本文關(guān)鍵詞：STAT6信號(hào)通路在Der p2的T細(xì)胞表位融合肽特異性免疫治療中的機(jī)制探討

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【摘要】：目的:構(gòu)建編碼Der p2 T細(xì)胞表位融合基因的原核表達(dá)載體p ET-28a(+)-Der p2 T并大規(guī)模表達(dá)純化,探討以嵌合變應(yīng)原Der p2 T細(xì)胞表位融合肽為疫苗對(duì)過(guò)敏性哮喘進(jìn)行特異性免疫治療的效果以及對(duì)STAT6的影響。方法:1、合成Der p 2的4個(gè)T細(xì)胞表位基因T1(11-35AA)、T2(36-50AA)、T3(78-104AA)、T4(105-129AA)的基因片段,用分子生物學(xué)方法以T1-T2-T3-T4串聯(lián)其核苷酸序列合成表位嵌合基因,命名為Der p2 T。將上述融合基因克隆到p ET28a(+)中,構(gòu)建p ET-28a(+)-Der p2 T重組載體,用限制性內(nèi)切酶驗(yàn)證;2、將p ET28a(+)-Der p2 T重組載體轉(zhuǎn)入E.coli BL21(DE3)中,IPTG小劑量誘導(dǎo)表達(dá)Der p2 T,在最適IPTG濃度條件下進(jìn)行Der p2 T的大劑量表達(dá)并純化;3、以屋塵螨粗提液為致敏原,構(gòu)建小鼠過(guò)敏性哮喘模型,以純化的Der p 2 T細(xì)胞表位融合肽為疫苗對(duì)哮喘小鼠模型進(jìn)行特異性免疫治療。利用ELISA法檢測(cè)BALF中IFN-γ、IL-4、IL-13的水平以及血清中Ig E、Ig G2a抗體水平。制備肺組織病理切片,觀察病理變化。Western-blotting檢測(cè)哮喘小鼠模型肺組織全蛋白提取液所含STAT6的變化。結(jié)果:1、成功構(gòu)建了原核表達(dá)重組載體p ET-28a(+)-Der p2 T;2、成功誘導(dǎo)表達(dá)并純化Der p2 T細(xì)胞表位融合肽;3、免疫治療效果:與哮喘組相比,免疫治療組BALF中IFN-γ含量高于哮喘組(P0.05),IL-4、IL-13水平均低于哮喘組(P0.05);免疫治療組中血清抗原特異性Ig E抗體明顯低于哮喘組(P0.01),而Ig G2a抗體水平顯著升高(P0.01)。肺組織病理切片結(jié)果顯示:經(jīng)Der p2 T細(xì)胞表位融合肽治療組小鼠過(guò)敏反應(yīng)炎癥明顯較哮喘組減輕,具體表現(xiàn)為炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減輕。Western-blotting檢測(cè)哮喘小鼠模型肺組織全蛋白提取液中STAT6的變化情況為:哮喘組磷酸化STAT6以及非磷酸化STAT6較PBS對(duì)照明顯升高(P0.05);而經(jīng)Der p2 T細(xì)胞表位融合肽治療組磷酸化STAT6以及非磷酸化STAT6較哮喘組明顯減少(P0.05)。對(duì)上述結(jié)果分析,Der p2 T細(xì)胞表位融合肽對(duì)粉塵螨哮喘具有良好的治療效果,并通過(guò)調(diào)節(jié)STAT6的變化而達(dá)到治療目的。結(jié)論:Der p2 T細(xì)胞表位融合肽具有良好的治療效果,且通過(guò)調(diào)節(jié)STAT6的變化而達(dá)到治療目的。
【關(guān)鍵詞】：屋塵螨 Der p2T細(xì)胞表位融合肽 特異性免疫治療 STAT6
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R562.25
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-9
• 摘要9-11
• Abstract11-13
• 前言13-15
• 第一部分 屋塵螨Ⅱ類變應(yīng)原Der p2 T細(xì)胞表位融合基因的克隆和原核表達(dá)15-36
• 1 研究目的15
• 2 材料與方法15-30
• 2.1 材料15-22
• 2.2 方法22-30
• 3 結(jié)果30-34
• 3.1 合成基因的PCR結(jié)果和雙酶切鑒定30-31
• 3.2 重組蛋白Der p2T的SDS-PAGE分析31-32
• 3.3 純化的Der p2T細(xì)胞表位融合肽的SDS-PAGE分析32-33
• 3.4 純化的Der p2 T的Western blotting鑒定33-34
• 3.5 對(duì)比Der p 2、Der p2 T分別與粉塵螨過(guò)敏患者血清IgE結(jié)合的能力34
• 4 討論34-36
• 第二部分 Der p2 T細(xì)胞表位融合肽對(duì)哮喘小鼠的特異性免疫治療效果和STAT6信號(hào)通路的影響36-49
• 1 研究目的36
• 2 材料與方法36-42
• 2.1 材料36-39
• 2.1.1 動(dòng)物36-37
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)原材料37
• 2.1.3 主要試劑37
• 2.1.4 主要儀器設(shè)備37-38
• 2.1.5 試劑的配制38-39
• 2.2 方法39-42
• 3 結(jié)果42-46
• 3.1 各組小鼠癥狀和體征的改變42
• 3.2 Der p2T細(xì)胞表位融合肽抑制了嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)42-43
• 3.3 BALF中細(xì)胞因子IL-4、IL-13、和IFN-γ 的變化43-44
• 3.4 血清變應(yīng)原特異性IgE、IgG2a的水平變化44
• 3.5 肺組織病理結(jié)果44-45
• 3.6 肺組織病中STAT6蛋白表達(dá)分析45-46
• 4 討論46-49
• 結(jié)論49-50
• 創(chuàng)新點(diǎn)50-51
• 參考文獻(xiàn)51-58
• 綜述 塵螨的致敏及其防治58-68
• 參考文獻(xiàn)63-68
• 作者簡(jiǎn)介及讀研期間主要科研成果68-69
• 致謝69

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：741170