目的高氧機械通氣治療是臨床中搶救危重病人最有效的方法之一,然而長時間持續(xù)吸入高濃度氧可導(dǎo)致肺氧化應(yīng)激性損傷,目前對高氧肺損傷的發(fā)病機制尚未完全清楚,因而臨床上尚無確定有效的防治方法。高氧肺損傷的一個重要組織學(xué)特點是細胞凋亡。c-Jun氨基末端激酶(C-Jun NH2-terminal kinase ,JNK)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPKs)家族中的重要通路之一,對細胞的凋亡調(diào)節(jié)發(fā)揮著重要作用。本課題采用幼鼠建立高氧肺損傷動物模型,觀察高氧下肺組織細胞凋亡及JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活的時空分布特征,并探討JNK信號通路對高氧誘導(dǎo)的肺細胞凋亡的影響,從而研究JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在高氧肺損傷中的作用。 方法3周Wistar大鼠48只采用隨機圖標法分為6組,每組8只:空氣對照組、高氧暴露3天組、高氧暴露7天組、高氧暴露14天組、空氣+SP600125干預(yù)組、高氧暴露7天+SP600125干預(yù)組。高氧組持續(xù)吸入高濃度氧(O295%),空氣對照組置于室內(nèi)空氣中(O2≈21%)。SP600125干預(yù)組動物經(jīng)腹腔注射SP600125 30mg/kg,2h后再予高氧或空氣暴露。采用肉眼及蘇木精和伊紅(Hematoxylin and eosin ,HE)染色光鏡下觀察肺組織病理學(xué)變化,末端標記法( Terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)分析肺組織細胞凋亡的變化,免疫組化檢測肺組織磷酸化-JNK(p-JNK)的表達和分布,蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)檢測肺組織p-JNK蛋白質(zhì)的含量。 結(jié)果肺組織病理學(xué)改變表現(xiàn)為高氧3天時肺組織充血、水腫、出血和炎性細胞浸潤,高氧7天時上述改變更加明顯,高氧14天時則肺組織充血水腫減輕,間質(zhì)增厚,成纖維細胞增生明顯。TUNEL分析表明空氣對照組肺組織中少見凋亡細胞,而高氧暴露3天、7天、14天組肺組織中可見大量的凋亡細胞(P0.05),尤以高氧暴露3、7天明顯;凋亡細胞以肺泡上皮細胞、小氣道上皮細胞及血管內(nèi)皮細胞為主,部分巨噬細胞、間質(zhì)細胞、浸潤的炎癥細胞也呈凋亡改變。免疫組化結(jié)果提示空氣對照組偶有少量p-JNK陽性表達,而高氧暴露組則p-JNK陽性表達顯著增多,以高氧7天組增多最為明顯;陽性細胞廣泛分布于肺泡上皮細胞、小氣道上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞、巨噬細胞、間質(zhì)細胞以及浸潤炎癥細胞。Western blot結(jié)果顯示空氣對照組僅有少量p-JNK蛋白表達,高氧暴露3天、7天、14天組p-JNK蛋白表達含量明顯增加(P0.05),以在高氧7天組增加最為明顯。在空氣和高氧暴露7天,SP600125干預(yù)后肺組織p-JNK蛋白表達含量較相應(yīng)未干預(yù)組均出現(xiàn)明顯抑制(P0.05),且在高氧暴露7天,SP600125干預(yù)后顯著減少了肺組織細胞的凋亡(P0.05)。 結(jié)論 1.我們成功復(fù)制出高氧性肺損傷動物模型。 2.高氧在肺損傷的急慢性階段可誘導(dǎo)肺組織細胞發(fā)生凋亡,細胞凋亡是高氧肺損傷的一個重要病理組織學(xué)特點。 3. JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在高氧肺損傷中被激活,可能參與了高氧肺損傷的發(fā)病機制并介導(dǎo)了其發(fā)生、發(fā)展。 4. JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與介導(dǎo)了高氧下肺細胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo),發(fā)揮促細胞凋亡效應(yīng)。阻斷或抑制JNK信號通路,有可能起到肺損傷保護作用。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類】：R563
【部分圖文】：

圖 5 高氧暴露不同時段肺組織細胞凋亡指數(shù)的變化( x ±s, n=8)Fig 5 The change of cell apoptotic index in lung tissues during exposed to hyperoxia( x ±s,n=8)注：A:空氣對照組 B:高氧 3 天組 C:高氧 7 天組 D:高氧 14 天組★與空氣對照組比較， P＜0.05◆與高氧 14 天組比較， P＜0.052.3 p-JNK 蛋白在肺組織中表達和分布的變化空氣對照組偶有少量 p-JNK 陽性表達，主要見于肺泡上皮細胞及小氣道上皮細胞，高氧暴露組則陽性細胞顯著增多，以高氧 7 天組增多最為明顯。陽性細胞廣泛分布于肺泡上皮細胞、小氣道上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞、巨噬細胞、間質(zhì)細胞以及浸潤炎癥細胞（圖 4）。2.4 肺組織 p-JNK 蛋白表達含量的變化

A B C D 高氧暴露不同時間肺組織 p-JNK 蛋白含量的6 The change of protein level of p-JNK in luduring exposed to hyperoxia對照組 B:高氧 3 天組 C:高氧 7 天組暴露不同時段肺組織 p-JNK 蛋白含量相對變化ge of protein level of p-JNK in lung tissues dur（x ±s,n=8）p-JNK0.11±0.030.27±0.06★

圖 7 高氧暴露不同時段肺組織 p-JNK 蛋白含量相對變化（x ±s,n=8）Fig7 The change of protein level of p-JNK in lung tissues during exposed to hyperoxia（x ±s,n=8）注：A:空氣對照組 B:高氧 3 天組 C:高氧 7 天組 D:高氧 14 天組★與空氣對照組比較， P＜0.05n ◆與高氧 3 天組比較， P＜0.052.5 JNK 抑制劑 SP600125 干預(yù)后肺組織 p-JNK 蛋白表達含量的變化Western blot 結(jié)果顯示，在空氣和高氧暴露 7 天，SP600125 干預(yù)后肺組織 p-JNK蛋白表達含量較相應(yīng)未干預(yù)組均出現(xiàn)明顯減少（P＜0.05）（表 3，圖 8、9），說明JNK 抑制劑（SP600125）在空氣和高氧暴露下均能特異性阻斷 JNK 的激活。
【參考文獻】

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本文編號：2836089