【摘要】：卡介菌(BCG)對(duì)呼吸道變應(yīng)性疾病的防治作用近年來得到越來越多的重視。流行病學(xué)調(diào)查顯示對(duì)結(jié)核菌的遲發(fā)相變態(tài)反應(yīng)強(qiáng)度與過敏性疾病發(fā)生成負(fù)相關(guān)[1],此后很多研究也支持這一結(jié)論,同時(shí)大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)BCG對(duì)變應(yīng)性哮喘小鼠具有保護(hù)作用�？ń榫嗵呛怂�(BCG-PSN)是BCG經(jīng)滅活后制成的一種免疫調(diào)節(jié)劑,具有多種免疫活性。我們?cè)缙趯?shí)驗(yàn)證實(shí)致敏前腹腔注射BCG-PSN可對(duì)哮喘小鼠產(chǎn)生預(yù)防作用[2],但其不同干預(yù)方式(尤其是氣道局部用藥)和不同干預(yù)時(shí)間對(duì)哮喘小鼠的影響尚不明確,本實(shí)驗(yàn)第一部分旨在探討B(tài)CG-PSN不同干預(yù)方式對(duì)哮喘小鼠在不同致敏階段的作用。 變應(yīng)性鼻炎與哮喘一樣同屬于呼吸道變應(yīng)性疾病,并且兩者常同時(shí)發(fā)生。大量基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)證實(shí)BCG可對(duì)哮喘和變應(yīng)性鼻炎動(dòng)物產(chǎn)生保護(hù)性作用[3-5],也有臨床研究報(bào)道BCG-PSN可減輕變應(yīng)性鼻炎患者的臨床癥狀[6],但多屬于經(jīng)驗(yàn)用藥,其作用機(jī)制仍不十分清楚。最近的研究表明氣道變應(yīng)性疾病與Th1和Th2細(xì)胞的失衡,Th2細(xì)胞過度活化,釋放大量Th2型細(xì)胞因子有關(guān)。國(guó)內(nèi)外已有許多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)BCG通過誘導(dǎo)強(qiáng)烈的Th1反應(yīng),促進(jìn)INF-γ釋放,抑制Th2細(xì)胞釋放IL-4、IL-5、IL-13等細(xì)胞因子可達(dá)到治療哮喘和變應(yīng)性鼻炎的作用。本研究第二部分通過建立變應(yīng)性鼻炎小鼠模型,觀察BCG-PSN對(duì)變應(yīng)性鼻炎小鼠的鼻阻力和上氣道炎癥的影響,明確BCG-PSN是否對(duì)變應(yīng)性鼻炎小鼠具有防治作用及其可能的機(jī)制,并為臨床用藥提供理論依據(jù)。 目的: 探討卡介菌多糖核酸(BCG-PSN,斯奇康)不同干預(yù)方式、不同時(shí)間對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥和氣道反應(yīng)性的影響。 方法: 選擇雌性Balb/c小鼠,隨機(jī)分為BCG-PSN治療組、正常組、哮喘組,每組10-12只。哮喘組和BCG-PSN治療組以O(shè)VA首次致敏為0d,分別在0、7、14d OVA20μg腹腔注射致敏,第28、29、30d OVA 200μg滴鼻激發(fā),每天一次。正常組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)給予相應(yīng)劑量的生理鹽水。BCG-PSN分為肌肉注射、麻醉滴鼻、霧化吸入三種干預(yù)方式。麻醉滴鼻方式分為致敏前7天干預(yù)組(-7d in)、首次致敏后30天干預(yù)組(+30d in)、致敏前7天+首次致敏后30天干預(yù)組(-7+30d in)和首次致敏后29+30天干預(yù)組(29+30d in)。各組末次激發(fā)后48h采用美國(guó)Buxco公司無創(chuàng)肺功能儀測(cè)定氣道反應(yīng)性,結(jié)果以增強(qiáng)的呼吸間歇(Enhanced Pause, Penh)表示,以PC100(氣道反應(yīng)性升高為baseline2倍時(shí)的Mch激發(fā)濃度)評(píng)價(jià)氣道反應(yīng)性。氣道反應(yīng)性檢測(cè)后處死小鼠,收集支氣管肺泡灌洗液(BALF),涂片后HE染色計(jì)數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞比例(Eos%),并行肺組織病理檢查。 結(jié)果: 哮喘組氣道反應(yīng)性及氣道炎癥顯著高于正常組。滴鼻組霧化組Penh在Mch激發(fā)濃度6.25-12.5mg/ml均低于哮喘組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);肌注組在12.5 mg/ml顯著低于哮喘組;各給藥方式組間無差異。霧化組PC100(8.2±5.2)mg/ml、滴鼻組PC100(7.4±4.1) mg/ml顯著高于哮喘組(3.9±0.9) mg/ml,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01、p0.05);肌注組PC100與哮喘組相比無差異。滴鼻組的BALF中Eos百分比(41.4%±9.8%)顯著低于哮喘組(47.4%±5.6%)(p0.05);肌注組、霧化組的BALF中Eos%(42.8%±6.4%、48.0%±4.7%)與哮喘組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。-7d in組、-7+30d in組Penh在Mch激發(fā)濃度12.5mg/ml時(shí)顯著低于哮喘組;-7d in組、-7+30d in組PC100(11.6±6、12.6±6.8)mg/ml顯著高于哮喘組(4.9±3.1)mg/ml(p0.01);-7d in組、-7+30d in組BALF中Eos百分比(48.4%±4.9%、47.3%±6.9%)與哮喘組(56%±6.2%)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。+30d in組、29+30d in組Penh、PC100和Eos%與哮喘組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論: BCG-PSN對(duì)哮喘小鼠的干預(yù)效果受給藥途徑影響,氣道內(nèi)給藥(麻醉滴鼻)作用效果優(yōu)于肌肉注射;致敏前單次干預(yù)可有效阻止哮喘小鼠的疾病進(jìn)展,而激發(fā)階段干預(yù)對(duì)哮喘小鼠無治療作用。BCG-PSN氣道內(nèi)給藥為防治哮喘提供了新的思路。 第二部分卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)對(duì)變應(yīng)性鼻炎小鼠鼻阻力和上氣道炎癥的影響 目的: 探討卡介菌多糖核酸對(duì)變應(yīng)性鼻炎小鼠鼻阻力和上氣道炎癥的影響。 方法: 以O(shè)VA腹腔注射致敏、清醒滴鼻激發(fā)建立Balb/c小鼠(5-6w)變應(yīng)性鼻炎模型,在致敏前7天用BCG-PSN分別以不同劑量清醒滴鼻和霧化吸入干預(yù)小鼠,分為正常組、鼻炎組、10μg滴鼻組、5μg滴鼻組、1μg滴鼻組、霧化組,末次激發(fā)后10min內(nèi)觀察小鼠癥狀,24h后采用實(shí)驗(yàn)精密注射泵和壓力傳感器測(cè)定在一定氣體流量下小鼠鼻后壓,根據(jù)流體學(xué)原理換算成鼻阻力,鼻阻力測(cè)量完成以后取鼻組織固定、制作石蠟切片,HE染色后顯微鏡下攝影統(tǒng)計(jì)鼻粘膜單位面積Eos個(gè)數(shù)、測(cè)量鼻中隔下部粘膜厚度。 結(jié)果: 鼻炎組小鼠出現(xiàn)明顯噴嚏、撓鼻動(dòng)作,各給藥組均能減輕癥狀,以10μg、霧化組明顯。正常組小鼠呼氣阻力1.84±0.38cmH2O·ml-1s-1,吸氣阻力1.54±0.44 cmH2O·ml-1s-1;鼻炎組小鼠呼氣阻力2.55±0.51cmH2O·ml-1s-1,吸氣阻力2.45±0.71cmH2O·ml-1s-1;兩組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p0.01。各干預(yù)組與鼻炎組相比,呼氣阻力、吸氣阻力均無差異。但10μg、5μg滴鼻組與正常組相比,呼氣阻力無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;10μg、霧化組與正常組相比,吸氣阻力亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。鼻組織病理HE染色顯示鼻炎組鼻中隔粘膜厚度(80.5±20.5)μm與正常組(46.7±2.5)μm相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p0.05;10μg滴鼻組和霧化組鼻中隔粘膜厚度(51.7±3.5、52.7±8.0)μm顯著低于鼻炎組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p0.05。鼻炎組鼻中隔單位面積(1mm2)Eos個(gè)數(shù)(262±105)與正常組(4±0.7)相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p0.001;10μg滴鼻組和霧化 結(jié)論: 卡介菌多糖核酸可抑制變應(yīng)性鼻炎小鼠的上氣道炎癥,滴鼻、霧化均為有效干預(yù)方式。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R562.25
【圖文】：

37圖2-4 鼻炎組小鼠鼻中隔病理（HE×200） 圖2-5 正常組小鼠鼻中隔病理（HE×200）鼻炎組小鼠部分粘膜上皮脫落，粘膜固有層 正常組小鼠上皮規(guī)整、無脫落，粘膜固有可見大量Eos及其他炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體大量 層未見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體無增生。粘膜增生，粘膜層厚度顯著增加。 層厚度較薄。圖2-6 10μg滴鼻組小鼠鼻中隔病理（HE×200） 圖2-7 5μg滴鼻組小鼠鼻中隔病理（HE×200）10μg滴鼻組可見上皮基本完整無脫落，粘膜固 5μg滴鼻組上皮部分脫落，固有層可見大量有層可見極少量Eos和其他炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)

37圖2-4 鼻炎組小鼠鼻中隔病理（HE×200） 圖2-5 正常組小鼠鼻中隔病理（HE×200）鼻炎組小鼠部分粘膜上皮脫落，粘膜固有層 正常組小鼠上皮規(guī)整、無脫落，粘膜固有可見大量Eos及其他炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體大量 層未見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體無增生。粘膜增生，粘膜層厚度顯著增加。 層厚度較薄。圖2-6 10μg滴鼻組小鼠鼻中隔病理（HE×200） 圖2-7 5μg滴鼻組小鼠鼻中隔病理（HE×200）10μg滴鼻組可見上皮基本完整無脫落，粘膜固 5μg滴鼻組上皮部分脫落，固有層可見大量有層可見極少量Eos和其他炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)

圖2-4 鼻炎組小鼠鼻中隔病理（HE×200） 圖2-5 正常組小鼠鼻中隔病理（HE×200）鼻炎組小鼠部分粘膜上皮脫落，粘膜固有層 正常組小鼠上皮規(guī)整、無脫落，粘膜固有可見大量Eos及其他炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體大量 層未見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體無增生。粘膜增生，粘膜層厚度顯著增加。 層厚度較薄。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 王蘋莉,沈華浩,王紹斌;減毒活菌卡介苗不同時(shí)間和劑量干預(yù)對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥的影響[J];中國(guó)呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志;2004年01期

2 佘翠萍,董震,關(guān)桂梅,佘文煜,楊占泉;卡介苗霧化吸入對(duì)呼吸道動(dòng)物過敏反應(yīng)的免疫調(diào)節(jié)作用[J];中華耳鼻咽喉科雜志;2002年04期

3 全國(guó)兒科哮喘協(xié)作組;2000年與1990年兒童支氣管哮喘患病率的調(diào)查比較[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2004年02期

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本文編號(hào)：2794154