目的:本研究構(gòu)建巨噬細(xì)胞移動抑制因子（MIF） siRNA,并探討其對脂多糖/流感病毒介導(dǎo)的急性肺損傷的炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)的影響,及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的作用,探索急性肺損傷治療的新模式。研究內(nèi)容和方法:第一部分:MIF siRNA在人肺泡上皮細(xì)胞A549的轉(zhuǎn)染和干擾目的基因MIF表達(dá)將MIF siRNA用轉(zhuǎn)染劑INTERFERin介導(dǎo)轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的A549細(xì)胞,通過RT- PCR方法觀察不同濃度MIF siRNA轉(zhuǎn)染后,對MIF mRNA表達(dá)的影響;采用細(xì)胞免疫熒光方法分析MIF蛋白表達(dá)的強(qiáng)弱;應(yīng)用MTT方法測定MIF siRNA轉(zhuǎn)染對細(xì)胞的毒性,及對LPS刺激A549細(xì)胞生存率的影響。第二部分:MIFsiRNA對脂多糖刺激/流感病毒感染人肺泡上皮細(xì)胞Toll樣受體及其下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響離體研究:運(yùn)用RT-PCR、Western-Blot、細(xì)胞免疫熒光和ELISA方法,分別從mRNA、蛋白、介質(zhì)水平三個層面檢測了LPS刺激/流感病毒感染人肺泡上皮細(xì)胞A549后TLR2、TLR3、TLR4的mRNA表達(dá);下游MyD88依賴/非依賴信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路元件MyD88和IRF3蛋白表達(dá);核因子NF... 

【文章來源】：廣州醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：142 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)染MIFsiRNA/加入DXM后，LPS刺激6h，小鼠肺組織病理改變a：正常組、b：LPS刺激組、c：MIFsiRNA組、d：DXM組、e：MIFsiRNA+DXM組e

109圖 24 轉(zhuǎn)染 MIF siRNA /加入 DXM 后，LPS 刺激 6h，免疫組化檢測小鼠肺組織 AQP1a：正常組、b：LPS 刺激組、c：MIF siRNA 組、d：DXM 組、e：MIF siRNA+DXM

110圖 25 轉(zhuǎn)染 MIF siRNA /加入 DXM 后，LPS 刺激 6h，免疫組化檢測小鼠肺組織 AQP4a：正常組、b：LPS 刺激組、c：MIF siRNA 組、d：DXM 組、e：MIF siRNA+DXM


本文編號：2934500