發(fā)布時間：2020-08-15 13:03

【摘要】：卡介菌(BCG)對呼吸道變應性疾病的防治作用近年來得到越來越多的重視。流行病學調查顯示對結核菌的遲發(fā)相變態(tài)反應強度與過敏性疾病發(fā)生成負相關[1],此后很多研究也支持這一結論,同時大量動物實驗證實BCG對變應性哮喘小鼠具有保護作用�？ń榫嗵呛怂�(BCG-PSN)是BCG經滅活后制成的一種免疫調節(jié)劑,具有多種免疫活性。我們早期實驗證實致敏前腹腔注射BCG-PSN可對哮喘小鼠產生預防作用[2],但其不同干預方式(尤其是氣道局部用藥)和不同干預時間對哮喘小鼠的影響尚不明確,本實驗第一部分旨在探討B(tài)CG-PSN不同干預方式對哮喘小鼠在不同致敏階段的作用。 變應性鼻炎與哮喘一樣同屬于呼吸道變應性疾病,并且兩者常同時發(fā)生。大量基礎實驗證實BCG可對哮喘和變應性鼻炎動物產生保護性作用[3-5],也有臨床研究報道BCG-PSN可減輕變應性鼻炎患者的臨床癥狀[6],但多屬于經驗用藥,其作用機制仍不十分清楚。最近的研究表明氣道變應性疾病與Th1和Th2細胞的失衡,Th2細胞過度活化,釋放大量Th2型細胞因子有關。國內外已有許多動物實驗證實BCG通過誘導強烈的Th1反應,促進INF-γ釋放,抑制Th2細胞釋放IL-4、IL-5、IL-13等細胞因子可達到治療哮喘和變應性鼻炎的作用。本研究第二部分通過建立變應性鼻炎小鼠模型,觀察BCG-PSN對變應性鼻炎小鼠的鼻阻力和上氣道炎癥的影響,明確BCG-PSN是否對變應性鼻炎小鼠具有防治作用及其可能的機制,并為臨床用藥提供理論依據。 目的: 探討卡介菌多糖核酸(BCG-PSN,斯奇康)不同干預方式、不同時間對哮喘小鼠氣道炎癥和氣道反應性的影響。 方法: 選擇雌性Balb/c小鼠,隨機分為BCG-PSN治療組、正常組、哮喘組,每組10-12只。哮喘組和BCG-PSN治療組以OVA首次致敏為0d,分別在0、7、14d OVA20μg腹腔注射致敏,第28、29、30d OVA 200μg滴鼻激發(fā),每天一次。正常組在各個時間點給予相應劑量的生理鹽水。BCG-PSN分為肌肉注射、麻醉滴鼻、霧化吸入三種干預方式。麻醉滴鼻方式分為致敏前7天干預組(-7d in)、首次致敏后30天干預組(+30d in)、致敏前7天+首次致敏后30天干預組(-7+30d in)和首次致敏后29+30天干預組(29+30d in)。各組末次激發(fā)后48h采用美國Buxco公司無創(chuàng)肺功能儀測定氣道反應性,結果以增強的呼吸間歇(Enhanced Pause, Penh)表示,以PC100(氣道反應性升高為baseline2倍時的Mch激發(fā)濃度)評價氣道反應性。氣道反應性檢測后處死小鼠,收集支氣管肺泡灌洗液(BALF),涂片后HE染色計數嗜酸性粒細胞比例(Eos%),并行肺組織病理檢查。 結果: 哮喘組氣道反應性及氣道炎癥顯著高于正常組。滴鼻組霧化組Penh在Mch激發(fā)濃度6.25-12.5mg/ml均低于哮喘組,差異有統計學意義(p0.05);肌注組在12.5 mg/ml顯著低于哮喘組;各給藥方式組間無差異。霧化組PC100(8.2±5.2)mg/ml、滴鼻組PC100(7.4±4.1) mg/ml顯著高于哮喘組(3.9±0.9) mg/ml,差異有統計學意義(p0.01、p0.05);肌注組PC100與哮喘組相比無差異。滴鼻組的BALF中Eos百分比(41.4%±9.8%)顯著低于哮喘組(47.4%±5.6%)(p0.05);肌注組、霧化組的BALF中Eos%(42.8%±6.4%、48.0%±4.7%)與哮喘組相比無統計學差異。-7d in組、-7+30d in組Penh在Mch激發(fā)濃度12.5mg/ml時顯著低于哮喘組;-7d in組、-7+30d in組PC100(11.6±6、12.6±6.8)mg/ml顯著高于哮喘組(4.9±3.1)mg/ml(p0.01);-7d in組、-7+30d in組BALF中Eos百分比(48.4%±4.9%、47.3%±6.9%)與哮喘組(56%±6.2%)相比差異有統計學意義(p0.01)。+30d in組、29+30d in組Penh、PC100和Eos%與哮喘組相比均無統計學差異。 結論: BCG-PSN對哮喘小鼠的干預效果受給藥途徑影響,氣道內給藥(麻醉滴鼻)作用效果優(yōu)于肌肉注射;致敏前單次干預可有效阻止哮喘小鼠的疾病進展,而激發(fā)階段干預對哮喘小鼠無治療作用。BCG-PSN氣道內給藥為防治哮喘提供了新的思路。 第二部分卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)對變應性鼻炎小鼠鼻阻力和上氣道炎癥的影響 目的: 探討卡介菌多糖核酸對變應性鼻炎小鼠鼻阻力和上氣道炎癥的影響。 方法: 以OVA腹腔注射致敏、清醒滴鼻激發(fā)建立Balb/c小鼠(5-6w)變應性鼻炎模型,在致敏前7天用BCG-PSN分別以不同劑量清醒滴鼻和霧化吸入干預小鼠,分為正常組、鼻炎組、10μg滴鼻組、5μg滴鼻組、1μg滴鼻組、霧化組,末次激發(fā)后10min內觀察小鼠癥狀,24h后采用實驗精密注射泵和壓力傳感器測定在一定氣體流量下小鼠鼻后壓,根據流體學原理換算成鼻阻力,鼻阻力測量完成以后取鼻組織固定、制作石蠟切片,HE染色后顯微鏡下攝影統計鼻粘膜單位面積Eos個數、測量鼻中隔下部粘膜厚度。 結果: 鼻炎組小鼠出現明顯噴嚏、撓鼻動作,各給藥組均能減輕癥狀,以10μg、霧化組明顯。正常組小鼠呼氣阻力1.84±0.38cmH2O·ml-1s-1,吸氣阻力1.54±0.44 cmH2O·ml-1s-1;鼻炎組小鼠呼氣阻力2.55±0.51cmH2O·ml-1s-1,吸氣阻力2.45±0.71cmH2O·ml-1s-1;兩組相比有統計學差異,p0.01。各干預組與鼻炎組相比,呼氣阻力、吸氣阻力均無差異。但10μg、5μg滴鼻組與正常組相比,呼氣阻力無統計學差異;10μg、霧化組與正常組相比,吸氣阻力亦無統計學差異。鼻組織病理HE染色顯示鼻炎組鼻中隔粘膜厚度(80.5±20.5)μm與正常組(46.7±2.5)μm相比有統計學差異,p0.05;10μg滴鼻組和霧化組鼻中隔粘膜厚度(51.7±3.5、52.7±8.0)μm顯著低于鼻炎組,差異有統計學意義,p0.05。鼻炎組鼻中隔單位面積(1mm2)Eos個數(262±105)與正常組(4±0.7)相比有統計學差異,p0.001;10μg滴鼻組和霧化 結論: 卡介菌多糖核酸可抑制變應性鼻炎小鼠的上氣道炎癥,滴鼻、霧化均為有效干預方式。
【學位授予單位】：廣州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R562.25
【圖文】：

37圖2-4 鼻炎組小鼠鼻中隔病理（HE×200） 圖2-5 正常組小鼠鼻中隔病理（HE×200）鼻炎組小鼠部分粘膜上皮脫落，粘膜固有層 正常組小鼠上皮規(guī)整、無脫落，粘膜固有可見大量Eos及其他炎癥細胞浸潤，腺體大量 層未見炎癥細胞浸潤，腺體無增生。粘膜增生，粘膜層厚度顯著增加。 層厚度較薄。圖2-6 10μg滴鼻組小鼠鼻中隔病理（HE×200） 圖2-7 5μg滴鼻組小鼠鼻中隔病理（HE×200）10μg滴鼻組可見上皮基本完整無脫落，粘膜固 5μg滴鼻組上皮部分脫落，固有層可見大量有層可見極少量Eos和其他炎癥細胞浸潤

37圖2-4 鼻炎組小鼠鼻中隔病理（HE×200） 圖2-5 正常組小鼠鼻中隔病理（HE×200）鼻炎組小鼠部分粘膜上皮脫落，粘膜固有層 正常組小鼠上皮規(guī)整、無脫落，粘膜固有可見大量Eos及其他炎癥細胞浸潤，腺體大量 層未見炎癥細胞浸潤，腺體無增生。粘膜增生，粘膜層厚度顯著增加。 層厚度較薄。圖2-6 10μg滴鼻組小鼠鼻中隔病理（HE×200） 圖2-7 5μg滴鼻組小鼠鼻中隔病理（HE×200）10μg滴鼻組可見上皮基本完整無脫落，粘膜固 5μg滴鼻組上皮部分脫落，固有層可見大量有層可見極少量Eos和其他炎癥細胞浸潤

圖2-4 鼻炎組小鼠鼻中隔病理（HE×200） 圖2-5 正常組小鼠鼻中隔病理（HE×200）鼻炎組小鼠部分粘膜上皮脫落，粘膜固有層 正常組小鼠上皮規(guī)整、無脫落，粘膜固有可見大量Eos及其他炎癥細胞浸潤，腺體大量 層未見炎癥細胞浸潤，腺體無增生。粘膜增生，粘膜層厚度顯著增加。 層厚度較薄。

【參考文獻】

相關期刊論文 前4條

1 王蘋莉,沈華浩,王紹斌;減毒活菌卡介苗不同時間和劑量干預對哮喘小鼠氣道炎癥的影響[J];中國呼吸與危重監(jiān)護雜志;2004年01期

2 佘翠萍,董震,關桂梅,佘文煜,楊占泉;卡介苗霧化吸入對呼吸道動物過敏反應的免疫調節(jié)作用[J];中華耳鼻咽喉科雜志;2002年04期

3 全國兒科哮喘協作組;2000年與1990年兒童支氣管哮喘患病率的調查比較[J];中華結核和呼吸雜志;2004年02期

4 賴克方,孫寶清,鐘南山;卡介苗多糖核酸對過敏性支氣管哮喘外周血單個核細胞T_H1/T_H2反應的作用[J];中華微生物學和免疫學雜志;2005年06期

本文編號：2794154