發(fā)布時(shí)間：2021-06-28 06:09

　　背景:肺纖維化（Pulmonary fibrosis,PF）是由多種原因引起的一種嚴(yán)重的慢性肺間質(zhì)性疾病。主要特征是早期的彌漫性肺泡炎和肺泡持續(xù)損傷,后期成纖維細(xì)胞大量病理性增殖,伴隨細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellularmatrix,ECM）異常性匯聚,導(dǎo)致肺結(jié)構(gòu)破壞,最終導(dǎo)致肺纖維化。炎癥已被認(rèn)為是肺纖維化的最初原因,并且上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（Eβithelial-mesenchymal transition,EMT）是促進(jìn)肺纖維化進(jìn)程的重要發(fā)病機(jī)理。巨噬細(xì)胞是一類專業(yè)的免疫細(xì)胞,在維持免疫穩(wěn)態(tài)方面具有重要作用。在肺纖維化過程中,巨噬細(xì)胞也發(fā)揮著重要作用,根據(jù)所處的微環(huán)境以及外界刺激極化為兩種不同的功能狀態(tài),即經(jīng)典活化的巨噬細(xì)胞（M1）和替代活化的巨噬細(xì)胞（M2）而發(fā)揮其免疫調(diào)控作用。Wnt信號(hào)是機(jī)體維持組織穩(wěn)定和損傷修復(fù)的關(guān)鍵信號(hào)通路,在免疫調(diào)節(jié)中起著非常重要的作用。白介素17A（IL-17A）是一種能夠誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化的的免疫調(diào)節(jié)劑,并且與宿主防御和各種免疫相關(guān)疾病有關(guān)。有研究表明,Wnt信號(hào)和IL-17都在肺纖維化進(jìn)程中異�；罨�。目的:本研究探討Wnt/β-catenin信號(hào)的活... 

【文章來源】：寧夏大學(xué)寧夏回族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－２．ＩＬ－１７Ａ逆轉(zhuǎn)Ｗｍ３ａ改變的Ｋ噬細(xì)胞極化標(biāo)志物的表達(dá)Ａ．不同處理組ｉＮＯＳ和Ａｒｇｌ的蛋白表達(dá)分析：Ｂ．不??同處理組ｉＮＯＳ和Ａｒｇｌ的蛋白表達(dá)定Ｓ分析

ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｔｏ?ｔｈｅ?ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ?ｇｒｏｕｐｓ．?＃：?ｐ＜０．０５，?＃＃：?ｐ＜０．０１．??接下來，我們運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測Ｍｌ型巨噻細(xì)胞表面標(biāo)志物ＣＤ８６和Ｍ２型巨噬細(xì)胞表面??標(biāo)志物ＣＤ２０６來進(jìn)一步驗(yàn)證上述結(jié)果。結(jié)果顯示（圖３－５），在使用ＷｎｔＣ－ＣＭ培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，??ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞中分別含有３９．９１％的Ｍｌ型巨噬細(xì)胞和２７．３％的Ｍ２型巨噬細(xì)胞；Ｗｎｔ３ａ－ＣＭ增??加了?ＣＤ２０６陽性的Ｍ２型巨噬細(xì)胞，并且ＩＬ－１７Ａ増加了?ＣＤ８６陽性的Ｍｌ型巨噬細(xì)胞。有趣的??是，ＩＬ－１７Ａ改變的Ｍｌ、Ｍ２巨噻細(xì)胞的數(shù)量可以被ＷｎｔＳａ部分逆轉(zhuǎn)，并且通過添加ＸＡＶ９３９可??以在一定程度上減少ＷｎｔＳａ的抵消作用。這些結(jié)果清除的表明在ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞中，Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ??信號(hào)能夠負(fù)調(diào)控ＩＬ－１７Ａ誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞細(xì)胞極化。??３．３．３?Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ對(duì)ＩＬ－１７Ａ介導(dǎo)的巨嗤細(xì)胞極化調(diào)控機(jī)制探討??接下來，我們?cè)噲D研宄Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信號(hào)調(diào)控ＩＬ－１７Ａ介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞極化的潛在作用機(jī)制。??巨噬細(xì)胞極化由各種轉(zhuǎn)錄因子的激活而受到嚴(yán)格的調(diào)控，并且已經(jīng)證明Ｓｔａｔ信號(hào)參與該調(diào)控過程。??因此，我們檢測了?Ｓｔａｔ信號(hào)通路相關(guān)蛋白來探宄其是否參與Ｗｎｔ３ａ調(diào)控的ＩＬ－１７Ａ介導(dǎo)的巨噬細(xì)??胞極化。正如預(yù)期的那樣，結(jié)果顯示，ＷｎｔＳａ和ＩＬ－１７Ａ確實(shí)可以通過增加ｐ－ＳＴＡＴｌ的表達(dá)來增??強(qiáng)Ｓｔａｔ信號(hào)傳導(dǎo)

氣管上皮細(xì)胞的微孔膜置于加入了?ＰｎｅｕｍａＣｕｌｔ?Ｅｘ－Ｐｌｕｓ的６孔板中，將６孔板放置于３７°Ｃ，５％Ｃ０２??的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，２４ｈ后，將膜上培養(yǎng)基棄去，將微孔膜下方培養(yǎng)基更換為含２％ＦＢＳ的ＵＳＧ培??養(yǎng)基，培養(yǎng)２４ｈ后，更換為完全ＵｌｔｒｏＳｅｒＧ（ＵＳＧ）培養(yǎng)基，從而建立氣液相培養(yǎng)條件。如圖４－１??所示，在氣液相培養(yǎng)條件下，微孔膜下方的ＵＳＧ培養(yǎng)液每兩天更換一次。??小鼠管丨：皮細(xì)胞??ｍｈｈｍｈｈｂｈｈ???孔隙支拎脫??圖４－１．小鼠氣管上皮細(xì)胞氣液相培養(yǎng)模型??Ｆｉｇｕｒｅ?４－１．?Ａｉｒ－ｌｉｑｕｉｄ?ｉｎｔｅｒｆａｃｅ?ｃｕｌｔｕｒｅ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｍｏｕｓｅ?Ｔｒａｃｈｅａｌ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ??４．２．４氣液相培養(yǎng)的小鼠氣管上皮細(xì)胞（ｍＴＥＣ）與ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞共培養(yǎng)??從液氮罐中取出一株凍存的ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞復(fù)蘇，傳代，待細(xì)胞生長狀態(tài)處于穩(wěn)定且活力較??好時(shí)，當(dāng)其融合率達(dá)至８０％－９０％時(shí)，棄去培養(yǎng)基，加入４ｍＬ預(yù)熱的ＰＢＳ輕輕漂洗一遍，加入２ｍＬ??－３８－??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]巨噬細(xì)胞在肺纖維化的發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 黃雁超,李流云,崔向清,黃春芳.  重慶醫(yī)學(xué). 2015(21)
[2]阻斷IL-17A活化p50NF-κB抑制小鼠肺損傷引起的肺纖維化[J]. 米粟,李轍,劉虹,胡卓偉,花芳.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2012(06)



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