肺結(jié)核病是一種古老的疾病,是由肺結(jié)核分枝桿菌引發(fā)的呼吸系統(tǒng)傳染性疾病。肺結(jié)核分枝桿菌可潛伏性、持續(xù)性傳播,不易被免疫系統(tǒng)識(shí)別,并具有高耐藥特性。肺結(jié)核分枝桿菌為胞內(nèi)菌,能夠躲避免疫系統(tǒng)攻擊殺傷,從而可以長(zhǎng)時(shí)間在宿主體內(nèi)潛伏生存。當(dāng)機(jī)體免疫系統(tǒng)功能下降時(shí),潛伏在宿主細(xì)胞內(nèi)的肺結(jié)核分枝桿菌大量爆發(fā),繼而引起嚴(yán)重的肺部炎性疾病,影響人類(lèi)的健康。研究肺結(jié)核分枝桿菌侵染宿主后躲避免疫系統(tǒng)攻擊的機(jī)制,對(duì)于闡明肺結(jié)核病發(fā)病機(jī)制及研發(fā)新型抗肺結(jié)核藥物具有重大意義。為了解析肺結(jié)核分枝桿菌的免疫逃避機(jī)制,本論文以恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物(whole cell lysis,WCL)為研究對(duì)象,研究全裂解物與宿主免疫系統(tǒng)早期相互作用的免疫學(xué)特征指標(biāo),為后續(xù)逐級(jí)分析全裂解物的免疫效應(yīng)成分,最終確定免疫效應(yīng)分子奠定基礎(chǔ)。目的:探究恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物對(duì)細(xì)菌在宿主肺部清除速率的影響及對(duì)宿主早期免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用模式的探究。方法:本論文通過(guò)氣溶膠發(fā)生方法優(yōu)化小鼠模型,模擬肺結(jié)核分枝桿菌通過(guò)呼吸系統(tǒng)感染人體的過(guò)程。利用與肺結(jié)核分枝桿菌具有高度相似性并且無(wú)致病性的恥垢分枝桿菌作為模擬菌,將容易被機(jī)體快速識(shí)別并全部清除的非致病性的大腸桿菌作為對(duì)照細(xì)菌,比較大腸桿菌與恥垢分枝桿菌兩種細(xì)菌在小鼠肺部清除速率的差異;用恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物保護(hù)大腸桿菌后,研究其在宿主體內(nèi)清除速率的改變及宿主免疫系統(tǒng)應(yīng)答方式的改變;對(duì)比恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物和大腸桿菌細(xì)胞全裂解物單獨(dú)作用于宿主所產(chǎn)生的免疫系統(tǒng)應(yīng)答方式的改變,進(jìn)一步驗(yàn)證恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物對(duì)宿主免疫系統(tǒng)的特殊作用模式。通過(guò)細(xì)菌計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)(CFU)計(jì)算對(duì)比細(xì)菌在體內(nèi)清除速率及差異,小鼠肺組織切片HE染色研究免疫病理學(xué)改變,酶聯(lián)吸附免疫測(cè)定(ELISA)檢測(cè)小鼠肺部免疫因子IFN-γ和IL-10的表達(dá),細(xì)胞因子微球檢測(cè)技術(shù)(CBA)檢測(cè)小鼠體液免疫因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TNF、IFN-γ的表達(dá)。結(jié)果:(1)恥垢分枝桿菌在小鼠肺部的清除速率低于大腸桿菌;在14h時(shí)大腸桿菌清除完畢,恥垢分枝桿菌尚未完全清除,因此14h為差異最明顯階段,所以以取樣到14h作為早期免疫反應(yīng)研究的基礎(chǔ);用恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物保護(hù)大腸桿菌后,大腸桿菌在宿主體內(nèi)的清除速率降低,恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物保護(hù)后的大腸桿菌14h時(shí)在體內(nèi)尚未清除完畢。(2)HE染色免疫病理學(xué)結(jié)果顯示大腸桿菌組引起免疫細(xì)胞聚集程度大于恥垢分枝桿菌組及恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物保護(hù)后的大腸桿菌組,差異顯著(P0.05);大腸桿菌細(xì)胞全裂解物引起免疫細(xì)胞聚集程度亦大于恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物組,兩者差異極顯著(P0.01)。(3)ELISA檢測(cè)恥垢分枝桿菌感染小鼠肺部后,肺部屬促炎因子的IFN-γ分泌低于大腸桿菌感染組,而與IFN-γ相互拮抗的抑炎因子IL-10分泌高于大腸桿菌感染組(P0.05),恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物保護(hù)大腸桿菌后引起肺部促炎因子IFN-γ分泌程度隨清除時(shí)間增加而逐漸降低,而肺部抑炎因子IL-10分泌程度隨清除時(shí)間增加而逐漸升高;恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物感染引發(fā)促炎因子IFN-γ分泌低于大腸桿菌細(xì)胞全裂解物感染組,而肺部抑炎因子IL-10分泌高于大腸桿菌細(xì)胞全裂解物感染組(P0.05)。(4)CBA檢測(cè)結(jié)果顯示,恥垢分枝桿菌感染宿主后分泌屬Th1型細(xì)胞亞群的促炎免疫細(xì)胞因子IFN-γ、IL-17和TNF低于大腸桿菌感染組,然而與Th1型免疫因子相互拮抗的Th2型細(xì)胞亞群的抑炎因子IL-4、IL-10分泌高于大腸桿菌感染組(P0.05);恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物保護(hù)大腸桿菌后引起宿主抑炎因子IL-4分泌增加(P0.05);恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物單獨(dú)作用機(jī)體引發(fā)分泌抑炎因子IL-10明顯高于大腸桿菌細(xì)胞全裂解物感染組(P0.01)。結(jié)論:恥垢分枝桿菌細(xì)胞全裂解物是導(dǎo)致恥垢分枝桿菌清除速率低、不易被機(jī)體所清除的主要因素。其機(jī)制可能是通過(guò)降低宿主免疫系統(tǒng)炎性攻擊,降低Th1型免疫細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的攻擊,增加Th2型細(xì)胞因子分泌從而抑制Th1型細(xì)胞因子的分泌,進(jìn)而為細(xì)菌可以在宿主體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間存活提供有利條件。
【學(xué)位單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類(lèi)】：R521

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本文編號(hào)：2825047