在原因不明的慢性間質(zhì)性肺疾病(Interstitial Lung Diseaes，ILD)中，特發(fā)性肺纖維化(Idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)是一種較為常見的的代表性疾病，以彌漫性肺泡炎和肺泡結(jié)構(gòu)紊亂并最終導(dǎo)致肺間質(zhì)纖維化為特征。臨床表現(xiàn)為進行性呼吸困難伴有刺激性干咳，肺功能為限制性通氣障礙。病情一般持續(xù)進展，從起始癥狀發(fā)生到病情逐漸惡化，進而引起呼吸功能不全而導(dǎo)致死亡一般在3～5年。目前臨床的主要治療措施是使用糖皮質(zhì)激素等免疫功能抑制劑和硫唑嘌呤、環(huán)磷酰胺等細胞毒性藥物，效果并不滿意，僅部分患者對此類藥物有較好反應(yīng)，并且免疫功能抑制劑和細胞毒性藥物藥物存在較為嚴重的危險副作用。但由于目前缺少肯定的或特異性的治療，上述藥物仍在臨床應(yīng)用中占主導(dǎo)地位。 細胞因子網(wǎng)絡(luò)在IPF的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用，一些細胞因子在調(diào)節(jié)及維持肺纖維化過程中具有決定性作用。IPF患者Th1、Th2細胞因子存在嚴重的比例失衡，肺間質(zhì)Th細胞亞型分析顯示IL-4等Th2細胞因子的產(chǎn)生占主導(dǎo)地位，干擾素γ(Interferon gamma，IFN-γ)等Th1細胞因子與Th2細胞因子相比呈絕對或相對匱乏，表明Th1、Th2細胞因子的比例轉(zhuǎn)變可能在IPF發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。IFN-γ具有抗增殖、免疫抑制及抗纖維化作用，并在調(diào)節(jié)成纖維細胞及膠原合成方面具有顯著作用。因此通過給予外源性IFN-γ從而恢復(fù)肺纖維化過程中Th細胞因子的平衡，進而抑制肺纖維化的形成是可實現(xiàn)的治療目標。 為了了解IFN-γ對博萊霉素所致的大鼠肺纖維化的治療作用及機制，本研究主要進行了以下五個方面的工作：(1)復(fù)制了大鼠肺纖維化動物模型，并給予IFN-γ、地塞米松(Dexamethasone，DXM)進行干預(yù)治療；(2)利用光鏡及透射電鏡對各組大鼠肺組織進行普通病理及超微結(jié)構(gòu)觀察；(3)采用免疫組化SABC法定量及定性測定各組大鼠肺組織轉(zhuǎn)化生長因子β_1(transforming growth factor β_1，TGF-β_1)、纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)表達情況；(4)利用ELISA雙抗體夾心法測定各組大鼠血清白細胞介素4(interleukin，IL-4)含量；(5)Westem Blot測定各組大鼠血清表面活性蛋白A(surfactant proteinA，SP-A)含量。 第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 主要結(jié)果與結(jié)論: 1.通過氣管內(nèi)注射博萊霉素(Blcomycin，BLM)的方法復(fù)制大鼠肺纖維化動物 模型，其普通病理及超微病理改變、動脈血氣指標變化及肺組織TGF一p，、FN表達等 均符合肺纖維化表現(xiàn)，證明模型復(fù)制成功。 2.采用分級方法定性評價HE染色大鼠肺組織的肺泡炎、肺纖維化程度，發(fā)現(xiàn)隨 著BLM作用時間延長，肺泡炎及肺纖維化程度越來越重，而IFN一Y、DXM干預(yù)組大 鼠肺泡炎、肺纖維化程度均較輕微。 3.透射電鏡顯示BLM組肺泡n型上皮細胞微絨毛破壞、水腫，板層小體增多增 大，空泡樣變，基膜扭曲、缺損。IFN一丫千預(yù)組11型細胞僅少數(shù)板層小體空泡樣變， 大部分上皮細胞基膜完好。 4.BLM組大鼠動脈血POZ值隨時間推移呈進行性降低，PCO:值有所升高。IFN- Y組、DXM干預(yù)組Po:輕度降低。 5.BLM組大鼠造模后早期巨噬細胞等炎性細胞TGF一pl染色呈強陽性反應(yīng)，后 期成纖維細胞、肌纖維母細胞等間質(zhì)細胞陽性反應(yīng)增強。提示TGF一pl參與了急性肺 泡炎和組織修復(fù)反應(yīng)，并對于細胞外基質(zhì)持續(xù)過量沉積具重要作用。IFN一Y組、DXM 干預(yù)組陽性反應(yīng)細胞較少。 6.BLM組大鼠造模后早期上皮細胞、內(nèi)皮細胞、間質(zhì)細胞及細胞外基質(zhì)中FN 染色呈陽性，后期陽性染色較早期顯著減少，接近正常組。提示FN含量增多可促進 膠原的合成，肺間質(zhì)FN的沉積持續(xù)增多是膠原沉積的前奏，同時說明FN主要參與 肺間質(zhì)纖維化早期病變的發(fā)生、發(fā)展，而對晚期病變不起主要作用。IFN一Y組、DXM 組早期FN陽性染色顯著少于模型組。 6.BLM組大鼠血清IL一4含量造模后第3天達高峰，其后逐漸降低，后期接近正 常水平。提示其作為重要的細胞因子參與了早期肺泡炎的的形成，因此血清IL一4含量 顯著升高標志著肺纖維化早期肺泡炎的發(fā)生，可作為疾病早期診斷的標志物，但其含 量與纖維化程度無關(guān)，故不適合于作為判斷病情的指標。IFN一Y組、DXM組血清IL一4 含量僅輕度升高。 7.BLM組大鼠血清SP一A含量造模后即顯著增加，并隨時間推移逐步升高，說 明血清SP一A不僅可作為早期診斷標志物，還可作為判斷肺纖維化嚴重程度的指標。 IFN一Y、DXM組血清SP一A含量輕度升高。 8.IFN一Y干預(yù)組大鼠普通病理及超微病理均顯示肺損傷較輕微，動脈血PO:輕度 降低，肺組織內(nèi)TGF一pl陽性反應(yīng)細胞、FN陽性染色顯著少于BLM組，血清IL一4、 第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 SP一A含量僅輕度升高，顯著低于BLM組。各指標與DXM組比較無顯著差異。說明 IFN一Y具有較強的抗肺纖維化作用，有望成為臨床防治肺纖維化的理想藥物。 根據(jù)本實驗結(jié)果及相關(guān)文獻，考慮IFN一Y抗肺纖維化機制可能為以下幾個方面: (1)減少TGF一p，蛋白表達，抑制成纖維細胞活化及肺間質(zhì)的增殖;(2)減少FN產(chǎn) 生，抑制成纖維細胞增殖、打破FN與成纖維細胞內(nèi)循環(huán)，從而減少工、m型前膠原 蛋白及細胞外基質(zhì)的合成;(3)降低IL一4的表達，使肺纖維化過程
【學(xué)位單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R563.9
【部分圖文】：

狀、粗條索狀陽性著色。IFN一Y組、DXM組各時間段陽性反應(yīng)細胞較少，基本為弱陽性反應(yīng)(圖片14一19)。TGF一p;在肺泡巨噬細胞、支氣管上皮細胞、肺內(nèi)間質(zhì)的定量表達見表2及圖1。表2肺泡巨噬細胞、支氣管上皮細胞、肺內(nèi)間質(zhì)TGF一Bl的定量表達(%)(下6)檢測指標組別時間(d)1371428肺泡巨噬對照組33.94士7.8838.72士9.8641.34士9.2634.46士10.2137.51士11.01細胞計數(shù)模型組84.58士9.89**93.30士14.61**94.56士16.44**88.21士16.49**73.61士13.62**百分比I剛，‘組41.56士7.52△△49.52士12.23△△46.54士23.5儼△45.20士11.79△△40.22士9.07△△地米組41.67士5.59△△46.45士9.79△△44.43士10.15△△40.59士11.22△△36.56士11.45△△支氣管上對照組25.06士4.3924.14士5.1224.25士5.4323.66士6.2624.95士5.35皮細胞面模型組26.95士5.6029.25士6.5536.53士7.80*48.76士8.09**54.68士7.76**積比I剛丫組27.72士4.6829.50士6.3630.71士8.3235.03士9.55△36.08士6.99△△地米組24.31士5.5428.58士6.8928.63士5.7433.69士8.69△36.49士6.61△△肺內(nèi)間質(zhì)對照組25.20士5.0124.96士4.2725.99士5.0623.54士5.6624.75士4.46面積比模型組27.71士4.7429.06士5.0744.09士4.52**52.97士7.16**65.89士8.67**IFN:組24.85士5.9627.21士7.4233.86士7.95△36.02士9.10△△37.14士7.32△△地米組25.43士4.942，7.81士5.1834.1士7.25△36.23士8.01△△34.72士6.52△△注:*與正常組相比P<0.05，**與正常組相比P<0.01;△與模型組比較P<0.05，△△與模型組比較P<。.oh四、肺組織纖維連接蛋白表達對照組各時間段FN陽性染色主要分布于血管、支氣管周圍、肺泡間隔以及肺泡囊開口處，呈細纖維狀。模型組造模后第1~3天

第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文切H已日第1天第3天圖2第7天第14天第28天大鼠動脈血POZ值變化表5大鼠血清IL一4含量變化(pg/ml)(n=6)△△△△組別對照組模型組IFN一Y組地米組第1天20.06士3.4537.77士4.31**第14天19.42士3.2472.84士5.22**25.45士3.6129.22士3.7426.45士3.75△△△△第3天27.56士3.08119.54士7.51**42.89士6.11△△39.59士5.50△△第7天22.16士4.3990.95士6.47**34.21士5.16△△30.50士4.91△△27.25士4.53第28天21.76士4.5929.41士4.74*23.83士3.5123.87士3.95注:，與正常組相比P<0.05，**與正常組比較P<0.01;△與模型組比較P<0.05，△△與模型組比較P<0.0h七、大鼠血清Sp一A含量變化模型組大鼠血清SP一A含量于造模后即增加，并隨時間推移逐步升高，早期升高幅度較大，后期上升曲線趨向于平坦。IFN一Y組血清SP一A含量輕度升高，各時間段與模型組比較均存在顯著性差異口<0.05和P<0.01)。DXM組變化規(guī)律基本同IFN一Y組。(表6，圖4)(圖片24一25)。

第1夭第3天第7天第14天第28天圖3大鼠血清IL一4含量變化表6大鼠血清SP一A含量變化(%)(n=6)第1天第3天第7天第14天第28天157.4士23.9231.8士35.5309.7士45.5358.1士61.8459.2士57.115.0士17.9*131.8士22.7**142.5士28.3**144.2士26.5**144.0士32.121.2士21.2*134.5士23.2**143.6士31.5**140.5士26.3**157.3士31.SP一A含量以目標條帶單位密度光密度值與對照條帶單位面積光密度值的比值照組數(shù)值均為100%;模型組相比P<0.05，**與模型組比較P<0.01。nUC

本文編號：2818957