【摘要】： 目的：社區(qū)獲得性肺炎(CAP)的病原學(xué)研究一直是重要課題,由于技術(shù)方法問題病原學(xué)診斷多是回顧性,因而治療仍以經(jīng)驗(yàn)用藥為主,但首次經(jīng)驗(yàn)用藥失敗率因耐藥菌株和非典型病原體感染率增加而明顯增加,所以臨床需要快速病原學(xué)診斷方法以指導(dǎo)早期準(zhǔn)確用藥。肺炎支原體(MP)是社區(qū)獲得性肺炎重要病原體,所占比例大約10-30%,并呈持續(xù)增加的趨勢,甚至與肺炎鏈球菌發(fā)生率相當(dāng),兩者在CAP病原體中所占比例接近50%。目前應(yīng)用最廣泛的β內(nèi)酰胺類抗生素對(duì)肺炎支原體無效,大環(huán)內(nèi)酯類和喹諾酮類雖然對(duì)肺炎支原體敏感,然而在亞洲地區(qū)肺炎鏈球菌對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類耐藥率非常高,超過50%,而耐喹諾酮的肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌比例也在增加,因此,如果能準(zhǔn)確快速診斷,選擇抗生素將更有針對(duì)性,臨床效果更佳。 肺炎支原體傳統(tǒng)診斷方法主要是血清學(xué)—IgM或IgG雙份血清滴度升高4倍為診斷標(biāo)準(zhǔn),多用于回顧性診斷,且診斷特異性和敏感性易受免疫力低下和近期患肺炎支原體感染影響,所以需要一個(gè)快速診斷方法。分子生物學(xué)是近十幾年來發(fā)展最迅速學(xué)科之一,其核酸擴(kuò)增技術(shù)非常成熟,已應(yīng)用于肺炎支原體診斷。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)就是其中之一,如今在傳統(tǒng)PCR技術(shù)上出現(xiàn)了更先進(jìn)PCR技術(shù),如熒光定量PCR,熒光定量PCR是集PCR高敏感性、DNA雜交探針的高特異性和光譜技術(shù)的高精確定量為一體,它一般2小時(shí)內(nèi)出結(jié)果,為臨床早診斷早治療提供幫助。本實(shí)驗(yàn)采用熒光定量PCR對(duì)社區(qū)獲得性肺炎病人的痰和咽拭標(biāo)本進(jìn)行肺炎支原體檢測,其中咽拭為雙份(急性期和恢復(fù)期),并且以上皮細(xì)胞在低倍鏡下數(shù)量為基準(zhǔn)進(jìn)行定量分析,以探討咽拭和痰標(biāo)本在熒光定量PCR檢測肺炎支原體是否存在差別,同時(shí)也比較兩份咽拭核酸含量變化,并結(jié)合臨床進(jìn)一步分析咽拭和痰標(biāo)本對(duì)熒光定量PCR檢測肺炎 2009年5月——2010年1月入住我院呼吸科50例社區(qū)獲得性肺炎病人(診斷標(biāo)準(zhǔn)參考2006年我國CAP指南標(biāo)準(zhǔn)),其中男24例,女26例,年齡15-82歲。性別比例無差別,48例入院前應(yīng)用抗生素。對(duì)照組：男14例,女13例,年齡19-75歲,近3個(gè)月無下呼吸道感染的健康志愿者。 1.咽拭：入院和出院前兩份,用無菌拭子擦拭咽后壁,然后浸入1ml無菌生理鹽水?dāng)嚥⒂昧D壓管壁,低倍鏡下計(jì)數(shù)并記錄,保存-80度冰箱用以PCR檢測。 2.痰：收集入院時(shí)痰標(biāo)本,低倍鏡檢是否合格,保存-80度冰箱待檢。 3.對(duì)照組只采取咳出的呼吸道分泌物,保存-80度冰箱待檢。 咽拭按試劑盒說明進(jìn)行操作,患者痰及健康組呼吸道分泌物先用4%氫氧化鈉消化,而后按試劑盒說明操作。 急性期咽拭49例,陽性率73.5%；恢復(fù)期咽拭22例,陽性率54.5%統(tǒng)計(jì)處理配對(duì)資料t檢驗(yàn),兩者差別有顯著性p=0.044 痰熒光定量PCR檢測24例,陽性率100%,痰與急性咽拭比較獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),p=0.051. 三、對(duì)照組MP陽性率26.9%,MP感染患者定義為痰DNA大于等于107copies/ml,CAP患者M(jìn)P感染率為51%。 一、恢復(fù)期咽拭較急性期咽拭肺炎支原體量減少。 二、咽拭較痰標(biāo)本MP含量低,檢出率低。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R563.1
【圖文】：

認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果擴(kuò)增曲線(見圖l)為標(biāo)準(zhǔn)品與樣本熒光定量PcR擴(kuò)增曲線，橫坐標(biāo)為開始上升的循環(huán)數(shù)，即CT值，縱坐標(biāo)為熒光值，各曲線的起始、上升、平臺(tái)期非常明顯。標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖2)4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次相差10倍，分別為sxlo4、5、105、sxlo6、sxlo7，曲線r=一1.00，斜率一3.204，截距45.10，符合試劑盒要求。

擴(kuò)增曲線(見圖l)為標(biāo)準(zhǔn)品與樣本熒光定量PcR擴(kuò)增曲線，橫坐標(biāo)為開始上升的循環(huán)數(shù)，即CT值，縱坐標(biāo)為熒光值，各曲線的起始、上升、平臺(tái)期非常明顯。標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖2)4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次相差10倍，分別為sxlo4、5、105、sxlo6、sxlo7，曲線r=一1.00，斜率一3.204，截距45.10，符合試劑盒要求。擴(kuò)增循環(huán)數(shù)(CT值)圖1.熒光定量PCR擴(kuò)增曲線。礴

本文編號(hào)：2794822