目的探討脂多糖(LPS)誘導的氣道上皮細胞基質金屬蛋白酶9(MMP-9)表達的TNF-α/NF-κB信號轉導機制及慢病毒介導的解整合素-金屬蛋白酶17(ADAM17)RNA干擾(RNAi)對MMP-9表達的影響。方法構建ADAM17 siRNA慢病毒載體、包裝重組慢病毒。以NF-κB抑制劑(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)或TNF-α拮抗劑(etanercept)預處理HBE4-E6/E7細胞,以LPS刺激HBE4-E6/E7細胞24 h。以重組慢病毒感染HBE4-E6/E7細胞72 h后,以LPS或TNF-α刺激HBE4-E6/E7細胞24 h。以半定量RT-PCR檢測MMP-9 mRNA表達;以酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測TNF-α蛋白含量;以Western blot檢測MMP-9蛋白表達;以凝膠阻滯分析實驗檢測NF-κB活性。結果 LPS或TNF-α刺激均明顯增加HBE4-E6/E7細胞MMP-9 mRNA和蛋白表達及NF-κB活性(P0.05);etanercept和PDTC均明顯抑制LPS誘導的MMP-9表達及NF-κB活性(P0.05)。慢病毒介導的ADAM17 RNAi明顯降低LPS誘導的HBE4-E6/E7細胞上清液中TNF-α蛋白含量(P0.05),亦明顯降低MMP-9 mRNA和蛋白表達及NF-κB活性(P0.05),但不能降低TNF-α誘導的MMP-9mRNA和蛋白表達及NF-κB活性(P0.05)。PDTC明顯抑制TNF-α誘導的MMP-9 mRNA和蛋白表達及NF-κB活性(P0.05)。結論 TNF-α/NF-κB信號通路參與調控LPS誘導的氣道上皮細胞MMP-9的表達,ADAM17通過調節(jié)TNF-α釋放在其信號通路上游起到重要作用。
【文章目錄】：
1 材料
    1.1細胞株
    1.2試劑和儀器
2 方法
    2.1 ADAM17 siRNA設計、質粒載體構建及慢病毒包裝
    2.2細胞培養(yǎng)與分組
    2.3逆轉錄-聚合酶鏈反應
    2.4酶聯(lián)免疫吸附試驗
    2.5 Western blot
    2.6凝膠阻滯分析實驗
    2.7統(tǒng)計學方法
3 結果
    3. 1Etanercept和PDTC對LPS誘導的HBE4-E6 / E7 細胞MMP-9 的表達及NF-κB活性的影響
    3.2慢病毒介導的ADAM17 RNAi對LPS誘導的MMP-9表達及NF-κB活性的影響
    3.3慢病毒介導的ADAM17 RNAi不能阻斷TNF-α誘導的MMP-9表達及NF-κB活性
4 討論

【參考文獻】

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2 ;N-AcetyI-L-cysteine and pyrrolidine dithiocarbamate inhibited nuclear factor-κB activation in alveolar macrophages by different mechanisms[J];Acta Pharmacologica Sinica;2006年03期

【共引文獻】

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4 李君;王陽;郭然然;王紅嫚;;PDTC對大鼠急性肺損傷腫瘤壞死因子-α表達的影響[J];遼寧醫(yī)學院學報;2013年04期

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6 王艷軍;王明科;王曉花;丁猛;周宏元;;p38 MAPK通路在脂多糖致呼吸道上皮損傷中的作用[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2014年22期

7 田莉;王獻華;馬小兵;趙靜;;TNF-α介導的NF-κB信號通路在肺纖維化中的作用[J];現(xiàn)代預防醫(yī)學;2011年02期

8 王紅嫚;薛關生;萬義增;王健;臧東鈺;;吡咯烷二硫代氨基甲酸對脂多糖致急性肺損傷大鼠NF-κB P65蛋白表達的影響[J];中國老年學雜志;2012年13期

9 馬瑞卿;劉立民;閆文貌;程石;;PDTC對急性壞死性胰腺炎大鼠急性肺損傷的影響[J];中國普通外科雜志;2012年03期

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【二級參考文獻】

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