【摘要】：目的 (1) 從小鼠肺組織里克隆mBD-6的cDNA。(2) 觀察肺組織中小鼠β-防御素-4、6的基因表達(dá)水平,探討mBD-4、6在急性肺損傷發(fā)生發(fā)展中的作用。(3) 研究小鼠β-防御素4、6在乳鼠和成年鼠肺部的表達(dá)和調(diào)控情況。(4) 建立檢測hBD-3 mRNA表達(dá)水平的實時熒光定量PCR方法,對肺癌患者的癌組織、正常肺組織進(jìn)行檢測,從mRNA轉(zhuǎn)錄水平分析hBD-3基因在肺癌的表達(dá),以便用于進(jìn)行其與肺癌的關(guān)聯(lián)性的探討。 方法 (1) 提取大腸桿菌內(nèi)毒素腹腔注射后小鼠肺組織的總RNA,反轉(zhuǎn)錄為cDNA作為模板,采用PCR的方法克隆小鼠β防御素-6基因。PCR產(chǎn)物連接入pGEM-EAST載體,轉(zhuǎn)化JM109感受態(tài)細(xì)胞,藍(lán)白篩選,對PCR鑒定含有目的片段的克隆進(jìn)行測序。(2) 將成年小鼠隨機(jī)分為兩組,一組為急性肺損傷組,一組為對照組。用大腸桿菌內(nèi)毒素腹腔注射復(fù)制急性肺損傷模型,于不同時間點處死小鼠,采用Trizol法提取肺組織總RNA,實時熒光定量RCR檢測肺組織beta-防御素-4、6基因在不同時間點的表達(dá)水平,測序鑒定PCR產(chǎn)物的特異性。(3) 乳鼠與成年鼠各一組,用大腸桿菌內(nèi)毒素腹腔注射兩組小鼠,于不同時間點處死小鼠,采用Trizol法提取肺組織總RNA,實時熒光定量PCR檢測肺組織beta-防御素-4、6基因在不同時間點的表達(dá)水平。(4)應(yīng)用SYBR Green Ⅰ熒光定量技術(shù),利用GAPDH作參照,建立檢測hBD-3 mRNA的實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄FQ-PCR方法,并檢測13份正常肺組織和16份肺癌組織標(biāo)本hBD-3 mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果 (1) 獲得預(yù)期大小的PCR產(chǎn)物,經(jīng)序列鑒定證實為小鼠β防御素-6基因。(2) 病理結(jié)果證實ALI動物模型復(fù)制成功。對照組肺組織中各時間點及ALI組6h點均無β-防御素-4、6基因表達(dá)。而ALI組12h、1d、3d時表達(dá)顯著升高。(3) 小鼠β-防御素-4、6mRNA在LPS刺激12h后的幼鼠和成年鼠肺組織中均有表達(dá),熒光定量證實乳鼠LPS刺激后不同時間點肺組織β-
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R563
【圖文】：

克隆平板

oB卜6質(zhì)粒DNA的測序結(jié)果

mB卜4、6和p一aetin

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 田翠環(huán);俞森洋;;小鼠β防御素-6基因的克隆和鑒定[J];山東醫(yī)藥;2006年04期

2 丁輝;劉璽誠;;人β防御素-3的研究進(jìn)展[J];國際兒科學(xué)雜志;2007年06期

3 廖偉,錢桂生,雷撼,張方;IL-1β誘導(dǎo)人氣道上皮細(xì)胞hBD2表達(dá)及其分子機(jī)制[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2005年11期

4 司利鋼;劉璽誠;李文梅;呂有勇;饒小春;馬渝燕;;大蒜素對肺癌A549細(xì)胞株β防御素表達(dá)的影響[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2006年06期

5 張瑋瑋;郭永清;余淑珍;荊建敏;;大鼠心肌缺血再灌注后誘發(fā)肺組織表達(dá)β-防御素-2[J];中國藥物與臨床;2011年04期

6 常薪霞;董碧蓉;陳子威;;β-防御素-2在不同月齡大鼠肺組織表達(dá)研究[J];實用老年醫(yī)學(xué);2006年01期

7 程惠娟;汪長中;官妍;王艷;俞麗華;;β防御素在肺氣虛證大鼠發(fā)病中的作用[J];安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2010年05期

8 劉娟;李建遠(yuǎn);;附睪β防御素研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(計劃生育/生殖健康分冊);2007年05期

9 李明;余雪松;馬鴻雁;李巖;簡玲敏;;CpG ODN通過激活NF-κB誘導(dǎo)人肺腺上皮細(xì)胞β防御素-2的表達(dá)[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2010年16期

10 段德鑒,蔣獻(xiàn),冉玉平,李福民,吳琦,周光平;白念珠菌對角質(zhì)形成細(xì)胞β防御素-2 mRNA表達(dá)的影響[J];中華皮膚科雜志;2005年04期

相關(guān)會議論文 前4條

1 林玲;;β防御素-3在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)和意義[A];2011年第三十三屆浙江省呼吸系病學(xué)術(shù)年會暨呼吸疾病診治新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2011年

2 林玲;;非小細(xì)胞肺癌組織β防御素-3表達(dá)與樹突狀細(xì)胞浸潤的關(guān)系[A];2011年第三十三屆浙江省呼吸系病學(xué)術(shù)年會暨呼吸疾病診治新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2011年

3 石勇;趙銥民;宋瑋;;重組人β防御素3(rHBD3)對抑制頜面贗復(fù)硅橡膠材料表面真菌感染的研究[A];第六次全國口腔修復(fù)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2009年

4 于賓賓;何啟蓋;;豬β-防御素(pBD)的研究進(jìn)展[A];格萊姆抗菌肽——抗菌肽開發(fā)與應(yīng)用技術(shù)研討會論文集[C];2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 田翠環(huán);小鼠β防御素-6的克隆和鑒定、小鼠β防御素-4、6以及人β防御素-3在肺組織中的表達(dá)研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2005年

2 曹冬梅;內(nèi)毒素對大鼠附睪特異基因Bin1b表達(dá)的影響、機(jī)制及生物學(xué)意義[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

3 賈旭錦;鼻竇炎口服液對急性鼻—鼻竇炎大鼠鼻黏膜β防御素影響的實驗研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張雷;黃芪、豬苓多糖對腸上皮細(xì)胞及經(jīng)腸上皮對巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2009年

2 朱元軍;mBD2與HA1融合基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其免疫保護(hù)性研究[D];四川大學(xué);2007年

3 趙昆;�？咕腂ac7、Bac5和β防御素的研究[D];石河子大學(xué);2008年

4 陳美芳;非小細(xì)胞肺癌β防御素-1表達(dá)與樹突狀細(xì)胞浸潤的關(guān)系[D];浙江大學(xué);2010年

5 邱壯偉;靶向HER2的人β防御素2的表達(dá)純化及體外活性研究[D];暨南大學(xué);2012年

6 毛秀敏;新疆荷斯坦牛β防御素5克隆表達(dá)及抑菌活性分析[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 孫瑞婧;長沙市育齡女性生殖道感染相關(guān)影響因素的研究[D];中南大學(xué);2010年

8 袁豐瑞;抗HER2小型化抗體與人β防御素Ⅱ融合蛋白的表達(dá)及其生物活性初步研究[D];暨南大學(xué);2011年

9 林雪芳;HIV/AIDS患者HAART治療過程中口腔健康、唾液hBD-2，3表達(dá)和CD4~+T淋巴細(xì)胞計數(shù)的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

10 張平平;尋常型銀屑病患者皮損中HBD-2,-3和IL-1β的表達(dá)及意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號：2794872