【摘要】：目的:提取純化結(jié)核分枝桿菌( MTB )脂阿拉伯甘露聚糖(Lipoarabinomanan,LAM)抗原,并探討其在肺結(jié)核血清學(xué)診斷中的應(yīng)用價值。 Q方法:MTB菌體經(jīng)氯仿甲醇混合液脫脂、超聲破碎、乙醇回流1h處理后,去除蛋白、脂質(zhì)、核酸,得到粗制的脂多糖。此脂多糖經(jīng)Sephacryl-100凝膠過濾層析分離純化,得到LAM。以該LAM作為包被抗原,建立LAM抗體(LAM-IgG)檢測的酶聯(lián)免疫吸附測定法(即ELISA法)和免疫金滲濾法(DIGFA),并將其用于肺結(jié)核和對照血清的LAM抗體檢測。 結(jié)果:從1.89g干重菌體中,獲得6mg的LAM,經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)后硝酸銀染色,在大約37kDa處呈現(xiàn)條帶,與對照標(biāo)準(zhǔn)品大小一致。以此LAM作為包被抗原,用ELISA法檢測117例肺結(jié)核患者(包括涂陽和涂陰),92例非結(jié)核肺部疾病患者、188例健康體檢者,敏感性71.3%,特異性93.9%;用免疫金滲濾法檢測了192例涂陽肺結(jié)核患者、46例非結(jié)核肺部疾病患者、68例健康體檢者血清的LAM抗體,敏感性91.7%,特異性87.8%; 結(jié)論:成功提取到LAM抗原,此抗原可作為酶聯(lián)免疫吸附法和免疫金滲濾法的包被抗原,用于肺結(jié)核的血清學(xué)診斷。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R521
【圖文】：

稱取牛血清白蛋白，先配制濃度為1 mg/mL的母液，然后以母液稀釋5 mg/mL，0.4 mg/mL，0.3 mg/mL，0.2 mg/mL，0.1 mg/mL），然后與液反應(yīng)3 min后在OD=595 nm的波長處測定吸光度。白調(diào)零后，以吸光度為縱坐標(biāo)，蛋白含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，品與考馬斯亮藍(lán)染色液反應(yīng)。通過吸光度讀數(shù)，帶入回歸方程來確定其結(jié) 果0、OD260 監(jiān)測結(jié)果收集 144 管收集夜，從 A1 到 L12。從 AKTAdesign 系統(tǒng)上得到監(jiān)測（如圖一）。在 B6 到 C2 之間、E6 到 E12 之間各有一個吸收峰。由此有蛋白或者樣品本身含有共軛雙鍵的脂肪酸。而 OD260 的監(jiān)測圖為樣品中沒有核酸。

圖 2 苯酚-硫酸法跟蹤糖濃度斯亮藍(lán)染色結(jié)果染色未見明顯條帶，只有蛋白 Marker 的銀染色結(jié)果后，呈現(xiàn)一個與標(biāo)準(zhǔn)品大小一致均一的亮較單一，顏色上比對照標(biāo)準(zhǔn)品亮，與蛋 37Kd。又鑒于 OD280 的吸收峰，故推測的復(fù)合物，多糖是主要成分，與文獻(xiàn)報道

圖 3 SDS-GAGE 電泳硝酸銀染色法 分析結(jié)果 blot 分析，未見明顯條帶，重復(fù)三次，皆 CS-35 和 CS-41，在海關(guān)常溫下滯留時間達(dá)結(jié)果色法，測定標(biāo)準(zhǔn)品中蛋白的含量為 15μg/ m斯亮藍(lán)未見明顯條帶相符。蛋白含量所對應(yīng)表 1 標(biāo)準(zhǔn)蛋白含量所對應(yīng)的吸光值mL） 0．5 0．4 0．3 0．2 AM 樣品 2. 對照標(biāo)準(zhǔn)品 3. 標(biāo)準(zhǔn)蛋白

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 付桂明,劉成梅,涂宗財;茶樹菇水溶性多糖的分離純化和化學(xué)組成的研究[J];食品科學(xué);2005年09期

2 孔忠順,管波清,古淑香,馬s

本文編號：2800629