目的：研究脂多糖(LPS)和血小板活化因子(PAF)誘導(dǎo)急性肺損傷(ALI)機(jī)制及G蛋白偶聯(lián)受體激酶(GRKs)對(duì)其調(diào)控作用，通過(guò)觀察LPS、PAF誘導(dǎo)大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(RPMVEC)損傷時(shí)單層通透系數(shù)(Kf)和F-肌動(dòng)蛋白(F-actin)的變化，以探討F-actin在RPMVEC損傷時(shí)的作用，并通過(guò)觀察GRKs的變化對(duì)Kf和F-actin的影響，以了解GRKs在炎癥誘導(dǎo)細(xì)胞損傷過(guò)程中的調(diào)控作用。 方法：在體外分離、培養(yǎng)RPMVEC的基礎(chǔ)上，觀察不同濃度的LPS、PAF作用RPMVEC不同時(shí)相點(diǎn)細(xì)胞脫落的情況、HE染色后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、細(xì)胞單層通透性和F-actin的變化，及山莨菪堿、佛波酯(PMA)、燈盞花素的干預(yù)作用。采用針頭式濾器檢測(cè)細(xì)胞單層通透性，并用流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)FITC標(biāo)記F-actin，采用Western blot觀察RPMVEC是否表達(dá)GRK2，以及LPS、PAF作用RPMVEC不同時(shí)間和山莨菪堿、佛波酯、燈盞花素干預(yù)后GRK2的變化。 結(jié)果：1 成功體外分離培養(yǎng)RPMVEC，并觀察到LPS 1μg／ml作用48h、10μg／ml作用12h、100μg／ml作用8h可見(jiàn)細(xì)胞脫落和破裂，100ng／ml作用48h仍未見(jiàn)有細(xì)胞脫落或破裂，PAF100ng／ml作用48h、1ug／ml作用24h、10ug／ml作用8h、50ug／ml作用30min可見(jiàn)細(xì)胞脫落和破裂。HE染色見(jiàn)LPS組、PAF組(劑量分別為10μg／ml LPS、10μg／ml PAF處理12h)，細(xì)胞數(shù)目較正常組減少，細(xì)胞多呈梭形，部分細(xì)胞胞體縮小，核濃縮。兩組分別加10μg／ml山莨菪堿、50ng／ml佛波酯、50ug／ml燈盞花素(以下各組所加劑量分別與本組相同)后可見(jiàn)：LPS+山莨菪堿組、LPS+佛波酯組、PAF+山莨菪堿組、PAF+佛波酯組、PAF+燈盞花素組細(xì)胞數(shù)較LPS和PAF組多，細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞核分裂像變化不大，胞漿較豐富，LPS+燈盞花素組較LPS組無(wú)明顯差別。2 10μg／ml LPS分別作用15、30、60、90、120min，RPMVEC單層的Kf值較對(duì)照組顯著增高，山莨菪堿組和佛 安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 波酷組各時(shí)相點(diǎn)Kf值顯著低于LPS組，燈盞花素組各時(shí)相點(diǎn)Kf值與LPS組比較，無(wú) 顯著差異;10林g/ml pAF組30·60·90·12Omin Kf值較對(duì)照組顯著增高，山蓖蓉堿 組各時(shí)相點(diǎn)Kf值顯著低于PAF組，佛波醋組30、60、gomin Kf值顯著低于PAF組， 燈盞花素組60、90、120min Kf值顯著低于pAF組。3 10協(xié)g/ml LpS作用RpMVEC 30min、 60min、gomin，F(xiàn)一aetin值較對(duì)照組顯著降低，山蓑若堿組和燈盞花素組gomin F一actin值與LPS組相比，無(wú)顯著差異，佛波酷組90minF一aCtin值顯著高于LPS組。 lug/m1LPS作用即MVEC gominF一actin值較對(duì)照組顯著降低，而山食若堿和燈盞花素 可抑制lug/m1LpS作用細(xì)胞引起的F一aetin降低。1009/ml pAF組作用即MVEC 3omin、 60min、90min、12OminF一aetin值較對(duì)照組顯著降低，山蓑若堿組、佛波酷組、燈 盞花素組90minF一aetin值均顯著高于PAF組。4 Western一blot檢測(cè)RPMVEC表達(dá) GRKZ;用10“g/ml LpS刺激即MVEC 3omin、6omin、90Inin與正常對(duì)照組相比GRKZ表 達(dá)明顯增高;佛波酷30min組、90min組與LPS 30min組、90min組相比GRKZ表達(dá)明 顯增高，組間比較有顯著差異;山蓑若堿gomin組、燈盞花素 gomin組與LPS 90min 組相比兩者之間無(wú)差異。用10協(xié)g/ml pAF刺激RpMVEC 3omin、60min·90min與正常 對(duì)照組相比GRKZ表達(dá)明顯增高;山蓑若堿90min組與PAF 90min組之間無(wú)差異;佛 波酷30min，90min組與PAF 30min，90min組相比明顯增高;燈盞花素90min組與 PAF 90min組相比顯著增高。 結(jié)論:1成功進(jìn)行原代培養(yǎng)RPMVEC，鑒定確定為RPMVEC，并觀察到LPS、PAF作 用于即MVEC可引起細(xì)胞脫落及細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。2 LPS、PAF作用于即MVEC可引起 F一actin的解聚和單層通透性的增高。3 LPS、PAF作用RPMVEC不同時(shí)相點(diǎn)可引起細(xì) 胞GRKZ表達(dá)增高。4山食若堿可抑制LPs、PAF引起的RPMVEC單層通透性增高及PAF、 lug/ml LPS引起的RPMVECF一actin下降，對(duì)PAF、LPS作用RPMVEC引起的GRKZ表 達(dá)增高無(wú)影響。5小劑量PMA可抑制LPS、以F作用RPMVEC單層通透性的增高和 F一aCtin的下降，且可引起LPS、PAF作用RPMVEC的GRKZ表達(dá)明顯增高。6燈盞花素 可抑制PAF作用RPMVEC單層通透性增高和F一actin下降，并能促進(jìn)PAF作用RPMVEC GRKZ表達(dá)的進(jìn)一步增高，燈盞花素對(duì)1009/ml LPS作用于即MVEC的上述各環(huán)節(jié)無(wú)影 響，卻可抑制lug/m1LPS作用細(xì)胞引起的F一aCtin下降。7 RPMVEC的F一aetin的解 安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 聚可能是RPMVEC單層通透性的增高的原因之一，GRKZ的表達(dá)增高可抑制LPS、以F 誘導(dǎo)RPMVEC損傷。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R563.8
【文章目錄】：
英文縮略詞
中文摘要
中文關(guān)鍵詞
英文摘要
英文關(guān)鍵詞
脂多糖和血小板活化因子誘導(dǎo)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷機(jī)制及GRKs對(duì)其調(diào)控研究
    前言
    第一部分 LPS和PAF對(duì)大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響及藥物干預(yù)作用
        材料與方法
        結(jié)果
    第二部分 LPS、PAF對(duì)RPMVEC單層通透性的影響及藥物干預(yù)作用
        材料與方法
        結(jié)果
    第三部分 LPS、PAF對(duì)RPMVEC F-actin的影響及藥物干預(yù)作用
        材料與方法
        結(jié)果
    第四部分 LPS和PAF對(duì)大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞GRK2的影響及藥物干預(yù)
        材料與方法
        結(jié)果
    討論
    結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
照片

【參考文獻(xiàn)】

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1 肖貞良,孫耕耘,錢桂生;肺循環(huán)灌注對(duì)大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離和培養(yǎng)的影響[J];中國(guó)病理生理雜志;1999年11期

本文編號(hào)：2834527