發(fā)布時間：2017-09-13 20:35

  本文關鍵詞：PM2.5對HaCaT細胞的損傷作用及機制研究

  更多相關文章： 細顆粒物 HaCaT細胞 NF-κB PDTC 細胞凋亡

【摘要】：背景:近年來,顆粒物已成為我國大多數(shù)城市的首要污染物,是影響城市空氣質量的主要因素。研究表明,長期暴露于大氣顆粒物是人群呼吸道疾病發(fā)生的危險因素。而顆粒物在空氣中的沉降與其粒徑有關,粒徑越小沉降速率越慢,越易被吸入體內(nèi)。PM2.5粒徑小,易被吸入體內(nèi)沉積在肺泡中,直接影響肺的通氣換氣功能,使機體容易處在缺氧狀態(tài)。PM2.5因其表面積較大,使細菌、病毒、有機物和重金屬等有毒物質吸附在顆粒物表面進入肺深部,進一步加重對肺的損傷。面對霧霾等環(huán)境污染,人們往往首先關注其對于呼吸道的損傷,但事實上,環(huán)境污染因素對皮膚的損傷也不可忽視。皮炎、濕疹、痤瘡、銀屑病、色素性疾病及皮膚腫瘤等皮膚病以及皮膚老化等都與環(huán)境污染有關。以往的研究較多關注PM2.5對呼吸系統(tǒng)的影響,對其皮膚損傷作用的研究甚少。因此,本試驗研究不同濃度的PM2.5對人永生化角質形成細胞(Ha Ca T)的損傷作用及其機制。目的:研究PM2.5對人永生化角質形成細胞(Ha Ca T)的損傷作用及NF-κB抑制劑PDTC對PM2.5致Ha Ca T細胞損傷作用的影響。方法:本研究收集了可吸入顆粒物中的PM2.5,并將其配制成不同濃度,然后用不同濃度的PM2.5與Ha Ca T細胞共孵育,采用MTT法測定細胞存活率,同時確定PM2.5的作用濃度及作用時間;給予一定濃度的PDTC干預,將Ha Ca T細胞分為四組:正常組、PM2.5組、PDTC組、PDTC+PM2.5組,應用DAPI染色方法檢測細胞凋亡情況,TBA比色法測定細胞內(nèi)丙二醛(MDA)含量,劑盒法檢測細胞氧化指標ROS水平,SOD,GSH-px和CAT活性,ELISA法檢測細胞上清中炎性因子IL-6和TNF-α的分泌水平,Western blot法檢測Ha Ca T細胞中Bax,Bcl-2,TLR-2,TLR-4和NF-κB p65的蛋白表達情況。結果:1.PM2.5對Ha Ca T細胞存活率的影響:在一定范圍內(nèi),Ha Ca T細胞的存活率隨PM2.5濃度的增加而下降,濃度為200、400、800μg/ml組的細胞存活率明顯低于正常組(P0.05),在PM2.5濃度相同時,培養(yǎng)24 h和48 h的Ha Ca T細胞存活率的差異無統(tǒng)計學意義。2.PM2.5對Ha Ca T細胞凋亡的影響:通過DAPI染色分析,正常組細胞產(chǎn)生較弱的藍光,細胞核呈圓形,邊緣清晰,染色均勻;PM2.5組細胞發(fā)生凋亡,產(chǎn)生較強藍光,細胞核邊緣不規(guī)則;PDTC組細胞形態(tài)和染色情況與正常組沒有差別;PM2.5+PDTC組有少部分細胞產(chǎn)生較強藍光。3.PM2.5對Ha Ca T細胞中MDA含量的影響:PM2.5組和PM2.5+PDTC組細胞中MDA含量顯著高于正常組(P0.05),PDTC組和PM2.5+PDTC組細胞中MDA含量顯著低于PM2.5組(P0.05),PM2.5+PDTC組細胞中MDA含量高于PDTC組,(P0.05)。4.PM2.5對Ha Ca T細胞中ROS水平的影響:PM2.5組和PM2.5+PDTC組細胞的ROS水平顯著性高于正常組(P0.05),PDTC組和PM2.5+PDTC組細胞的ROS水平顯著性低于PM2.5組(P0.05)。5.PM2.5對Ha Ca T細胞中SOD,GSH-Px和CAT活性的影響:PM2.5組和PM2.5+PDTC組細胞SOD,GSH-Px和CAT的酶活性低于正常組(P0.05),PDTC組和PM2.5+PDTC組細胞SOD,GSH-Px和CAT的酶活性顯著高于PM2.5組(P0.05),PM2.5+PDTC組細胞SOD,GSH-Px和CAT的酶活性顯著低于PDTC組(P0.05)。6.PM2.5對Ha Ca T細胞上清中IL-6和TNF-α分泌水平的影響:PM2.5組和PM2.5+PDTC組細胞上清中的IL-6和TNF-α的水平均顯著性高于正常組(P0.05),PDTC組和PM2.5+PDTC組細胞上清中的IL-6和TNF-α的水平均顯著性低于PM2.5組(P0.05)。7.PM2.5對Ha Ca T細胞中Bax和Bcl-2表達的影響:與正常組相比,PM2.5組和PDTC組細胞中Bax/Bcl-2比值顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與PM2.5組進行比較,PDTC組和PM2.5+PDTC組細胞中的Bax/Bcl-2比值顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與PDTC組相比,PM2.5+PDTC組細胞中Bax/Bcl-2比值顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。8.PM2.5對Ha Ca T細胞中TLR-2,TLR-4和NF-κB p65表達的影響:與正常組進行比較,PM2.5組和PM2.5+PDTC組細胞中的TLR-2蛋白表達水平顯著性高于正常組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與PM2.5組進行比較,PDTC組和PM2.5+PDTC組細胞中TLR-2蛋白表達水平顯著減少,差異具有統(tǒng)計學(P0.05)。與PDTC組進行比較,PM2.5+PDTC組細胞中TLR-2蛋白表達水平顯著增加,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與正常組進行比較,PM2.5組和PM2.5+PDTC組細胞中的TLR-4蛋白表達水平顯著增加;PDTC組細胞中的TLR-4蛋白表達水平顯著減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與PM2.5組比較,PDTC組和PM2.5+PDTC組細胞中TLR-4蛋白表達水平顯著減少,差異具有統(tǒng)計學(P0.05)。與PDTC組相比,PM2.5+PDTC組細胞中的TLR-4蛋白表達水平顯著增加,差異具有統(tǒng)計學(P0.05)。與正常組進行比較,PM2.5組和PM2.5+PDTC組細胞中的NF-κB p65蛋白表達水平顯著增加;PDTC組細胞中的NF-κB p65蛋白表達水平顯著減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與PM2.5組比較,PDTC組和PM2.5+PDTC組細胞中NF-κB p65蛋白表達水平顯著減少,差異具有統(tǒng)計學(P0.05)。與PDTC組相比,PM2.5+PDTC組細胞中的NF-κB p65蛋白表達水平顯著增加,差異具有統(tǒng)計學(P0.05)。結論:1.PM2.5能夠降低Ha Ca T細胞的存活率,引起細胞凋亡。2.PM2.5能夠對Ha Ca T細胞造成氧化損傷,而PDTC能夠緩解這種損傷作用。3.PM2.5能夠增加Ha Ca T細胞上清中炎性因子IL-6和TNF-α的分泌水平,造成炎性損傷,而PDTC能夠降低這種損傷效應。4.PM2.5能夠通過TLR-2和TLR-4受體的信號傳導通路使NF-κB途徑被激活,抑制NF-κB途徑能夠減輕TLR-2和TLR-4受體激活導致的細胞損傷。5.應用NF-κB抑制劑PDTC可以特異性抑制NF-κB的表達,在一定程度上減輕PM2.5對Ha Ca T細胞的損傷作用。
【關鍵詞】：細顆粒物 HaCaT細胞 NF-κB PDTC 細胞凋亡
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R56;X513
【目錄】：

• 前言4-5
• 摘要5-8
• abstract8-15
• 第1章 緒論15-27
• 1.1 霧霾天氣概述15-19
• 1.1.1 霧霾形成的原因15-17
• 1.1.2 霧霾形成的分子機理17-18
• 1.1.3 霧霾的危害18-19
• 1.2 霧霾與疾病19-24
• 1.2.1 霧霾對皮膚疾病的影響19-21
• 1.2.2 霧霾對呼吸系統(tǒng)疾病的影響21-22
• 1.2.3 霧霾對心腦血管疾病的影響22-23
• 1.2.4 霧霾對免疫系統(tǒng)及其他疾病的影響23-24
• 1.3 TLR家族及NF-κB信號通路24-27
• 第2章 材料與方法27-35
• 2.1 實驗材料27-29
• 2.1.1 主要儀器與設備27
• 2.1.2 主要試劑及配制27-29
• 2.2 實驗方法29-35
• 2.2.1 PM2.5 的預處理29
• 2.2.2 HaCaT細胞的培養(yǎng)29-30
• 2.2.3 HaCaT細胞存活率測定30
• 2.2.4 Western blot法測定HaCaT細胞中蛋白的表達30-32
• 2.2.5 DAPI染色分析PM2.5 對HaCaT細胞凋亡的影響32
• 2.2.6 HaCaT細胞中MDA含量測定32-33
• 2.2.7 HaCaT細胞中ROS水平測定33
• 2.2.8 HaCaT細胞中SOD, GSH-Px和CAT活性測定33-34
• 2.2.9 ELISA法檢測HaCaT細胞上清中炎性因子IL-6 和TNF-α分泌水平34
• 2.2.10 統(tǒng)計處理34-35
• 第3章 結果35-46
• 3.1 PM2.5 對HaCaT細胞存活率的影響35-36
• 3.2 PM2.5 對HaCaT細胞凋亡的影響36-37
• 3.3 PM2.5 對HaCaT細胞中MDA含量的影響37
• 3.4 PM2.5 對HaCaT細胞中ROS水平的影響37-38
• 3.5 PM2.5 對HaCaT細胞中SOD, GSH-Px和CAT活性的影響2438-40
• 3.6 PM2.5 對HaCaT細胞中炎性因子IL-6 和TNF-α分泌水平的影響40-41
• 3.7 PM2.5 對HaCaT細胞中Bax和Bcl-2 表達的影響41-42
• 3.8 PM2.5 對HaCaT細胞中TLR-2, TLR-4 和NF-κB p65表達的影響42-46
• 第4章 討論46-52
• 4.1 PM2.5與氧化應激46-47
• 4.2 PM2.5與炎癥反應47-48
• 4.3 PM2.5與細胞凋亡48
• 4.4 TLR2, TLR4和NF-κB與細胞損傷48-49
• 4.5 PDTC對NF-κB信號通路的影響49-52
• 第5章 結論52-53
• 參考文獻53-65
• 作者簡介65-66
• 致謝66

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本文編號：845756