[目的]嚴重內(nèi)毒素血癥極易并發(fā)急性呼吸窘迫綜合征(ARDS),死亡率高。內(nèi)毒素耐受是預(yù)先注射小劑量或亞致死量LPS后,機體對大劑量或致死量LPS呈低反應(yīng)甚至無反應(yīng)的現(xiàn)象。但其機制目前尚不清楚。本實驗通過建立內(nèi)毒素耐受大鼠和內(nèi)毒素血癥肺部炎癥反應(yīng)模型,比較內(nèi)毒素耐受和正常對照大鼠血清、肺泡灌洗液(BALF)和肺臟組織中的E—選擇素(E—selectin)、P—選擇素(P—Selectin)和血管細胞間黏附分子—1(VCAM—1)的動態(tài)變化,研究E、P—選擇素和VCAM—1在內(nèi)毒素耐受時,對大劑量LPS導(dǎo)致的微血管通透性升高、肺部PMN浸潤和急性炎癥反應(yīng)削弱或抑制等相關(guān)病理生理改變中的作用。研究內(nèi)毒素耐受和正常大鼠肺部NF-κB核轉(zhuǎn)位和活化的變化以及亞單位構(gòu)成,明確NF-κB在內(nèi)毒素耐受中的分子調(diào)節(jié)機制。[方法](1)內(nèi)毒素耐受和內(nèi)毒素血癥肺部炎癥反應(yīng)模型的建立:清潔級健康雄性SD大鼠,體重170～200克,共82只,隨機分入內(nèi)毒素耐受(ET)組和正常對照(NC)組。ET組0.6mg/kg/d(小劑量)腹腔注射LPS,連續(xù)4天建立內(nèi)毒素耐受大鼠模型;NC組注射等量生理鹽水。第五天腹腔注射6mg/kg LPS(大劑量)誘導(dǎo)全身以及肺部炎癥反應(yīng)。第一部分:各組按注射大劑量LPS前(0h),注射后1、2、6、24h分為5組,n=5。在各時間點腹主動脈采血,立即進行外周血白細胞計數(shù)和分類;左側(cè)肺灌洗取BALF立即進行白細胞計數(shù)和沉渣白細胞分類:右側(cè)肺組織分別迅速置入4%甲醛和液氮。將血清、BALF上清和速凍后的肺組織于-80℃保存待側(cè)。第二部分:各組按注射大劑量LPS前(0h),注射后2、6、24、48、72h分為6組,n=6。在各時間點取右側(cè)肺組織分別迅速置入4%甲醛和液氮。速凍后的肺組織于-80℃保存待側(cè)。(2)采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清、BALF和肺組織勻漿E—Selectin、P—selectin和VCAM—1。(3)電泳遷移率變動分析(EMSA)測定肺部NF-κB核轉(zhuǎn)位和活化的變化以及亞單位構(gòu)成。(4)統(tǒng)計學(xué)分析:采用SPSS10.0醫(yī)學(xué)統(tǒng)計軟件,變量以平均數(shù)±標準差(SD)表示,組間比較采用t檢驗,組內(nèi)比較采用Dunnett's方差分析。[結(jié)果](1)在1h時血清中E-selectin不論在ET組抑或NC組均有明顯的上升,但兩組間無顯著性差異(70.31±10.67pg/mL Vs 54.95±13.10 pg/mL,p0.05),2 h ET組和NC組出現(xiàn)明顯的E—selectin下降,而且2h、6h、24h三個時間點兩組的E—selectin趨向穩(wěn)定,與在LPS刺激前表達水平相當。(2)ET組的BALF中酌E—selectin表達變化與血液中E—selectin明顯不同。NC組在接受大劑量LPS后1h即出現(xiàn)明顯的E—selectin表達的升高,顯著高于接受大劑量LPS前(89.72±16.66 pg/mL Vs40.95±15.80 pg/mL,p0.01),之后在2h和6h明顯下降,但高于接受LPS前,到
【學(xué)位單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2005
【中圖分類】：R563.1
【部分圖文】：

表4.血清中E一選擇素表達正常對照組(pg/mL)內(nèi)毒素耐受組(pg/mL)時間點h()平均值標準差平均值標準差031.153.7427.993.03170.31***10.6754.95***13.10229.951.9727.772.30626.471.7926.663.882436.5920.6628.552.42與同組注射LpS前比較，p<0.05，**與同組注射LpS前比較p<0.01，***與同組注射LpS前比較p<0.001，#與NC組同一時期比較，p<0.05，##與NC組同一時期比較，p<.001，###與NC組同一時期比較，p<.0001。

表5.支氣管肺泡灌洗液中-E選擇素表達正常對照組(pg/mL)內(nèi)毒素耐受組(pg/mL)時間點h()平均值標準差平均值標準差6124144987.910204029麟#**#nj八bt矛l

本文編號：2827311