目的:研究Ghrelin對(duì)內(nèi)毒素（Lipopolysaccharide,LPS）所致的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（A549）凋亡的影響及其機(jī)制。方法:CCK-8（Cell Counting Kit-8）法檢測(cè)LPS刺激對(duì)A549的細(xì)胞毒性;原位末端標(biāo)記法（TUNEL）檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)一氧化氮（NO）的產(chǎn)生;Western blot檢測(cè)誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iN OS）、AKT、ERK、p-AKT、p-ERK信號(hào)通路蛋白以及cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果:CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示LPS可顯著抑制A549細(xì)胞的增殖,降低細(xì)胞活力;TUNEL檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Ghrelin可顯著抑制LPS導(dǎo)致的A549細(xì)胞的凋亡（P<0.05）;LPS可以促進(jìn)iN OS的表達(dá),增加細(xì)胞內(nèi)NO的產(chǎn)生,并同時(shí)抑制AKT、ERK通路的活性,上調(diào)下游促凋亡蛋白Bax以及終末凋亡蛋白cleaved caspase-3的表達(dá),下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá),而應(yīng)用Ghrelin預(yù)處理后可以逆轉(zhuǎn)LPS對(duì)AKT、ERK通路活性的抑制,繼而下調(diào)Bax以及cleaved ca... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2017,33(08)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要材料、試劑
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 A549細(xì)胞研究分組
        1.2.2 運(yùn)用CCK-8檢測(cè)各組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞 (A549) 的活力
        1.2.3 TUNEL法檢測(cè)各組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞 (A549) 的凋亡
        1.2.4 DAF-FM DA (NO熒光探針) 檢測(cè)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞 (A549) 內(nèi)NO的產(chǎn)生
        1.2.5 免疫印跡法測(cè)定i NOS、p-AKT、p-ERK、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3的蛋白表達(dá)情況
        1.2.6 免疫熒光法測(cè)定肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞 (A549) 中cleaved caspase-3的表達(dá)
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 LPS對(duì)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞 (A549) 活力的影響
    2.2 Ghrelin對(duì)LPS刺激下肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞 (A549) 凋亡的影響
    2.3 LPS對(duì)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞 (A549) 中i NOS表達(dá)的影響
    2.4 Ghrelin對(duì)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞 (A549) 中NO產(chǎn)生的影響
    2.5 Ghrelin對(duì)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞 (A549) 內(nèi)AKT及ERK信號(hào)通路中p-AKT、p-ERK蛋白表達(dá)的影響
    2.6 Ghrelin對(duì)LPS刺激下肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞 (A549) 中凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2和cleavedcaspase-3表達(dá)的影響
3 討論



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