發(fā)布時(shí)間：2017-09-13 19:19

  本文關(guān)鍵詞：TGF-β通路在成纖維細(xì)胞調(diào)控氣道上皮干細(xì)胞增殖中的作用機(jī)制

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【摘要】：目的:肺干細(xì)胞的增殖分化及穩(wěn)態(tài)維持的失衡與多種呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),可能導(dǎo)致呼吸系統(tǒng)不同程度的病理改變和功能受損,因此探究肺干細(xì)胞損傷修復(fù)機(jī)制對于呼吸系統(tǒng)疾病的病生理機(jī)制研究及診斷治療具有重要的指導(dǎo)意義。肺上皮細(xì)胞覆蓋于呼吸道表面,保持氣道和肺泡上皮結(jié)構(gòu)的完整,同時(shí)維持肺功能的穩(wěn)定。當(dāng)肺上皮受到損傷后,可通過肺干細(xì)胞的自我更新及損傷修復(fù)來維持和恢復(fù)其數(shù)量和功能。肺上皮的修復(fù)存在多種機(jī)制,肺外干細(xì)胞(骨髓、外周血、胚胎等來源)可遷移到損傷的肺部對上皮進(jìn)行修復(fù),但肺內(nèi)干細(xì)胞對氣道上皮修復(fù)的貢獻(xiàn)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于肺外干細(xì)胞,目前已知的肺內(nèi)干細(xì)胞包括基底細(xì)胞、Club細(xì)胞、支氣管肺泡干細(xì)胞及Ⅱ型肺泡細(xì)胞等。肺部干細(xì)胞的功能受其所處微環(huán)境包括成纖維細(xì)胞、毛細(xì)血管以及氣道壁平滑肌細(xì)胞等的緊密調(diào)控。成纖維細(xì)胞可以分泌轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor beta,TGF-β),TGF-β通路可以促進(jìn)干細(xì)胞分化、抑制增殖,但成纖維細(xì)胞是否利用TGF-β通路實(shí)現(xiàn)對干細(xì)胞的調(diào)控尚未見報(bào)道,本研究利用分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等手段,探究TGF-β通路在成纖維細(xì)胞調(diào)控氣道上皮干細(xì)胞增殖中的作用機(jī)制,為增強(qiáng)氣道上皮修復(fù)的治療新方法提供理論依據(jù)。方法:1、利用酶消化法分離小鼠肺氣道上皮細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)篩選肺氣道上皮干細(xì)胞。2、對氣道上皮干細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),除對照組只加入基本培養(yǎng)基外,實(shí)驗(yàn)組分別加入不同種類的肺成纖維細(xì)胞分泌的生長因子(FGF1、FGF2、FGF10、HGF)、TGF-β受體抑制劑SB431542、肺成纖維細(xì)胞、肺成纖維細(xì)胞+TGF-β抑制劑SB431542,利用倒置熒光顯微鏡觀察、比較氣道上皮干細(xì)胞增殖情況。3、用敲除肺干細(xì)胞TGF-β受體的小鼠(TGFβR-肺干細(xì)胞、SPC-Cre/TGFβRf/f)為實(shí)驗(yàn)組,未敲除基因小鼠為對照組,分別篩選氣道上皮干細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)實(shí)驗(yàn)組與對照組各自分別加入基本培養(yǎng)基及TGF-β受體抑制劑SB431542,利用倒置熒光顯微鏡觀察氣道上皮干細(xì)胞增殖情況,并對干細(xì)胞克隆數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。4、對肺成纖維細(xì)胞系MLg進(jìn)行體外培養(yǎng),設(shè)立實(shí)驗(yàn)組及對照組,對照組加入基本培養(yǎng)基,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞培養(yǎng)過程中加入TGF-β受體抑制劑SB431542,處理48小時(shí)后利用顯微鏡觀察細(xì)胞的數(shù)量及形態(tài)變化,提取細(xì)胞RNA,應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR方法(q RT-PCR)測定成纖維細(xì)胞分泌的不同生長因子(FGF1、FGF2、FGF4、FGF10、HGF)的基因表達(dá)量。結(jié)果:1、肺氣道上皮干細(xì)胞的流式篩選結(jié)果:除去細(xì)胞碎片和7-AAD陽性標(biāo)記的死細(xì)胞,分餾出肺組織活細(xì)胞;除去CD31/34/45-APC-CY7標(biāo)記的內(nèi)皮細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞和造血細(xì)胞,Ep CAM-PE-CY7陽性標(biāo)記的細(xì)胞為上皮細(xì)胞;最后上皮細(xì)胞中Sca-1-APC和GFP-FITC雙陽性標(biāo)記的細(xì)胞即為氣道上皮干細(xì)胞。2、肺成纖維細(xì)胞分泌的生長因子對氣道上皮干細(xì)胞的增殖起促進(jìn)作用。3、TGF-β通路對氣道上皮干細(xì)胞的增殖無直接調(diào)控作用。4、肺成纖維細(xì)胞通過抑制TGF-β通路間接促進(jìn)氣道上皮干細(xì)胞的增殖。5、TGF-β受體抑制劑SB431542對肺成纖維細(xì)胞的形態(tài)及數(shù)量無明顯影響。6、TGF-β受體抑制劑SB431542可上調(diào)肺成纖維細(xì)胞分泌的生長因子的基因表達(dá)水平。結(jié)論:肺成纖維細(xì)胞通過抑制TGF-β通路上調(diào)其分泌的生長因子(FGFs、HGF)的基因表達(dá)水平,進(jìn)而促進(jìn)氣道上皮干細(xì)胞的增殖,提示TGF-β通路在肺部氣道上皮干細(xì)胞增殖調(diào)控中起重要作用,且肺干細(xì)胞的功能受其所處微環(huán)境成纖維細(xì)胞的緊密調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：成纖維細(xì)胞 氣道上皮干細(xì)胞 轉(zhuǎn)化生長因子-β 增殖 生長因子
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R56
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-13
• 前言13-18
• 研究現(xiàn)狀、成果13-16
• 研究目的、方法16-18
• 一、生長因子對氣道上皮干細(xì)胞增殖的影響18-30
• 1.1 對象和方法18-25
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)對象18
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法18-25
• 1.2 結(jié)果25-27
• 1.2.1 小鼠氣道上皮干細(xì)胞流式分選的結(jié)果25
• 1.2.2 生長因子對氣道上皮干細(xì)胞增殖起促進(jìn)作用25-27
• 1.3 討論27-29
• 1.4 小結(jié)29-30
• 二、成纖維細(xì)胞通過TGF-β通路對氣道上皮干細(xì)胞增殖的調(diào)控30-37
• 2.1 對象和方法30-32
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)對象30
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法30-32
• 2.2 結(jié)果32-34
• 2.2.1 肺成纖維細(xì)胞通過抑制TGF-β 通路促進(jìn)氣道上皮干細(xì)胞的增殖32-33
• 2.2.2 TGF-β通路對氣道上皮干細(xì)胞增殖無直接調(diào)控作用33-34
• 2.3 討論34-36
• 2.4 小結(jié)36-37
• 三、TGF-β受體抑制劑SB431542對生長因子的基因表達(dá)調(diào)控37-47
• 3.1 對象和方法37-42
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)對象37
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法37-42
• 3.2 結(jié)果42-44
• 3.2.1 TGF-β 受體抑制劑SB431542對肺成纖維細(xì)胞的形態(tài)及數(shù)量無明顯影響42-43
• 3.2.2 TGF-β 受體抑制劑SB431542可上調(diào)生長因子的基因表達(dá)水平43-44
• 3.3 討論44-46
• 3.4 小結(jié)46-47
• 結(jié)論47-49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明54-55
• 附錄55-56
• 綜述 肺上皮干細(xì)胞研究進(jìn)展56-65
• 綜述參考文獻(xiàn)61-65
• 致謝65-66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 尹薈菁;鄧炯;;肺干細(xì)胞和肺癌干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中國肺癌雜志;2015年10期

2 胡永斌;曾慶富;馮德云;李翔;彭勁武;;激活蛋白-1調(diào)控轉(zhuǎn)化生長因子β_1誘導(dǎo)的人肺成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原分泌[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年05期

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本文編號：845418