【摘要】：哮喘患者存在Th1／Th2免疫反應(yīng)失衡，以Th2反應(yīng)為主導(dǎo)致氣道炎癥。在抗原遞呈過程中樹突狀細(xì)胞(DCs)和T細(xì)胞所處的細(xì)胞因子微環(huán)境是決定T細(xì)胞Th1／Th2分化方向的關(guān)鍵因素。DCs分泌IL-12與IFN-γ使初始輔助性T細(xì)胞向Th1極化。T-bet基因是IFN-γ基因特異性轉(zhuǎn)錄因子，可以特異性上調(diào)IFN-γ的表達(dá)。目前尚無實(shí)驗(yàn)證實(shí)T-bet基因修飾的DCs能否高分泌IFN-γ。如果T-bet基因修飾的DCs能夠高表達(dá)IFN-γ，則可以用于提高抗原遞呈過程中DCs和T細(xì)胞所處細(xì)胞因子微環(huán)境中的IFN-γ，達(dá)到逆轉(zhuǎn)哮喘Th2反應(yīng)的目的。但目前治療手段尚不能達(dá)到在抗原遞呈水平干預(yù)T細(xì)胞的Th1／Th2分化方向，達(dá)到阻抑氣道炎癥的目的，有關(guān)試驗(yàn)研究也未見報(bào)道。 基于以上認(rèn)識(shí)，本實(shí)驗(yàn)課題旨在研究在抗原遞呈水平干預(yù)哮喘Th1／Th2分化的哮喘治療策略的可行性，以及T-bet基因在DCs表達(dá)能否促進(jìn)DCs IFN-γ的分泌以及高分泌IFN-γ的T-bet基因修飾的DCs能否逆轉(zhuǎn)哮喘Th2反應(yīng)，從而阻抑哮喘氣道炎癥的發(fā)生和發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)課題以RT-PCR方法獲得小鼠T-bet基因，以基因工程方法構(gòu)建了小鼠T-bet重組腺病毒載體，以293A細(xì)胞包裝獲得了T-bet重組腺病毒。同時(shí)，以重組細(xì)胞因子mGM-CSF、mIL-4從小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得了小鼠樹突狀細(xì)胞。然后以T-bet重組腺病毒轉(zhuǎn)染小鼠樹突狀細(xì)胞獲得了T-bet基因修飾的樹突狀細(xì)胞。以ELISA方法檢測T-bet基因修飾的樹突狀細(xì)胞可以高表達(dá)IFN-γ。最后，通過將T-bet基因修飾的樹突狀細(xì)胞經(jīng)靜脈注射注入OVA致敏的小鼠體內(nèi)，以ELISA檢測小鼠血漿IFN-γ和IL-4表達(dá)水平分別代表體內(nèi)Th1和Th2反應(yīng)，以流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠外周血Th1／Th2細(xì)胞亞群，氣道炎癥用病理切片HE染色確定，經(jīng)氣道炎癥阻抑試驗(yàn)和氣道炎癥逆轉(zhuǎn)試驗(yàn)結(jié)果顯示，哮喘模型小鼠存在Th1／Th2反應(yīng)失衡，為Th2優(yōu)勢反應(yīng)。T-bet基因修飾的樹突狀細(xì)胞注射后小鼠血漿IFN-γ升高，IL-4降低，小鼠轉(zhuǎn)為以Th1反應(yīng)為主，并且氣道炎癥完全消失同正常小鼠。
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R562.25
【圖文】：

學(xué)博士學(xué)位論文·劉國梁·B01013第一部分·材料材料與方法~S1I”l實(shí)驗(yàn)材料物6、8周雌性小鼠。購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖中心。載體質(zhì)粒、宿主菌株桿菌菌株E.。oliDI壓5山公司BDAdello一狠腺病毒載體系統(tǒng);pshu川eZV留tor質(zhì)粒，圖譜及多克隆位點(diǎn)見圖1;

BD胡.陰卜X翔膠病毒DNA圖譜

b)BDA山姐o-x腳腺病毒病毒DNA圖譜見圖2;圖2BD胡.陰卜X翔膠病毒DNA圖譜3.丙EM.TEa叮載體而m銘a公司，載體圖譜見圖3圖3沁EM.TE娜載體圖譜三、引物引物設(shè)計(jì)參考文獻(xiàn)口]發(fā)表的序列及表達(dá)載體DBA么泊。一MT腺病毒載體多克隆位點(diǎn)，應(yīng)用巧imerPrimesr.0軟件設(shè)計(jì)，由華美公司合成。兩引物間擴(kuò)增片段約長1690飾。

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本文編號：2794942