目的：通過分析慢性阻塞性肺病患者痰液菌群結(jié)構(gòu)改變情況，初步探討痰液菌群改變與COPD發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，以期為臨床COPD的預(yù)防、診斷及治療過程中引入呼吸道菌群這一新的靶標(biāo)提供依據(jù)，為呼吸系統(tǒng)疾病的個(gè)體化治療開拓思路。 方法：按照痰液細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化操作程序收集臨床COPD患者痰液樣本，提取樣本中全部細(xì)菌總DNA，通過PCR技術(shù)，選用通用引物擴(kuò)增樣品中全部細(xì)菌16S rRNA基因。將擴(kuò)增產(chǎn)物通過變性梯度凝膠電泳(DGGE)分離，獲得痰液細(xì)菌種屬結(jié)構(gòu)圖譜，對有意義的DNA條帶進(jìn)行切膠并克隆測序。利用Real-time PCR定量分析COPD患者痰液肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）和肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae）的變化。 結(jié)果：COPD組與健康人群組痰液細(xì)菌DGGE圖譜有明顯差異(P 0.05)。Real-time PCR結(jié)果顯示：與正常組相比，COPD組中銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌和肺炎鏈球菌的數(shù)量均顯著增加(P 0.05)。 結(jié)論：DGGE和Real-time PCR技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用有助于評估慢性阻塞性肺病患者呼吸道菌群結(jié)構(gòu)改變狀況。COPD患者痰液菌群結(jié)構(gòu)及特定細(xì)菌數(shù)量較之正常人群發(fā)生顯著性改變。提示COPD患者痰液菌群結(jié)構(gòu)改變可能與慢性阻塞性肺病的發(fā)生、發(fā)展有一定關(guān)聯(lián)。
【學(xué)位單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R563.9
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
材料與方法
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 樣品收集
        1.2 載體和菌株
        1.3 主要儀器
        1.4 主要試劑
        1.5 實(shí)驗(yàn)相關(guān)溶液配方
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)菌總 DNA 的提取
        2.2 PCR 擴(kuò)增
        2.3 DGGE 電泳
        2.4 DGGE 圖譜分析
        2.5 克隆測序
        2.6 Real-time PCR
        2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    3.1 PCR 對 16S rRNA 基因的擴(kuò)增
    3.2 對 DGGE 圖譜進(jìn)行相似性聚類分析
    3.3 克隆測序結(jié)果
    3.4 Real-time PCR 的定量分析
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝


本文編號(hào)：2835615