甲型流感病毒（influenza A virus,IAV）是引起人類急性呼吸系統(tǒng)傳染病的典型病原體,已經(jīng)多次全球爆發(fā)流行,造成了世界范圍內(nèi)大量的發(fā)病和死亡。臨床上,嚴(yán)重流感病毒感染的患者表現(xiàn)為雙側(cè)肺浸潤和低氧血癥,并常死于急性肺損傷（acute lung injury,ALI）或急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）。甲型流感病毒易感人群廣泛,變異率高。除了流感疫苗療效受限之外,抗病毒藥物的耐藥等原因?qū)е录仔土鞲胁《拘苑窝椎姆乐稳諠u困難。天然免疫系統(tǒng)作為機(jī)體抵抗病毒入侵的第一道防線,在IAV入侵機(jī)體后,宿主的模式識(shí)別受體（pattern recognition receptors,PRRs）可以迅速識(shí)別病毒的病原體相關(guān)分子模式（pathogen associated molecular patterns,PAMPs）,誘導(dǎo)下游核轉(zhuǎn)錄因子（nuclear factor-kappa B,NF-κB）、干擾素調(diào)節(jié)因子（interferon regulatory factor,IRF）3和IRF7的活化,啟動(dòng)I型干擾素（IFN-I... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
ABSTRACT
縮略詞表
一、引言
二、材料與方法
    1.實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 流感病毒
        1.3 細(xì)胞系
        1.4 實(shí)驗(yàn)主要抗體
        1.5 實(shí)驗(yàn)主要試劑與試劑盒
        1.6 實(shí)驗(yàn)相關(guān)的載體和分子克隆
        1.7 實(shí)驗(yàn)耗材、儀器和設(shè)備
    2.基礎(chǔ)試劑配制
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)基
        2.2 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)液
        2.3 DNA非變性聚丙烯酰胺凝膠
        2.4 細(xì)菌培養(yǎng)基
        2.5 免疫印跡相關(guān)試劑
        2.6 細(xì)胞樣品制備相關(guān)試劑
    3.實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 Nmi基因敲除小鼠的鑒定
        3.2 細(xì)胞的常規(guī)培養(yǎng)
        3.3 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的提取和培養(yǎng)
        3.4 流感病毒的擴(kuò)增
        3.5 流感病毒的滴定
        3.6 小鼠病毒感染
        3.7 小鼠肺組織分離、勻漿和肺泡灌洗液的收集
        3.8 小鼠肺組織病毒滴定測定
        3.9 細(xì)胞的刺激和感染
        3.10 真核細(xì)胞的小干擾RNA和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        3.11 細(xì)胞總蛋白提取和濃度測定
        3.12 Western Blot
        3.13 免疫共沉淀
        3.14 質(zhì)粒的抽提
        3.15 RNA的抽提和純化
        3.16 逆轉(zhuǎn)錄PCR和熒光定量PCR
        3.17 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
        3.18 熒光素酶報(bào)告基因檢測
        3.19 免疫熒光
        3.20 差異表達(dá)基因分析
    4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1.甲型流感病毒感染誘導(dǎo)NMI表達(dá)升高
    2.體外敲除NMI促進(jìn)甲型流感病毒感染后細(xì)胞因子的表達(dá)
    3.NMI缺失增強(qiáng)抗病毒免疫反應(yīng)
        3.1 NMI缺失增強(qiáng)小鼠對(duì)流感病毒的抵抗力
        3.2 NMI缺失降低流感病毒感染后小鼠的肺部炎癥反應(yīng)
        3.3 NMI缺失促進(jìn)小鼠肺部I型干擾素和抗病毒ISG基因的表達(dá)
        3.4 NMI缺失抑制流感病毒在小鼠肺部的復(fù)制
    4.NMI抑制抗病毒天然免疫信號(hào)通路的活化
        4.1 NMI抑制流感病毒誘導(dǎo)的ISRE和 NF-κB的活化
        4.2 NMI負(fù)向調(diào)節(jié)天然免疫信號(hào)通路中IRF3、IRF7、NF-κB、P38和STAT的磷酸化水平
    5.NMI通過NID1和NID2 結(jié)構(gòu)域與IRF3及IRF7 相互作用
        5.1 NMI與 IRF3和IRF7 相互作用
        5.2 NMI通過NID1和NID2 結(jié)構(gòu)域與IRF3及IRF7 結(jié)合
    6.NMI促進(jìn)IRF3和IRF7 的蛋白酶體途徑的降解
    7.NMI促進(jìn)IRF3和IRF7的K48 位泛素化修飾
    8.NMI通過招募E3 泛素連接酶TRIM21 催化IRF3和IRF7 的泛素化和降解
        8.1 TRIM21 是與IRF3和IRF7 相互作用的E3 連接酶
        8.2 NMI與 TRIM21 相互作用
        8.3 TRIM21 降低IRF3和IRF7 蛋白水平
        8.4 NMI依賴于TRIM21 促進(jìn)IRF3和IRF7 泛素化和降解
四、討論
五、總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述 泛素化在抗病毒天然免疫反應(yīng)中的作用
    (綜述)參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]泛素化的功能及其意義[J]. 王翔,魏瀟凡,張宏權(quán).  中國科學(xué):生命科學(xué). 2015(11)
[2]Severe acute respiratory syndrome coronavirus protein 6 mediates ubiquitin-dependent proteosomal degradation of N-Myc（and STAT） interactor[J]. Weijia Cheng,Shiyou Chen,Ruiling Li,Yu Chen,Min Wang,Deyin Guo.  Virologica Sinica. 2015(02)



本文編號(hào)：3207142