目的建立OVA致敏和激發(fā)的昆明小鼠哮喘模型,觀察肺泡灌洗液中細(xì)胞分類的變化,哮喘組肺組織的病理改變以及IL-17、IgE在哮喘組、布地奈德干預(yù)組及正常組小鼠血清中的變化,探討IL-17在哮喘發(fā)病機(jī)制中的作用以及糖皮質(zhì)激素的早期干預(yù)對哮喘病理變化的影響。 方法SPF級雌性昆明小鼠(大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心),4~6周齡,體重18~20g,隨機(jī)分為3組,每組10只,A組為哮喘模型組,B組為布地奈德干預(yù)組,C組為正常對照組。A、B組小鼠于實(shí)驗(yàn)流程第0,7,14天給予腹腔注射OVA20μg+150μLAl(OH)3+50μLNS致敏;第27,28,29天,給予50μL OVA-NS(2g/L)滴鼻激發(fā);第30~60天A組給予2%OVA生理鹽水霧化液40ml超聲霧化器霧化吸入,每天1次,每次持續(xù)約30min。B組首先給予布地奈德溶液50μL滴鼻干擾,1小時后再霧化,霧化吸入OVA溶液方法同A組,C組以生理鹽水代替致敏液、激發(fā)液及霧化液,方法同A組。在最后一次激發(fā)24h后,摘取小鼠眼球放血后將其頸椎脫臼處死,三組小鼠行支氣管肺泡灌洗術(shù)。將回收的肺泡灌洗液涂片,固定,光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞總數(shù)和分類的計數(shù)。細(xì)胞分類至少計數(shù)400個細(xì)胞,求出嗜酸性粒細(xì)胞所占百分比。三組小鼠開胸取出肺組織,置于10%的中性甲醛固定液中固定。常規(guī)取材、脫水、石蠟包埋、制備石蠟切片、HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀察氣道組織形態(tài)、氣道上皮損傷、氣管及血管周圍嗜酸性粒細(xì)胞浸潤情況。外周血以3000r/min離心5min,將部分上清液保存在-80℃冰箱用作IL-17A的測定,其余上清液保存于4℃測IgE。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測三組小鼠血清IL-17A、IgE水平表達(dá)情況。 結(jié)果: 1.激發(fā)過程中哮喘組小鼠出現(xiàn)不同程度的前肢搔鼻,煩躁不安,之后俯伏不動,呼吸急促,二便失禁、皮毛失去光澤等癥狀;布地奈德干預(yù)組小鼠布地奈德干預(yù)前癥狀同哮喘組小鼠,干預(yù)后此類癥狀明顯減輕;而正常對照組小鼠無此類癥狀。 2.肺組織病理觀察結(jié)果:在高倍鏡下觀察,哮喘組小鼠氣管壁增厚,管腔變形,呼吸道可見上皮細(xì)胞脫落,黏液分泌明顯增多,平滑肌層增厚,黏膜下及管壁周圍炎性細(xì)胞明顯浸潤。布地奈德干預(yù)組可見上皮細(xì)胞偶有脫落,黏膜相對光滑完整,管壁增厚及炎癥細(xì)胞浸潤均明顯輕于哮喘組。正常對照組肺組織幾乎無上述病理改變。 3.肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞百分比:肺泡灌洗液嗜酸性粒細(xì)胞百分比:哮喘組肺泡灌洗液嗜酸性粒細(xì)胞為15.503%士1.235%,干預(yù)組肺泡灌洗液嗜酸性粒細(xì)胞百分率為4.628%士1.440%,正常對照組肺泡灌洗液嗜酸性粒細(xì)胞百分率為1.892%士1.029%,哮喘組肺泡灌洗液嗜酸性粒細(xì)胞百分率顯著高于干預(yù)組和正常組(P0.01)。 4.IL-17:IL-17A在哮喘組小鼠血清中的濃度為10.714士2.287(ng/ml) ,IL-17A在干預(yù)組小鼠血清中的濃度為5.807士1.653(ng/ml),IL-17A在正常對照組小鼠血清中的濃度為0.3860士0.1456(ng/ml)。IL-17A在哮喘組小鼠血清中的表達(dá)水平顯著增高,與干預(yù)、正常組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。 5.IgE: IgE在哮喘組小鼠血清中的濃度為6.939士0.119(ng/ml),IgE在對照組小鼠血清中的濃度為5.538士0.24(ng/ml),IgE在正常組小鼠血清中的濃度為5.443士0.249(ng/ml)。IgE在哮喘組小鼠血清中的表達(dá)水平顯著增高,與B、C組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),干預(yù)組與正常組相比,IgE水平的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 6.哮喘組肺組織中IL-17A水平與血清中IgE水平、BALF中嗜酸性粒細(xì)胞比例呈正相關(guān)(分別為r=0.720,P=0.019;r=0.892,P=0.001)。 結(jié)論: 1.成功建立小鼠哮喘模型,其病理變化符合哮喘的病理生理改變。 2.IL-17通過招募炎性分子在氣道聚集,引起氣道的慢性炎癥,參與了哮喘的發(fā)病。 3.糖皮質(zhì)激素可抑制IL-17的分泌,使炎癥細(xì)胞在肺部的浸潤減少,減輕肺部的炎癥反應(yīng),防止氣道重塑。
【學(xué)位單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R562.25
【部分圖文】：

6. 相關(guān)性分析哮喘組模型中，血清中IL-17水平與IgE水平、BALF中嗜酸性粒細(xì)胞呈正相關(guān)（r=0.720，P=0.019;r=0.892，P=0.001）。（見圖1,圖2）圖1 哮喘組血清中IL-17水平與IgE水平的曲線估計圖2 哮喘組血清中IL-17水平與BALF中嗜酸性粒細(xì)胞水平的曲線估計

6. 相關(guān)性分析哮喘組模型中，血清中IL-17水平與IgE水平、BALF中嗜酸性粒細(xì)胞呈正相關(guān)（r=0.720，P=0.019;r=0.892，P=0.001）。（見圖1,圖2）圖1 哮喘組血清中IL-17水平與IgE水平的曲線估計圖2 哮喘組血清中IL-17水平與BALF中嗜酸性粒細(xì)胞水平的曲線估計
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2836578