發(fā)布時(shí)間：2020-10-11 08:53

　　 第一部分一氧化氮在實(shí)驗(yàn)性肺血栓栓塞癥中的作用 目的觀察肺血栓栓塞癥(PTE)時(shí)血管內(nèi)皮功能的變化，探討一氧化氮(NO)對(duì)PTE的作用。 方法采用自體血栓回輸法建立PTE模型，隨機(jī)分為對(duì)照組(C組)、模型組(M組)、左旋精氨酸組(L-Arg，L組)、NO合酶抑制劑組(L-NAME，N組)。各組動(dòng)物在栓塞后1h、3h、1d、3d、5d、7d六個(gè)時(shí)間段分別處死，取動(dòng)脈血做血?dú)夥治�，行病理分析；采用硝酸還原酶法和酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)方法分別檢測(cè)血中NO的水平和血管性血友病因子(vWF)水平；免疫組化方法檢測(cè)肺組織中內(nèi)皮素(ET-1)及內(nèi)皮型NO合酶(eNOS)蛋白水平；原位雜交方法檢測(cè)肺組織中eNOSmRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果肺栓塞后病理可見(jiàn)肺動(dòng)脈血栓形成，炎性反應(yīng)明顯，血氧分壓(PaO_2)及血二氧化碳分壓(PaCO_2)在栓塞后1h均明顯下降(P＜0.01)，3h后均有所上升，PaO_2仍低于正常水平，而PaCO_2逐漸恢復(fù)到正常水平；血中NO水平和肺組織中eNOS蛋白及mRNA水平在栓塞后下降(P＜0.01)，而血中vWF和肺組織中ET-1蛋白表達(dá)在栓塞后明顯增高(P＜0.05)。應(yīng)用L-Arg后，與M組比較，血?dú)夥治鑫匆?jiàn)明顯改善，但炎性損傷減輕；血中NO水平和肺組織中eNOS蛋白及mRNA水平增高(P＜0.05)，而血中vWF和肺組織中ET-1蛋白表達(dá)下降(P＜0.05)。L-NAME可以使炎癥加劇，血?dú)夥治黾又兀蠳O水平和肺組織中eNOS蛋白及mRNA水平與M組、L組、C組比較下降(P＜0.05)，而血中vWF和肺組織中ET-1蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)。 結(jié)論P(yáng)TE時(shí)肺血管內(nèi)皮功能損傷，引起炎癥反應(yīng)，抗炎治療對(duì)治療PTE具有重要的作用。L-Arg可以保護(hù)血管內(nèi)皮，改善血管內(nèi)皮功能，有抑制肺部炎癥的作用。 第二部分一氧化氮對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺血栓栓塞癥中致炎因子及NF-κB的影響 目的觀察PTE時(shí)肺內(nèi)致炎因子腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素-1(IL-1β)、白介素-6(IL-6)及核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)的變化，研究NO對(duì)PTE致炎因子及NF-κB的影響，探討其抑制肺部炎癥可能的機(jī)制。 方法PTE模型的制備及分組同第一部分，采用硝酸還原酶法檢測(cè)NO的水平，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)肺組織TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA的表達(dá)，蛋白印跡(Western blot)的方法檢測(cè)肺組織NF-κB蛋白的表達(dá)。 結(jié)果NO水平變化同第一部分。血栓栓塞后1h肺組織中TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA水平均明顯增高(P＜0.01)，到第5d達(dá)到高峰，第7d表達(dá)開(kāi)始下降，但仍明顯高于正常水平(P＜0.01)；NF-κB蛋白的表達(dá)從栓塞后1h開(kāi)始升高，隨后逐漸增高，與C組相比差異有顯著性(P＜0.01)。應(yīng)用L-Arg后，肺組織中TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA水平均明顯下降(P＜0.05)，肺組織中NF-κB蛋白的表達(dá)也明顯下降(P＜0.05)。而應(yīng)用L-NAME后，肺組織中TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA水平與M組、L組、C組比較增高(P＜0.05)；且肺組織中NF-κB蛋白的表達(dá)也明顯增高(P＜0.05)。 結(jié)論P(yáng)TE時(shí)NF-κB被激活，表達(dá)增強(qiáng)，促進(jìn)肺內(nèi)TNF-α、IL-1β、IL-6大量表達(dá)；NO可通過(guò)抑制NF-κB的表達(dá)來(lái)抑制致炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的基因表達(dá)，起到抑制炎癥，減輕肺損傷的作用。 第三部分一氧化氮對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺血栓栓塞癥中HIF-1和ERK1／2表達(dá)的影響 目的觀察PTE時(shí)肺組織中缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK1／2)的變化，研究NO對(duì)PTE中HIF-1及ERK的影響，探討其治療PTE可能的機(jī)制。 方法PTE模型的制備、分組及NO檢測(cè)方法同第一部分，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)肺組織HIF-1αmRNA的表達(dá)，蛋白印跡(Western blot)的方法檢測(cè)肺組織ERK1／2蛋白的表達(dá)。 結(jié)果NO水平變化同第一部分。血栓栓塞后1h肺組織中HIF-1αmRNA水平均明顯增高(P＜0.01)，隨后逐漸增高，ERK1／2蛋白的表達(dá)從栓塞后1h開(kāi)始升高，隨后逐漸增高，與C組相比差異有顯著性(P＜0.01)。應(yīng)用L-Arg后，肺組織中HIF-1αmRNA水平與M組比較明顯下降(P＜0.05)，肺組織中ERK1／2蛋白的表達(dá)也明顯下降(P＜0.05)。而應(yīng)用L-NAME后，肺組織中HIF-1αmRNA和ERK1／2蛋白水平與M組、L組、C組比較均增高(P＜0.05)。 結(jié)論P(yáng)TE時(shí)，由于缺血缺氧導(dǎo)致肺內(nèi)HIF-1αmRNA的表達(dá)增強(qiáng)，參與了CTEPH的形成。NO可以通過(guò)抑制肺內(nèi)ERK蛋白的表達(dá)，抑制HIF-1α的表達(dá)，起到抑制慢性血栓栓塞性肺動(dòng)脈高壓(CTEPH)形成的作用。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2006
【中圖分類(lèi)】：R563.5
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 一氧化氮在實(shí)驗(yàn)性肺血栓栓塞癥中的作用
第二部分 一氧化氮對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺血栓栓塞癥中致炎因子及NF-κB的影響
第三部分 一氧化氮對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺血栓栓塞癥中HIF-1和ERK1/2表達(dá)的影響
結(jié)論
綜述
附錄
致謝

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

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本文編號(hào)：2836369