哮喘是一種以氣道慢性炎癥、氣道高反應(yīng)性和氣道阻塞為特征的疾病,它的確切發(fā)病原因目前還不清楚,有幾個(gè)因素影響它的發(fā)生,遺傳因素、環(huán)境因素和生活方式。近年來(lái),哮喘發(fā)病率和死亡率呈持續(xù)增加趨勢(shì)。 目前常用的平喘藥有三類:⑴支氣管擴(kuò)張藥,如長(zhǎng)效β2受體激動(dòng)劑、抗膽堿藥、緩釋茶堿;⑵抗炎性平喘藥,如糖皮質(zhì)激素、白三烯調(diào)節(jié)劑;⑶抗過(guò)敏平喘藥,如色甘酸鈉。上述治療藥物能有效減輕哮喘患者癥狀和氣道炎癥,但不能根治,長(zhǎng)期使用就會(huì)產(chǎn)生耐受,而且對(duì)于有些哮喘如激素抵抗性哮喘和重癥哮喘,上述藥物療效欠佳,因此,臨床上需要研制一些其它治療哮喘的藥物作為對(duì)上述治療的補(bǔ)充。 目前針對(duì)哮喘異常免疫反應(yīng)的免疫治療包括細(xì)胞因子拮抗劑的藥物研究發(fā)展很快,其它針對(duì)氣管炎癥復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)中各種靶點(diǎn)的藥物如基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、腺苷受體調(diào)節(jié)劑、NF-κB抑制劑、黏附分子拮抗劑、內(nèi)皮素-1(ET-1)受體拮抗劑等也引起人們的重視。近年來(lái)具有藥理作用的天然中草藥正日益受到重視。研究發(fā)現(xiàn)一些中藥如黃芪、丹參、麻黃、防風(fēng)、廣地龍、桃仁、甘草等合用治療哮喘具有改善哮喘患者免疫功能,緩解氣道炎性反應(yīng)的作用,許多研究顯示,麻杏石甘湯、小青龍湯具有抗炎和提高機(jī)體免疫水平的作用。但中藥也存在一些不足之處,如起效慢,作用較弱,中藥成分復(fù)雜,某些成分可能產(chǎn)生一些毒副作用。所以如何提取中藥方中的有效成分,提高中藥的療效,減少一些成分的毒副作用是一個(gè)值得研究的課題。 本實(shí)驗(yàn)基于防治哮喘的傳統(tǒng)中藥珠貝定喘丸(含牛黃、珍珠、川貝、麻黃等)和本課題組對(duì)膽酸同系物抗化學(xué)吸入性肺水腫的研究結(jié)果,對(duì)我院申請(qǐng)新藥“膽麻片”方中主要成分牛黃和麻黃進(jìn)行了離體器官藥理學(xué)研究,以期達(dá)到增強(qiáng)藥效減少副作用的目的,為抗哮喘新藥開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如下:1.在組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮模型上,比較麻黃堿的四個(gè)手性異構(gòu)體對(duì)組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮的拮抗作用強(qiáng)弱,篩選出拮抗作用較強(qiáng)的一種。2.在此模型上比較膽酸各種同系物對(duì)組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮的拮抗作用強(qiáng)弱,篩選出拮抗作用較強(qiáng)的一種。3.將篩選出的麻黃堿和膽酸按一定比例配伍進(jìn)行上述實(shí)驗(yàn),并與單用比較其對(duì)組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮的拮抗作用強(qiáng)弱,分析兩者單用及合用的量-效關(guān)系,比較兩者單用及合用的ED50,以評(píng)價(jià)不同藥物的藥效。 實(shí)驗(yàn)方法釆用離體豚鼠氣管片法。在組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮模型上,用Med-lab-u/4cs生物信號(hào)釆集處理系統(tǒng)記錄加藥后氣管張力的變化,以抑制率、舒張率為觀察指標(biāo):①藥物對(duì)組胺所致氣管片收縮的預(yù)防作用,以抑制率表示。②藥物對(duì)組胺所致氣管片收縮的治療作用,以舒張率表示。麻黃堿不同手性異構(gòu)體及膽酸同系物的藥理作用比較的統(tǒng)計(jì)分析采用單因素k水平方差分析,顯著性水平為0.05。量效曲線擬合采用OriginPro 7.0 S形曲線擬合。配伍實(shí)驗(yàn)相互作用分析采用映射法。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在相同濃度下(終濃度5 mM),左旋麻黃堿和右旋麻黃堿對(duì)氣管片的舒張作用比較強(qiáng),右旋麻黃堿對(duì)組胺的預(yù)防作用較強(qiáng),右旋麻黃堿對(duì)組胺的治療作用最強(qiáng),綜合三個(gè)觀察指標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,右旋麻黃堿對(duì)組胺引起的氣管片收縮作用的拮抗作用最強(qiáng)。 在相同濃度下(終濃度2.5 mM),膽酸、去氧膽酸和鵝去氧膽酸對(duì)氣管片的舒張作用較強(qiáng),去氧膽酸和鵝去氧膽酸對(duì)組胺的預(yù)防作用較強(qiáng),鵝去氧膽酸對(duì)組胺的治療作用最強(qiáng),去氧膽酸次之,綜合三個(gè)觀察指標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,去氧膽酸和鵝去氧膽酸對(duì)組胺引起的氣管片收縮的拮抗作用較強(qiáng),鑒于去氧膽酸價(jià)廉易得,因此我們擬選用去氧膽酸與右旋麻黃堿配伍進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 右旋麻黃堿和去氧膽酸對(duì)氣管片的作用呈劑量依賴性的特點(diǎn),量效曲線呈典型的S型,將右旋麻黃堿和去氧膽酸按4:1比例同時(shí)作用于離體氣管片(兩藥分別配制),量效曲線與兩者單用比較,均顯著左移,提示有增效作用。右旋麻黃堿與去氧膽酸合用的ED50值均比單用小,說(shuō)明兩者合用后有協(xié)同或相加作用。采用映射法分析右旋麻黃堿與去氧膽酸合用的相互作用,結(jié)果顯示小劑量(單用時(shí)20%最大效應(yīng)劑量)右旋麻黃堿(1.9 mM)與去氧膽酸(0.8 mM)合用時(shí)Q值1,說(shuō)明兩者合用有協(xié)同作用,提示兩者合用治療支氣管哮喘的效果可能比麻黃堿和膽酸單用更好,兩者合用可降低麻黃堿的劑量,從而降低副作用。 討論:“膽麻片”方中主要成分之一膽酸及其同系物具有廣泛的藥理作用,如鎮(zhèn)靜,利膽,抗炎,退熱等。本課題組通過(guò)對(duì)膽酸同系物抗化學(xué)吸入性肺水腫的研究顯示,膽酸的同系物抗肺水腫作用強(qiáng)弱順序?yàn)槿パ跄懰狴Z去氧膽酸異去氧膽酸熊去氧膽酸膽酸,此結(jié)果也與本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕Y(jié)果一致。由于膽酸同系物的藥理作用強(qiáng)度與其表面活性順序一致,推測(cè)其藥理作用機(jī)制可能與表面活性有關(guān)。 “膽麻片”方中另一主要成分之一麻黃堿是非選擇性α、β受體激動(dòng)劑,能擴(kuò)張支氣管,可用于輕癥哮喘或預(yù)防哮喘發(fā)作。麻黃堿和偽麻黃堿都可引起心血管、神經(jīng)系統(tǒng)副作用,可能與其對(duì)α、β受體的非選擇性作用有關(guān)。麻黃堿有四種同分異構(gòu)體,兩個(gè)天然的,即1 R,2 S-(-)麻黃堿和1S,2 S -(+)偽麻黃堿,兩個(gè)人工合成的,即1S,2R-(+)麻黃堿和1 R ,2R-(-)偽麻黃堿。本實(shí)驗(yàn)在組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮模型上的研究發(fā)現(xiàn)右旋麻黃堿拮抗組胺作用最強(qiáng)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,麻黃堿四種異構(gòu)體對(duì)β1腎上腺素受體作用強(qiáng)弱順序?yàn)樽笮辄S堿右旋麻黃堿右旋偽麻黃堿=左旋偽麻黃堿,對(duì)β2腎上腺素受體作用強(qiáng)弱順序?yàn)樽笮辄S堿左旋偽麻黃堿=右旋偽麻黃堿右旋麻黃堿。麻黃堿四種異構(gòu)體對(duì)α受體的作用強(qiáng)弱順序未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道有一定差異,考慮可能是由于不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃头椒ㄋ稹?通過(guò)以上研究,我們發(fā)現(xiàn),在組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮模型上,去氧膽酸和右旋麻黃堿對(duì)組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮的拮抗作用較強(qiáng),右旋麻黃堿和去氧膽酸合用(4:1比例)拮抗組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮的作用比兩者單用強(qiáng),證實(shí)了兩者小劑量合用具有協(xié)同作用,從而達(dá)到增強(qiáng)藥效、降低單藥劑量,減少副作用的目的。本研究為抗哮喘新藥開(kāi)發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù),對(duì)發(fā)掘中醫(yī)藥寶庫(kù),利用現(xiàn)代科技手段和方法研究中藥有一定意義。
【學(xué)位單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R562.25
【部分圖文】：

遺傳因素（如哮喘家族史、遺傳性過(guò)敏癥）、環(huán)境因素（染、對(duì)過(guò)敏原的暴露）和生活方式（如吸煙、食物）。道對(duì)變應(yīng)原產(chǎn)生反應(yīng)由三個(gè)階段組成，誘導(dǎo)階段、速發(fā)反段。每個(gè)階段有不同的細(xì)胞因子參與，在誘導(dǎo)階段，Th細(xì)在速發(fā)反應(yīng)階段，肥大細(xì)胞產(chǎn)生各種細(xì)胞因子；在遲發(fā)反、中性粒細(xì)胞、T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、細(xì)胞均產(chǎn)生各種各樣的細(xì)胞因子。長(zhǎng)期慢性氣道炎癥可引氣道炎癥和氣道重構(gòu)的結(jié)果。現(xiàn)進(jìn)行抗炎治療后，哮喘仍會(huì)持續(xù)和發(fā)展，其機(jī)制是[3]：氣子之間的相互作用及Th2細(xì)胞和其它炎性細(xì)胞之間的相互作道重構(gòu)。Th2細(xì)胞在氣道持續(xù)有活性，IL-13 和其它Th2細(xì)胞，導(dǎo)致疾病的持續(xù)和發(fā)展。

2S)-(+)偽麻黃堿 (1R,2R)-(-)偽麻黃堿圖 2 麻黃堿和偽麻黃堿的一對(duì)對(duì)映體的分子結(jié)構(gòu)式文獻(xiàn)報(bào)道，麻黃堿四種異構(gòu)體對(duì)β1腎上腺素受體作用強(qiáng)弱順序?yàn)樽笮辄S堿>右旋偽麻黃堿=左旋偽麻黃堿，對(duì)β2腎上腺素受體作用強(qiáng)旋麻黃堿>左旋偽麻黃堿=右旋偽麻黃堿>右旋麻黃堿，對(duì)β3腎上腺素弱順序?yàn)樽笮辄S堿>右旋麻黃堿>右旋偽麻黃堿=左旋偽麻黃堿[15]。異構(gòu)體對(duì)α受體的作用強(qiáng)弱順序未見(jiàn)報(bào)道。節(jié)研究目的：在組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮模型上，比較麻黃堿異構(gòu)體對(duì)組胺刺激豚鼠離體氣管片收縮的拮抗作用強(qiáng)弱，篩選出拮抗一種。方法 豚鼠，雄性，體重 250-300 g，購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心

時(shí)間（秒）力（克）張圖3 加入不同藥物后氣管片張力變化圖。注：a：基線穩(wěn)定后加入組胺張力增加值；b：用K-H氏液沖洗基線穩(wěn)定后加入受試藥物張力下降值；c：受試藥物作用張力穩(wěn)定后再加組胺的張力增加值；d：用K-H氏液沖洗基線穩(wěn)定后加入組胺的張力增加值；e：組胺作用張力穩(wěn)定后加入受試藥物后張力下降值。軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 2008
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本文編號(hào)：2850630