慢阻肺患者血清對PM2.5致MH-S細(xì)胞炎癥的影響及Salubrinal作用機(jī)制研究

發(fā)布時(shí)間：2020-10-21 23:32

　　第一部分:慢阻肺患者血清對PM2.5致MH-S細(xì)胞炎癥的影響目的:以MH-S細(xì)胞建立模型,以慢阻肺患者血清與PM2.5刺激MH-S細(xì)胞,模擬霧霾情況下慢阻肺患者氣道炎癥環(huán)境,觀察MH-S細(xì)胞HDAC2活性及IL-17的變化。方法:用不同濃度的慢阻肺患者及健康人血清刺激MH-S細(xì)胞,最終確定血清刺激濃度為1%、時(shí)間6h。用血清及PM2.5刺激巨噬細(xì)胞,分為:對照組、PM2.5組、慢阻肺患者血清組、健康人血清組、PM2.5+慢阻肺病人血清組、PM2.5+健康人血清組。酶聯(lián)免疫吸附(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測細(xì)胞上清液中IL-17濃度、活性比色法定量測定試劑盒檢測細(xì)胞HDAC2活性。Pearson相關(guān)分析IL-17與HDAC2活性之間有無相關(guān)性。結(jié)果:PM2.5、血清單純刺激MH-S細(xì)胞后,較空白對照組細(xì)胞HDAC2活性降低,IL-17分泌增加,且加入慢阻肺患者血清組較加入健康志愿者血清組IL-17升高,MH-S細(xì)胞HDAC2活性降低更明顯,兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。同時(shí)加入血清和PM2.5組,MH-S細(xì)胞HDAC2活性降低、IL-17分泌增多更明顯,與單純加入PM2.5組、單純加入血清組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。慢阻肺患者血清與PM2.5共同刺激組較健康志愿者血清與PM2.5共同刺激組IL-17升高、HDAC2活性降低明顯,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。IL-17與HDAC2之間存在負(fù)相關(guān)(r=-0.786,P0.01)。結(jié)論:單純PM2.5、血清會(huì)導(dǎo)致MH-S細(xì)胞IL-17分泌增多、HDAC2活性降低。血清會(huì)加重PM2.5對MH-S細(xì)胞的影響。慢阻肺患者血清與PM2.5共同刺激對MH-S細(xì)胞的影響較健康人血清與PM2.5更明顯。HDAC2活性與IL-17呈負(fù)相關(guān)。第二部分:Salubrinal在PM2.5致MH-S細(xì)胞炎癥中的作用目的:在前期研究基礎(chǔ)上進(jìn)一步以MH-S細(xì)胞為研究對象,應(yīng)用salubrinal干預(yù)PM2.5刺激的MH-S,探討salubrinal在PM2.5誘導(dǎo)的炎癥細(xì)胞損傷中的作用。方法:本實(shí)驗(yàn)分為3組:(1)對照組:不給于刺激;(2)PM2.5組:培養(yǎng)基中加入PM2.5,使其終濃度為100ug/ml,刺激12小時(shí);(3)PM2.5+salubrinal組:培養(yǎng)基中同時(shí)加入salubrina(lsalubrinal提前1小時(shí)加入30uMol)和PM2.5,刺激12小時(shí)。免疫熒光觀測MH-S的CHOP、GRP78表達(dá),ELISA測IL-17,活性比色法測HDAC2。結(jié)果:PM2.5刺激12小時(shí)后細(xì)胞較空白對照組CHOP熒光增強(qiáng)、核內(nèi)居多,GRP78熒光增強(qiáng)、胞質(zhì)明顯,IL-17含量增加、HDAC2活性降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。加入Salubrinal干預(yù)后CHOP熒光較PM2.5組減弱、GRP78熒光較PM2.5組增強(qiáng)、IL-17含量降低、HDAC2活性增加。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:PM2.5刺激使CHOP、GRP78表達(dá)增多,激活MH-S細(xì)胞ERS。Salibrinal抑制MH-S細(xì)胞CHOP的表達(dá),增強(qiáng)GRP78的表達(dá)。Salubrinal減輕了PM2.5對MH-S細(xì)胞的損傷作用。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R563.9
【部分圖文】：