【摘要】：背景和目的:隱源性機化性肺炎(COP)和特發(fā)性肺纖維化(IPF)均屬于特發(fā)性間質(zhì)性肺炎(IIP),二者的肺組織病理中均可見肺成纖維細胞與肌成纖維細胞,但糖皮質(zhì)激素療效卻相差甚遠,具體機制不明。組蛋白乙�；c去乙酰化修飾可以改變組蛋白與DNA的親和狀態(tài),來調(diào)控下游基因的表達,參與臟器纖維化發(fā)生發(fā)展過程。糖皮質(zhì)激素發(fā)揮抗炎作用也需要組蛋白去乙酰化酶(HDAC)的參與。本研究擬通過比較IPF和COP患者外周血及肺組織中HDAC的水平,并對外周血HDAC總體活性與患者臨床參數(shù)進行相關(guān)性分析,初步探索HDAC在IPF、COP發(fā)病機制中的可能作用,為IPF這一難治性疾病的治療提供新的思路。研究方法:(1)采集IPF組(n=15)、COP組(n=15)及對照組(n=15)外周血,分離外周血單個核細胞(PBMC),進行核漿分離,采用熒光法測定各組HDAC總體活性,并分析其與各組臨床參數(shù)的相關(guān)性,進一步為肺組織實驗提供提示。(2)采集石蠟包埋的IPF肺組織(n=5)、COP肺組織(n=5)及正常肺組織(n=5),正常肺組織為距病灶5cm以上的肺組織,經(jīng)HE染色選取成纖維細胞灶肺組織提取RNA,并進行Real time-PCR,檢測各組肺組織中I類HDAC基因表達水平,同時檢測各組成纖維細胞功能相關(guān)基因(FAS和Thy-1)及糖皮質(zhì)激素受體β(GRβ)基因表達水平。取各組肺組織進行免疫組織化學(xué)染色,檢測各組成纖維細胞及炎細胞中HDAC1、HDAC2的表達水平。結(jié)果:(1)外周血實驗:1)IPF組及COP組PBMC胞質(zhì)蛋白HDAC活性分別為(724±216)nmol/L、(718±245)nmol/L,高于健康對照(409±105)nmol/L(均P0.01)。2)IPF組及COP組PBMC核蛋白HDAC活性分別為(2309±708)nmol/L、(3310±1005)nmol/L,高于健康對照(1572±611)nmol/L(均P0.01)。3)COP患者PBMC核蛋白HDAC活性高于IPF患者(Z=-2.840,P=0.005)。4)PBMC核蛋白HDAC活性與IPF患者FEV1、DLCO呈負相關(guān)(r=-0.574,P=0.025;r=-0.583,P=0.029),與 COP 患者 FVC、TLC 呈負相關(guān)(r=-0.846,P=0.016;r=-0.900,P=0.015)。(2)肺組織實驗:1)IPF 與 COP 肺組織的I類HDAC基因表達水平存在差異:IPF患者肺組織HDAC2 mRNA表達高于COP及正常肺組織(P=0.044;P=0.018);IPF及COP患者肺組織HDAC3 mRNA表達均低于正常肺組織(P=0.043;P=0.001);IPF、COP及正常肺組織HDAC1、8mRNA表達水平無統(tǒng)計學(xué)差異(F=0.115,P=0.892;x2=4.34,P=0.114)。2)IPF及COP成纖維細胞灶肺組織Thy-1、FAS基因mRNA表達水平均低于正常肺組織(均P0.05),IPF及COP組間無統(tǒng)計學(xué)差異(均P0.05)。3)IPF、COP及正常肺組織GRβ基因mRNA表達水平無統(tǒng)計學(xué)差異(F=3.243,P=0.075)。4)免疫組化顯示:正常肺組織成纖維細胞HDAC1、2呈陰性表達,IPF、COP肺組織成纖維細胞HDAC1、2均呈陽性表達;IPF成纖維細胞HDAC2表達高于COP、HDAC1表達低于COP,但IPF炎細胞中HDAC1、2表達均低于COP,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.05)。結(jié)論:IPF和COP患者外周血HDAC總體活性升高、肺組織HDAC1及HDAC2表達上調(diào),其PBMC核蛋白HDAC總體活性可能與患者肺纖維化程度相關(guān)。IPF與COP肺組織成纖維細胞HDAC1、2上調(diào)可能與二者肺組織Thy-1、FAS表達下降有關(guān),導(dǎo)致二者均發(fā)生成纖維細胞異常聚集。IPF肺組織未見GRβ表達上調(diào),雖然其肺組織成纖維細胞灶HDAC2表達高于COP,但炎細胞HDAC1、2表達均低于COP,這可能與糖皮質(zhì)激素對IPF療效不佳有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R563.13
【圖文】：

l:邐ｊ邐＾ｊ逡逑Ａ邋３邋１５００，邐＇邐＇￣＇邐６邋３邋６０００１邐本逡逑Ｉ－邐Ｉ－逡逑ＣＯＰ邐ＩＰＦ邐對照邐ＣＯＰ邐，ＰＦ邐對照逡逑圖卜１各組ＰＢＭＣ胞質(zhì)蛋白及核蛋白ＨＤＡＣ活性逡逑２．吡非尼酮及糖皮質(zhì)激素對ＨＤＡＣ總體活性的影響逡逑（１）邋ＩＰＦ患者未治療組與吡非尼酮治療組ＨＤＡＣ活性比較：對ＩＰＦ患者進行逡逑分析，初治組（６例）與卩比非尼酮治療組（６例）患者胞質(zhì)蛋白ＨＤＡＣ活性比逡逑異無統(tǒng)計學(xué)意義（Ｚ＝－０．９４３，Ｐ＝０．３４５），但均高于健康對照組（Ｚ＝－２．２０１，尸＝０．０２８；逡逑２．２０１，尸＝０．０２８）。二者核蛋白ＨＤＡＣ活性比較差異也無統(tǒng)計學(xué)意義（Ｚ＝－０．３１４，逡逑．７５３），但均高于健康對照組（Ｚ＝－２．２０１，尸＝０．０２８；邋Ｚ＝－１．９９２，尸＝０．０４６）。見圖逡逑。逡逑＊邋．邋＊逡逑＇＇

邐北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文逡逑（２）邋ＣＯＰ患者未治療組與糖皮質(zhì)激素治療組與ＨＤＡＣ活性比較：逡逑對ＣＯＰ患者進行亞組分析，未治療組（６例）及激素治療組（６例）胞質(zhì)蛋白逡逑ＨＤＡＣ活性比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Ｚ＝－０．１０５，Ｐ＝０．９１７），均高于健康對照組（Ｚ＝－逡逑２．２０１，尸＝０．０２８；邋Ｚ＝－２．２０１，尸＝０．０２８）。兩組核蛋白ＨＤＡＣ活性比較差異也沒有統(tǒng)逡逑計學(xué)意義（Ｚ＝－０．９４３，尸＝０．３４５），但均高于健康對照組（Ｚ＝－２．２０１，尸＝０．０２８；邋Ｚ＝－逡逑２．２０１，尸＝０．０２８）。見圖卜３0逡逑一l:邐．邐＊逡逑Ｊ邐＞邐＜邐？邐邐－邐邐邐■＜逡逑

逑ｉ邐初治紐邋掂皮質(zhì)激尜邐對照邐—０邋初治組邋糖皮？激累邐對？逡逑圖１－３邋ＣＯＰ患者初治組及糖皮質(zhì)激素治療組胞質(zhì)蛋白及核蛋白ＨＤＡＣ活性逡逑３．核蛋白ＨＤＡＣ活性與臨床參數(shù)的關(guān)系逡逑（１）邐ＣＯＰ患者ＰＢＭＣ核蛋白ＨＤＡＣ活性與臨床參數(shù)的關(guān)系逡逑經(jīng)過相關(guān)性分析后發(fā)現(xiàn)，ＣＯＰ患者ＰＢＭＣ核蛋白ＨＤＡＣ活性與ＬＤＨ呈正相逡逑關(guān)（ｒ＝０．７４６，尸＝０．０３４），與ＦＶＣ占預(yù)計值％、ＴＬＣ占預(yù)計值％呈負相關(guān)（７＝－０．８４６，逡逑？＝０．０１６；邋ｒ＝－０．９００，尸＝０．０１５），見圖邋１－４。ＣＯＰ邋患者邋ＰＢＭＣ邋核蛋白邋ＨＤＡＣ邋活性與逡逑ＥＳＲ、ｈｓＣＲＰ、ＦＥＶ！占預(yù)計值％、ＦＥＶｉ／ＦＶＣ、ＤＬＣＯ占預(yù)計值％均未見明顯相關(guān)性。逡逑１５0１＾°r2邐１00１邋＾０．９００逡逑，＾施邐＾邋９0＿邐＾－０．５邐％邐．逡逑Ｉ１。�！姡�0－逡逑？邐宅邐＼逡逑 二邐、邐－－７０－邐＼逡逑＾５０＇邋？？邋＾６0－邋？＇、逡逑0＿邐ｉ邐ｈ邐１邐Ｉ邐１邐５０＿邐１邐Ｉ邐Ｉ邐ｔ邋．邋Ｉ逡逑０邐１０００邐２０００邐３０００邐４０００邐５０００邐０邐１０００邐２０００邐３０００邐４０００邐５０００逡逑ＰＢＭＣ核蛋白ＨＤＡＣ活性（ｍｎｏｉ／Ｌ）邐ＰＢＭＣ核蛋白ＨＤＡＣ活性（ｒｎｎｏｌ／Ｌ）逡逑圖１－４邋ＣＯＰ患者ＰＢＭＣ核蛋白ＨＤＡＣ活性與臨床參數(shù)的關(guān)系逡逑（２）邐ＩＰＦ患者ＰＢＭＣ細胞核ＨＤＡＣ活性與臨床參數(shù)的關(guān)系逡逑經(jīng)過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，ＩＰＦ患者ＰＢＭＣ細胞核ＨＤＡＣ活性與ＦＥＶｉ占預(yù)計值％、逡逑ＤＬＣＯ邋占預(yù)計值％呈負相關(guān)（ｒ＝－０．５７４

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本文編號：2791717