血管活性腸肽(VIP)是肺內(nèi)非膽堿能非腎上腺能神經(jīng)的主要遞質(zhì)之一,對(duì)多種免疫細(xì)胞的增殖、分化和生物學(xué)功能等具有調(diào)節(jié)作用。VIP可抑制肺泡巨噬細(xì)胞吞噬和T細(xì)胞增殖、減少肺炎性介質(zhì)釋放、促進(jìn)氣道上皮的損傷修復(fù)、清除氧自由基及抗細(xì)胞凋亡。白細(xì)胞介素17(IL-17)是CD4+T細(xì)胞亞群Thl7細(xì)胞來(lái)源的促炎癥細(xì)胞因子,具有強(qiáng)大的募集粒細(xì)胞、促進(jìn)多種炎性細(xì)胞因子釋放及炎癥放大效應(yīng)。IL-17包括6個(gè)亞型,IL-17A～F,IL-17家族中最早被發(fā)現(xiàn)和最重要的是IL-17A。IL-17主要通過(guò)與受體(IL-17R)結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。IL-17R證實(shí)有5個(gè)亞型(IL-17RA-IL-17RD和SEF),其中IL-17RA和IL-17RC均可與IL-17A結(jié)合。IL-17R廣泛表達(dá)于B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、骨髓單核細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞等多種細(xì)胞。研究顯示：在哮喘和肺部感染患者的支氣管肺泡灌洗液中工L-17含量顯著增加；囊性纖維化患者氣道內(nèi)IL-17大量存在；IL-17R缺乏的過(guò)敏性肺炎小鼠肺部炎癥和纖維化明顯減少。在上述過(guò)程中,肺內(nèi)IL-17主要來(lái)源于Th17細(xì)胞還是肺內(nèi)其他細(xì)胞?肺泡巨噬細(xì)胞作為肺內(nèi)重要的常駐細(xì)胞能否分泌IL-177肺成纖維細(xì)胞作為肺纖維化過(guò)程中的重要效應(yīng)細(xì)胞,其胞膜上IL-17R的表達(dá)有何變化?以及VIP對(duì)肺內(nèi)IL-17和IL-17R表達(dá)的調(diào)節(jié)作用尚未見(jiàn)報(bào)道。 目的： 觀察VIP對(duì)LPS應(yīng)激肺內(nèi)IL-17和IL-17R表達(dá)的影響,并初步探討其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。 方法： 1.以昆明小鼠為研究對(duì)象,腹腔注射LPS建立急性肺損傷(ALI)模型。取肺組織切片,HE染色后進(jìn)行組織病理學(xué)觀察；對(duì)支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和分類；采用ELISA法檢測(cè)BALF和肺組織勻漿中IL-17的蛋白含量；用RT-PCR法檢測(cè)小鼠肺組織勻漿中IL-17A mRNA和工L-17RA／C mRNA的表達(dá)。 2.VIP對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞工L-17表達(dá)和分泌的影響：以巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象,采用ELISA法檢測(cè)巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-17含量；采用RT-PCR法檢測(cè)巨噬細(xì)胞IL-17A mRNA的表達(dá),并觀察PKC阻斷劑H-7、PKA阻斷劑H-89對(duì)VIP調(diào)節(jié)作用的影響。 3.VIP對(duì)LPS誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞IL-17R蛋白和工L-17RA／C mRNA表達(dá)的影響：以肺成纖維細(xì)胞為研究對(duì)象,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肺成纖維細(xì)胞胞膜上IL-17R蛋白的表達(dá)；采用RT-PCR法檢測(cè)肺成纖維細(xì)胞IL-17RA／C mRNA的表達(dá)；并觀察PKC阻斷劑H-7、PKA阻斷劑H-89對(duì)VIP調(diào)節(jié)作用的影響。 結(jié)果： 1.小鼠肺組織形態(tài)學(xué)和細(xì)胞分子的變化 (1)肺組織病理切片染色顯示,ALI組肺間隙增厚,肺泡結(jié)構(gòu)紊亂,滲出明顯增加,大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。 (2)白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示,ALI組小鼠BALF中白細(xì)胞數(shù)(35.57±3.27×106)顯著大于對(duì)照組小鼠BALF中的白細(xì)胞數(shù)(21.48±1.39×106),其中中性粒細(xì)胞大量增多(16.71±2.14×106,P0.01)。 (3)ELISA結(jié)果顯示,ALI組小鼠BALF(142.46±2.41 pg／m1)和肺組織勻漿(577.30±5.98 pg／m1)中IL-17的蛋白含量明顯增加(P0.05)。 (4)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,ALI組小鼠肺組織勻漿中IL-17A mRNA表達(dá)顯著增加(0.34±0.02)(P0.01)；IL-17RA mRNA表達(dá)無(wú)明顯變化；IL-17RC mRNA表達(dá)顯著增多(0.68±0.03)(P0.05)。 2.VIP對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-17表達(dá)和分泌的影響： (1)ELISA結(jié)果顯示,LPS可在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)(4,6,12,24h)上調(diào)巨噬細(xì)胞IL-17蛋白的分泌,且在6h達(dá)到峰值(74.32±3.07)pg／ml；VIP可部分逆轉(zhuǎn)該上調(diào)作用,并呈時(shí)間(4,6,12,24h)、劑量相關(guān)性(10-8mol／L-10-6mol／L)；VIP(10-8mol／L)下調(diào)LPS誘導(dǎo)6h巨噬細(xì)胞IL-17蛋白分泌的效應(yīng)可被H-7和H-89部分阻斷(P0.05)。 (2)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,LPS可在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)(2,4,6,12,24h)上調(diào)巨噬細(xì)胞IL-17A mRNA的表達(dá),且在6h(1.09±0.09)達(dá)到峰值；VIP可部分逆轉(zhuǎn)該上調(diào)作用,并呈時(shí)間(4,6,12,24h)、劑量相關(guān)性(10-8mol／L-10-6mol／L)；VIP(10-8mol／L)下調(diào)LPS誘導(dǎo)6h巨噬細(xì)胞IL-17A mRNA表達(dá)的效應(yīng)可被H-7和H-89部分阻斷(P0.01)。 3.VIP對(duì)LPS誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞IL-17R蛋白和IL-17RA／C mRNA表達(dá)的影響： (1)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,LPS在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)(2,4,6,12,24h)對(duì)肺成纖維細(xì)胞工L-17RA mRNA表達(dá)無(wú)明顯影響；LPS刺激肺成纖維細(xì)胞6h后,其IL-17RC mRNA表達(dá)明顯上調(diào)(1.51±0.05)(P0.05),VIP可部分逆轉(zhuǎn)該上調(diào)作用,VIP下調(diào)LPS誘導(dǎo)6h肺成纖維細(xì)胞IL-17RC mRNA表達(dá)的效應(yīng)可被H-7和H-89部分阻斷(P0.05)。 (2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,LPS刺激肺成纖維細(xì)胞6h后,其IL-17R蛋白表達(dá)明顯增加(0.75±0.10)(P0.05)；VIP預(yù)處理可降低該效應(yīng)；VIP調(diào)節(jié)LPS誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞表達(dá)IL-17蛋白的效應(yīng)可被H-7和H-89所阻斷(P0.05)。 結(jié)論： 1.LPS能促進(jìn)肺內(nèi)IL-17、IL-17R蛋白和IL-17RC mRNA的表達(dá)。 2.LPS可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞表達(dá)IL-17,VIP可下調(diào)此效應(yīng),其胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與PKC、PKA有關(guān)。 3.LPS可上調(diào)肺成纖維細(xì)胞IL-17R蛋白和IL-17RCmRNA的表達(dá),VIP可下調(diào)此效應(yīng),其胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與PKC、PKA有關(guān)。
【學(xué)位單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R563
【部分圖文】：

圖1一1.小鼠肺組織病理切片(皿染色，x250)表1一1.小鼠BALF中的白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類(x106，n=5，錄s)組別白細(xì)胞總數(shù)對(duì)照組ALI組21.48士1.3935.57士3.27##中性粒細(xì)胞3.01士0.3816.71士2.14##巨噬細(xì)胞17.70士1.1818.08士1.38

崛邵習(xí)禽吉一一卜一 OhZh4h6h12h24h圖1一10.vIP對(duì)LPS在不同時(shí)間點(diǎn)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞表達(dá)IL一17AmRNA的影響(n=5，了士s)##與oh組相比P<0.01;*與LPS組相比P<0.05，注:Lv:LPS+Vlp，oh，Zh，4h，6h，一Zh

lllllllllllllll鬢鬢鬢 lllllllllllllllll馨馨馨 馨馨蘸蘸 {{{{{{{ lllllllllllllll馨馨馨 馨 薰薰薰 lllllllllllllllllllllll摹摹摹 摹摹 摹 摹摹 摹摹摹摹摹摹摹編 矍編 矍 矍矍 矍 矍矍 矍矍矍矍蒙蒙蒙羹馨篡篡黝 黝 黝黝 黝 黝黝 黝黝 黝 黝黝黝 黝︵崔側(cè)劣二。，工V︸\)謂鍘劣V卜一l、一一︶月鄰禽辱酬V卜一l三圖1一11.不同劑量的viP對(duì)LPs誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞表達(dá)IL一 17AmRNA的影響(n二5，了士S)##與LPS組相t匕P<0.01注:Lv:LPs+vIP，口l一腳5分別表示vxP濃度為10一‘。mol/L，10一gmol/L，10一smol/L，10一，mol幾，10一6mol/L
【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 趙玉蓮;連翹酯苷對(duì)雞法氏囊炎癥因子及抗氧化功能的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2837559