發(fā)布時(shí)間：2020-08-13 00:22

【摘要】： 目的通過(guò)建立LPS誘導(dǎo)體外原代培養(yǎng)的大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡的損傷模型,觀察抗IL-6R單克隆抗體對(duì)大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。 方法分離、純化、電鏡鑒定的大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞,培養(yǎng)于24孔培養(yǎng)板中,每孔1×106個(gè)細(xì)胞,原代培養(yǎng)23h后,按如下方式分5組(每組4個(gè)復(fù)孔):A組:空白對(duì)照組,僅含DMEM培養(yǎng)基;B組:LPS損傷組,DMEM培養(yǎng)基+LPS10μg/ml;C組:DMEM培養(yǎng)基+LPS10μg/ml組+抗IL-6R單克隆抗體5μg/ml;D組:DMEM培養(yǎng)基+LPS10μg/ml組+抗IL-6R單克隆抗體10μg/ml;F組:DMEM培養(yǎng)基+LPS10μg/ml組+抗IL-6R單克隆抗體20μg/ml。培養(yǎng)48小時(shí)后,收集細(xì)胞行PI單染法流式細(xì)胞儀(FCM)凋亡檢測(cè),酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-6、TNF-α的含量,記錄結(jié)果。 結(jié)果流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示,與A組相比,B組、C組、D組、E組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡率顯著增加,而C組、D組、E組同B組相比肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡率顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示抗IL-6R單克隆抗體對(duì)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用。本研究同時(shí)分析了肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-6和TNF-α濃度,發(fā)現(xiàn)與A組相比,B組、C組、D組、E組IL-6和TNF-α濃度顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);C組、D組、E組IL-6和TNF-α濃度分別與B組比較以及C組、D組、E組三組間IL-6和TNF-α濃度比較均無(wú)明顯變化,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論1、LPS可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡,且可以刺激肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞增加IL-6、TNF-α分泌;2、抗IL-6R單克隆抗體對(duì)LPS所致大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用,并呈濃度依賴關(guān)系,但其確切機(jī)制有待進(jìn)一步的研究;3、抗IL-6R單克隆抗體對(duì)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞分泌IL-6、TNF-α無(wú)明顯影響。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R563
【圖文】：

圖 1 肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞堿性磷酸酶染色 圖 2 正常肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞透射電鏡照片（×200） （×20,000）圖3 新鮮分離的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞 圖4 正常原代培養(yǎng)1天后的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（×400） （×200）

圖 1 肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞堿性磷酸酶染色 圖 2 正常肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞透射電鏡照片（×200） （×20,000）圖3 新鮮分離的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞 圖4 正常原代培養(yǎng)1天后的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（×400） （×200）

圖 1 肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞堿性磷酸酶染色 圖 2 正常肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞透射電鏡照片（×200） （×20,000）圖3 新鮮分離的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞 圖4 正常原代培養(yǎng)1天后的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（×400） （×200）圖 5 正常原代培養(yǎng) 3 天后的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（×400）

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 郝嘉,李永旺,肖穎彬;大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)和鑒定[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年05期

2 李永旺,張德明,錢桂生,毛寶齡,麻莉;TLR4在內(nèi)毒素激活肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞過(guò)程中的表達(dá)及可能作用機(jī)制[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年10期

3 崔社懷,郭先健,錢桂生;鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的分離、鑒定和培養(yǎng)[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1997年06期

4 宋勇,施毅,Alden H.Harken,Meng Xian-zhong;內(nèi)毒素誘導(dǎo)小鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡不依賴TNF-α的研究[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2003年06期

5 李永旺,麻莉;內(nèi)毒素誘導(dǎo)的TLR4-MD2信號(hào)傳導(dǎo)通路[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2002年02期

6 張玉芹,歐陽(yáng)靜萍,李端詳,涂淑珍;硫氮卓酮對(duì)失血性休克犬肺泡Ⅱ型細(xì)胞的影響[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2000年06期

本文編號(hào)：2791233