發(fā)布時(shí)間：2020-10-16 15:12

　　 目的探討脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的氣道上皮細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)表達(dá)的TNF-α/NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制及慢病毒介導(dǎo)的解整合素-金屬蛋白酶17(ADAM17)RNA干擾(RNAi)對(duì)MMP-9表達(dá)的影響。方法構(gòu)建ADAM17 siRNA慢病毒載體、包裝重組慢病毒。以NF-κB抑制劑(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)或TNF-α拮抗劑(etanercept)預(yù)處理HBE4-E6/E7細(xì)胞,以LPS刺激HBE4-E6/E7細(xì)胞24 h。以重組慢病毒感染HBE4-E6/E7細(xì)胞72 h后,以LPS或TNF-α刺激HBE4-E6/E7細(xì)胞24 h。以半定量RT-PCR檢測(cè)MMP-9 mRNA表達(dá);以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)TNF-α蛋白含量;以Western blot檢測(cè)MMP-9蛋白表達(dá);以凝膠阻滯分析實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NF-κB活性。結(jié)果 LPS或TNF-α刺激均明顯增加HBE4-E6/E7細(xì)胞MMP-9 mRNA和蛋白表達(dá)及NF-κB活性(P0.05);etanercept和PDTC均明顯抑制LPS誘導(dǎo)的MMP-9表達(dá)及NF-κB活性(P0.05)。慢病毒介導(dǎo)的ADAM17 RNAi明顯降低LPS誘導(dǎo)的HBE4-E6/E7細(xì)胞上清液中TNF-α蛋白含量(P0.05),亦明顯降低MMP-9 mRNA和蛋白表達(dá)及NF-κB活性(P0.05),但不能降低TNF-α誘導(dǎo)的MMP-9mRNA和蛋白表達(dá)及NF-κB活性(P0.05)。PDTC明顯抑制TNF-α誘導(dǎo)的MMP-9 mRNA和蛋白表達(dá)及NF-κB活性(P0.05)。結(jié)論 TNF-α/NF-κB信號(hào)通路參與調(diào)控LPS誘導(dǎo)的氣道上皮細(xì)胞MMP-9的表達(dá),ADAM17通過(guò)調(diào)節(jié)TNF-α釋放在其信號(hào)通路上游起到重要作用。
【文章目錄】：
1 材料
    1.1細(xì)胞株
    1.2試劑和儀器
2 方法
    2.1 ADAM17 siRNA設(shè)計(jì)、質(zhì)粒載體構(gòu)建及慢病毒包裝
    2.2細(xì)胞培養(yǎng)與分組
    2.3逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)
    2.4酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
    2.5 Western blot
    2.6凝膠阻滯分析實(shí)驗(yàn)
    2.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
3 結(jié)果
    3. 1Etanercept和PDTC對(duì)LPS誘導(dǎo)的HBE4-E6 / E7 細(xì)胞MMP-9 的表達(dá)及NF-κB活性的影響
    3.2慢病毒介導(dǎo)的ADAM17 RNAi對(duì)LPS誘導(dǎo)的MMP-9表達(dá)及NF-κB活性的影響
    3.3慢病毒介導(dǎo)的ADAM17 RNAi不能阻斷TNF-α誘導(dǎo)的MMP-9表達(dá)及NF-κB活性
4 討論

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2843418