];健康報(bào);2008年

6 白毅;上海創(chuàng)建大規(guī)模細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)平臺(tái)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

7 天白;科研未果亦是一種“結(jié)果”[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

8 美通;康寧推出非標(biāo)記高通量藥物篩選系統(tǒng)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

9 翁國(guó)娟;升華拜克搭建生物技術(shù)創(chuàng)新平臺(tái)[N];中國(guó)化工報(bào);2008年

10 美國(guó)Promega公司北京辦事處 戴鋼;服務(wù)新藥開(kāi)發(fā)：PROMEGA公司獨(dú)樹(shù)一幟[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2002年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王芳;整合素連接激酶在胎盤(pán)血管性疾病中的作用研究[D];華中科技大學(xué);2012年

2 田大偉;BAI-1在膀胱癌中的表達(dá)及對(duì)腫瘤血管抑制作用的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

3 林力;基于花生四烯酸模型和T細(xì)胞模型的抗炎中藥篩選研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2005年

4 孫麗文;β-淀粉樣肽抑制劑的高通量篩選及阿爾茨海默癥β-淀粉樣肽病因?qū)W探究中新藥靶的尋找[D];浙江大學(xué);2006年

5 紀(jì)敏;MCL1、AF1q和microRNA在白血病中的作用及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2011年

6 劉棟良;基因載體陽(yáng)離子類(lèi)脂設(shè)計(jì)合成及生物性能研究[D];大連理工大學(xué);2006年

7 譚俊;基于多尺度創(chuàng)新原理的工業(yè)微生物高通量篩選平臺(tái)構(gòu)建及應(yīng)用研究[D];華東理工大學(xué);2013年

8 高宏飛;Myod1和Myog真核共表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染真皮成纖維細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

9 羅文娟;人血小板源性生長(zhǎng)因子基因B轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)貓角膜內(nèi)皮細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)[D];青島大學(xué);2005年

10 任曉勇;人生長(zhǎng)分化因子-5基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及用于軟骨缺損修復(fù)的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳娟;外源蛋白在柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊中的瞬時(shí)表達(dá)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

2 張宏濤;NF-κB誘捕物寡聚核苷酸對(duì)大鼠移植腎早期炎性損傷的影響[D];鄭州大學(xué);2005年

3 何小寧;人溶菌酶基因乳腺特異性表達(dá)載體的構(gòu)建及其在小鼠乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2006年

4 劉萍;口蹄疫病毒3C基因的真核表達(dá)及其誘導(dǎo)宿主細(xì)胞凋亡的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

5 黃旋平;hBMP-2真核表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2007年

6 劉春江;大鼠胎腦神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及電穿孔轉(zhuǎn)染[D];中南大學(xué);2009年

7 蕭平難;穩(wěn)定過(guò)表達(dá)BAALC基因的人白血病細(xì)胞株的建立及其生物學(xué)活性研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

8 李t$;肺癌細(xì)胞總RNA轉(zhuǎn)染DC體外誘導(dǎo)肺癌患者抗瘤免疫的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2002年

9 陳幸德;豬干擾素-γ基因的克隆及其表達(dá)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

10 黃玉國(guó);hTGF-β1基因在體轉(zhuǎn)染兔退變腰椎間盤(pán)髓核細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

本文編號(hào)：1003440