發(fā)布時(shí)間：2021-05-26 20:58

　　目的:對(duì)同時(shí)耐替加環(huán)素、多粘菌素且具有高黏表型的ST11型碳青霉烯類耐藥肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP）KP18-29 的耐藥組及毒力特征進(jìn)行深入研究,闡明其產(chǎn)生廣泛耐藥及毒力的分子機(jī)制。方法:（1）采用微量肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法測定臨床治療腸桿菌科細(xì)菌感染常用的18種抗菌藥物對(duì)KP18-29的最低抑菌濃度（Minimum inhibitory concentration,MIC）;（2）基于 Illumina Miseq 和 PacBio RSII 平臺(tái)對(duì) KP18-29進(jìn)行全基因組測序,分析KP18-29的耐藥組及攜帶的毒力基因;（3）拉絲實(shí)驗(yàn)確定KP18-29的高黏性表型;基于小鼠膿毒癥模型評(píng)價(jià)KP18-29的高毒力表型;（4）接合轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)確定KP18-29攜帶的mcr-8.2基因的可轉(zhuǎn)移性及其介導(dǎo)多粘菌素耐藥的功能。（4）初步探索MCR-8.2蛋白的催化功能,對(duì)MCR-8.2蛋白催化結(jié)構(gòu)域進(jìn)行表達(dá)和純化。結(jié)果:（1）肺炎克雷伯菌KP18-29僅對(duì)磷霉素敏感,對(duì)包括多粘菌素和替加環(huán)素在內(nèi)的所有其他檢測藥... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表(Abbreviations)
第一章 前言
    1.1 耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌(CRKP)概述
        1.1.1 CRKP簡介
        1.1.2 CRKP在國內(nèi)、外的流行
        1.1.3 高毒力肺炎克雷伯菌
        1.1.4 CR-hvKP的出現(xiàn)及危害
    1.2 可水平轉(zhuǎn)移的多粘菌素耐藥基因mcr
        1.2.1 mcr基因的簡介
        1.2.2 mcr-8基因的發(fā)現(xiàn)
        1.2.3 mcr基因在CRE中的傳播
    1.3 結(jié)語
第二章 同時(shí)耐替加環(huán)素和多粘菌素CRKP的發(fā)現(xiàn)及分子特征研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 溶液及培養(yǎng)基的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 最低抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration,MIC)測定
        2.2.2 拉絲實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 耐藥基因的檢測
        2.2.4 接合轉(zhuǎn)移
        2.2.5 電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 S1-PFGE和Southern雜交
        2.2.7 全基因組測序
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 藥敏結(jié)果和黏性表型
        2.3.2 定位分析
        2.3.3 全基因組測序
        2.3.4 mcr-8.2質(zhì)粒分析
    2.4 討論
第三章 KP18-29的毒力分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 小鼠致死量測定
        3.2.2 組織HE染色
        3.2.3 毒力因子推定
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 小鼠致死率測定和組織病理切片
        3.3.2 毒力因子分析
    3.4 討論
第四章 磷酸乙醇胺轉(zhuǎn)移酶MCR-8.2蛋白的表達(dá)和純化
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 表達(dá)菌株及載體
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.4 引物設(shè)計(jì)及合成
        4.1.5 溶液的配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 目的基因的擴(kuò)增
        4.2.2 載體質(zhì)粒的提取
        4.2.3 載體質(zhì)粒的酶切
        4.2.4 目的基因PCR產(chǎn)物及酶切載體的純化
        4.2.5 感受態(tài)細(xì)胞的制備
        4.2.6 MCR-8.2重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        4.2.7 目的蛋白的小量表達(dá)
        4.2.8 目的蛋白的大量表達(dá)及純化
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 以pET-28a(+)為載體的蛋白小量表達(dá)
        4.3.2 以pSUMO為載體的蛋白小量表達(dá)
        4.3.3 以pGEX-6P-1為載體的蛋白小量表達(dá)
        4.3.4 不同誘導(dǎo)溫度的蛋白小量表達(dá)
        4.3.5 不同鹽濃度的蛋白小量表達(dá)
        4.3.6 部分片段的蛋白大量表達(dá)與純化
    4.4 討論
結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
個(gè)人簡歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Determination of 50% endpoint titer using a simple formula[J]. Muthannan Andavar Ramakrishnan.  World Journal of Virology. 2016(02)



本文編號(hào)：3207056