目的:研究Ghrelin對內(nèi)毒素（Lipopolysaccharide,LPS）所致的肺泡Ⅱ型上皮細胞（A549）凋亡的影響及其機制。方法:CCK-8（Cell Counting Kit-8）法檢測LPS刺激對A549的細胞毒性;原位末端標記法（TUNEL）檢測細胞凋亡率;流式細胞術(shù)檢測細胞內(nèi)一氧化氮（NO）的產(chǎn)生;Western blot檢測誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iN OS）、AKT、ERK、p-AKT、p-ERK信號通路蛋白以及cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2凋亡相關(guān)蛋白的表達。結(jié)果:CCK-8檢測結(jié)果顯示LPS可顯著抑制A549細胞的增殖,降低細胞活力;TUNEL檢測發(fā)現(xiàn)Ghrelin可顯著抑制LPS導(dǎo)致的A549細胞的凋亡（P<0.05）;LPS可以促進iN OS的表達,增加細胞內(nèi)NO的產(chǎn)生,并同時抑制AKT、ERK通路的活性,上調(diào)下游促凋亡蛋白Bax以及終末凋亡蛋白cleaved caspase-3的表達,下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達,而應(yīng)用Ghrelin預(yù)處理后可以逆轉(zhuǎn)LPS對AKT、ERK通路活性的抑制,繼而下調(diào)Bax以及cleaved ca... 

【文章來源】：中國免疫學(xué)雜志. 2017,33(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要材料、試劑
    1.2 實驗方法
        1.2.1 A549細胞研究分組
        1.2.2 運用CCK-8檢測各組肺泡Ⅱ型上皮細胞 (A549) 的活力
        1.2.3 TUNEL法檢測各組肺泡Ⅱ型上皮細胞 (A549) 的凋亡
        1.2.4 DAF-FM DA (NO熒光探針) 檢測肺泡Ⅱ型上皮細胞 (A549) 內(nèi)NO的產(chǎn)生
        1.2.5 免疫印跡法測定i NOS、p-AKT、p-ERK、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3的蛋白表達情況
        1.2.6 免疫熒光法測定肺泡Ⅱ型上皮細胞 (A549) 中cleaved caspase-3的表達
    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 LPS對肺泡Ⅱ型上皮細胞 (A549) 活力的影響
    2.2 Ghrelin對LPS刺激下肺泡Ⅱ型上皮細胞 (A549) 凋亡的影響
    2.3 LPS對肺泡Ⅱ型上皮細胞 (A549) 中i NOS表達的影響
    2.4 Ghrelin對肺泡Ⅱ型上皮細胞 (A549) 中NO產(chǎn)生的影響
    2.5 Ghrelin對肺泡Ⅱ型上皮細胞 (A549) 內(nèi)AKT及ERK信號通路中p-AKT、p-ERK蛋白表達的影響
    2.6 Ghrelin對LPS刺激下肺泡Ⅱ型上皮細胞 (A549) 中凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2和cleavedcaspase-3表達的影響
3 討論



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