【摘要】： 目的:使用哮喘大鼠模型,研究白三烯受體拮抗劑和細(xì)胞周期蛋白D1對哮喘大鼠氣道結(jié)構(gòu)的影響,探討白三烯受體拮抗劑和細(xì)胞周期蛋白D1對哮喘氣道重塑的干預(yù)作用及可能的機制。 方法:本實驗分兩部分組成,第一部分:將24只SD大鼠隨機分成4組:A(正常對照組)、B(哮喘模型組)、C(地塞米松組)和D(孟魯斯特組)。采用腹膜腔注射卵清蛋白、卡介苗和氫氧化鋁混懸液致敏和重復(fù)霧化吸入卵清白蛋白法復(fù)制哮喘大鼠模型。最后一次激發(fā)24小時后各組大鼠行動物肺功能檢查(檢測氣道基本阻力和靜脈注射乙酰膽堿后氣道阻力變化);肺組織HE染色、并經(jīng)光學(xué)顯微鏡和圖像分析系統(tǒng)分析支氣管管壁周長、氣道面積、氣道平滑肌面積等病理改變;經(jīng)Manssion染色觀察膠原的表達變化; ELISA法檢測各組大鼠血清中LTD4含量的變化;免疫組織化學(xué)法檢測氣道平滑肌肌動蛋白-α的表達。第二部分:將16只SD大鼠隨機分成2組:A(正常對照組)、B(哮喘模型組),采用上述方法制作大鼠哮喘模型。對各組大鼠分別行肺組織病理、Manssion染色、細(xì)胞周期蛋白D1(免疫組織化學(xué)法和蛋白免疫印跡法)和氣道平滑肌肌動蛋白-α(免疫組織化學(xué)法)檢測。分析細(xì)胞周期蛋白D1和膠原、肌動蛋白-α的相關(guān)性。 第一部分結(jié)果: (1)白三烯受體拮抗劑對哮喘大鼠病理的影響:光鏡下可見哮喘模型組和治療組大鼠氣道粘膜破壞,杯狀細(xì)胞表達增加,粘膜下大量炎癥細(xì)胞浸潤,基地膜增厚,平滑肌增殖,治療組炎癥輕于模型組。分析比較各組大鼠氣道管壁面積、平滑肌面積結(jié)果顯示:哮喘模型組大鼠氣道管壁面積、平滑肌層面積均顯著大于正常對照組;地塞米松組和孟魯斯特組氣道管壁面積、平滑肌厚度明顯的少于哮喘組,但多于正常對照組;孟魯斯特組表達略多于地塞米松組。 (2)白三烯受體拮抗劑對哮喘大鼠肺功能的影響:哮喘組和治療組大鼠氣道基本阻力高于正常對照組(P0.01),孟魯斯特組和地塞米松組低于哮喘模型組(P0.05);地塞米松組略低于孟魯斯特組但沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。經(jīng)靜脈注射乙酰膽堿后哮喘組和治療組大鼠氣道氣道阻力變化幅度高于正常對照組(P0.01);哮喘組高于孟魯斯特組和地塞米松組(P0.01)。最后一次激發(fā)時地塞米松組低于孟魯斯特組(P0.05)。 (3)白三烯受體拮抗劑對哮喘大鼠膠原沉積的影響(Manssion染色):與正常組比較,哮喘組、地塞米松組、孟魯斯特組的膠原表達量明顯增加(P0.01);激素治療組和孟魯斯特組的膠原表達量較哮喘組減少(P0.01),地塞米松組膠原表達量少于孟魯斯特組(P0.01)。 (4)白三烯受體拮抗劑對哮喘大鼠血清白三烯水平的影響:模型組、孟魯斯特組、地塞米松組大鼠血清中LTD4均高于正常對照組(P0.05),但三組之間沒有顯著性差異(P0.05)。 (5)白三烯受體拮抗劑對哮喘大鼠肺組織α平滑肌肌動蛋白表達的影響(免疫組化法):哮喘模型組和治療組大鼠肺組織中α-SMA的表達高于正常對照組(P0.01);孟魯斯特組和地塞米松組低于哮喘模型組(P0.01);地塞米松組低于孟魯斯特組(P0.05)。 第二部分結(jié)果: (1)病理結(jié)果:光鏡下可見哮喘模型組大鼠氣道粘膜破壞,杯狀細(xì)胞表達增加,粘膜下大量炎癥細(xì)胞浸潤,基地膜增厚,平滑肌增殖。分析比較兩組大鼠氣道管壁面積、平滑肌面積結(jié)果顯示:哮喘模型組大鼠氣道管壁面積、平滑肌層面積均顯著大于正常對照組。 (2)膠原表達變化(Manssion染色):與正常組比較,哮喘組氣道周圍和血管周圍的膠原表達量明顯增加(P0.01)。 (3)大鼠肺組織周期蛋白D1表達變化:哮喘模型組大鼠肺組織細(xì)胞周期蛋白D1(CyclinD1)的表達(免疫組化法和蛋白印跡法)高于正常對照組(P0.01)。 (4)大鼠氣道平滑肌肌動蛋白α表達變化(免疫組化法):哮喘模型組大鼠肺組織中α-SMA增多,著色加深,表達高于正常對照組(P0.01); (5)對哮喘組大鼠CyclinD1(蛋白印跡法)和α-SMA、膠原進行相關(guān)性分析結(jié)果顯示: CyclinD1和α-SMA的表達變化成正相關(guān)(r=0.20,P0.05);CyclinD1與膠原的表達變化呈正相關(guān)(r=0.87,P0.05)。哮喘組大鼠CyclinD1(免疫組化法)和α-SMA、膠原進行相關(guān)性分析結(jié)果顯示: CyclinD1(免疫組化法)和α-SMA的表達變化成正相關(guān)(r=0.53,P0.05);CyclinD1與膠原的表達變化呈正相關(guān)(r=0.76,P0.05)。 結(jié)論: 1.白三烯受體拮抗劑能夠明顯減輕支氣管哮喘氣道炎癥、改善肺功能、減少膠原沉積、明顯減少氣道平滑肌肌動蛋白α表達(但白三烯受體拮抗劑并不能降低血清中白三烯D4水平),認(rèn)為白三烯受體拮抗劑能夠改善臨床癥狀,減輕哮喘氣道重塑,延緩病情發(fā)展。 2.在哮喘大鼠中細(xì)胞周期蛋白D1表達明顯增多,與氣道重塑程度(氣道平滑肌肌動蛋白α和膠原沉積表達變化)呈正相關(guān),從而推測在哮喘氣道重塑的形成過程中細(xì)胞周期蛋白D1起著重要的調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R562.25

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王立;吳昌歸;倪殿濤;陳宏謙;;氟伐他汀對哮喘大鼠氣道重建的影響及其機制[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2007年07期

2 辛?xí)苑?支氣管哮喘與氣道重塑[J];國外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊;1998年02期

3 陳穎;支氣管哮喘動物實驗?zāi)Ｐ偷难芯楷F(xiàn)狀[J];國外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊;2000年03期

4 姜宏華;細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子與腫瘤[J];國外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊;2003年04期

5 羅丹,劉啟福,蘇建家,段小嫻,羅元;肝細(xì)胞癌中P~(16)和CDK_4表達異常的研究[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1997年03期

6 付鳳仙;宋俊芬;康山;;p27和CyclinE在卵巢癌中的研究進展[J];河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2007年02期

7 吳昭萍,羅鳳鳴,王曾禮,劉小菁,劉春濤,王文志,章小紅;哮喘大鼠模型肺組織平滑肌肌動蛋白-αmRNA的表達[J];四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2003年02期

8 崔曼麗;哮喘氣道重塑發(fā)病機制的新進展[J];臨床肺科雜志;2000年01期

9 吉寧飛;卞濤;殷凱生;;地塞米松對哮喘大鼠轉(zhuǎn)錄因子GATA-3表達的影響[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2006年09期

10 李寶元，王代樹;細(xì)胞周期蛋白與CDI在細(xì)胞周期調(diào)控中的作用[J];生物化學(xué)與生物物理進展;1996年05期

本文編號：2791765