【摘要】：目的:探討過表達SOCS1的DCs(dendritic cells overexpressing suppressor of cytokine signaling-1,DC-SOCS1)經(jīng)Th17/Treg相關(guān)細(xì)胞因子途徑在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)發(fā)病機制中的可能作用及意義。方法:從小鼠股骨及脛骨中提取DCs前體細(xì)胞并以IL-4、GM-CSF刺激,誘導(dǎo)形成骨髓源性未成熟樹突狀細(xì)胞(immature dendritic cells,im DCs)。用過表達SOCS1的慢病毒感染imDCs,獲得DC-SOCS1目的細(xì)胞。Western blot檢測DC-SOCS1中SOCS1的表達。將DC-SOCS1(1×10~6)、DC-SOCS1(2×10~6)、im DCs(1×10~6)在COPD煙熏建模的第1天、第7天通過尾靜脈過繼免疫至小鼠體內(nèi),以回輸生理鹽水為對照組。各組小鼠均繼續(xù)煙熏建模至28天取肺組織。ELISA檢測肺組織中Th17相關(guān)細(xì)胞因子IL-17和IL-23及Treg相關(guān)細(xì)胞因子IL-10和TGF-β的變化。結(jié)果:1.成功提取、培養(yǎng)及鑒定小鼠骨髓源性DCs;2.成功構(gòu)建DC-SOCS1;3.COPD小鼠肺組織IL-17和IL-23的結(jié)果:(1)回輸不同的DCs(imDCs和不同濃度的DC-SOCS1),使COPD小鼠肺組織中IL-17和IL-23的表達減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。回輸高濃度DC-SOCS1(2×10~6)相較于低濃度DC-SOCS1(1×10~6),IL-17和IL-23的表達減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)在第1天回輸后各組間IL-17和IL-23的水平較第7天回輸后表達減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3)第1天回輸DC-SOCS1(2×10~6)使細(xì)胞因子IL-17和IL-23產(chǎn)生最少。4.COPD小鼠肺組織IL-10和TGF-β的結(jié)果:(1)回輸不同的DCs(imDCs和不同濃度的DC-SOCS1)干預(yù)后,COPD小鼠肺組織中IL-10和TGF-β的表達增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)�；剌敻邼舛菵C-SOCS1(2×10~6)相較于低濃度DC-SOCS1(1×10~6),IL-10和TGF-β的表達增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)在第1天回輸后各組間IL-10和TGF-β的水平較第7天回輸后增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)imDCs及不同濃度的DC-SOCS1于不同時間干預(yù)COPD小鼠,均能減少肺組織中Th17相關(guān)促炎性細(xì)胞因子IL-17和IL-23的表達,且早期高濃度的DC-SOCS1效果顯著,可能減輕COPD的炎癥反應(yīng),進而在COPD治療中發(fā)揮重要作用。(2)imDCs及不同濃度的DC-SOCS1于不同時間干預(yù)COPD小鼠,均能增加肺組織Treg相關(guān)抗炎及抑制性細(xì)胞因子IL-10和TGF-β的表達,且早期高濃度的DC-SOCS1效果顯著,可能增強COPD的抗炎作用或誘導(dǎo)免疫耐受,在COPD中起重要的防治作用。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R563.9
【圖文】：

圖 1 骨髓源性 DCs 的提取注：A：取 C57BL/6 小鼠，頸椎脫臼處死，消毒；B：剔除肌肉取股骨、脛骨；C、D：去除骨骺端，用 PBS 沖洗出骨髓；E：將沖洗出來的骨髓液吸入離心管，1000rpm 離心 5min，棄去上清并固定；F：緩慢將細(xì)胞懸液加入預(yù)先裝有 5mL 淋巴細(xì)胞分離液的 15mL 離心管內(nèi)，1000rpm 離心 20min，離心后溶液分 5 層，吸取中間骨髓基質(zhì)細(xì)胞層（白膜層），PBS 洗 3 次。后以 106/mL 細(xì)胞濃度接種于含 10%胎牛血清及青鏈霉素的 DCs 生長培養(yǎng)基于6 孔板中，置 37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每天觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，細(xì)胞約 1-2d 貼壁，培養(yǎng)第 7 天加入 LPS（100ng/ul）誘導(dǎo)成熟。

圖 2 pLVX- SOCS1-IRES-ZsGreen1 過表達質(zhì)粒構(gòu)建因慢病毒包裝純化 慢病毒載體、包裝細(xì)胞和菌株病毒載體系統(tǒng)毒包裝系統(tǒng)為四質(zhì)粒系統(tǒng)，組成為 pLVX-IRES-ZsGreenEV，PG-P3-RRE。其中 pLVX-IRES-ZsGreen1 能表達綠色SVG，PG-P2-REV，PG-P3-RRE 含有病毒包裝所必須的元胞株T，慢病毒的包裝細(xì)胞，為貼壁依賴型成上皮樣細(xì)胞，生長培S)。貼壁細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)生長增殖形成單層細(xì)胞。株腸桿菌菌株 DH5α，作為擴增慢病毒載體和輔助包裝載體

圖 5 COPD 模型制備2.6.3.3 差異化處理B：NS 回輸（0.1ml/10g）（煙熏第 1 天注射）C：DC-SOCS1 I 組 1×106回輸（0.1ml/10g）（煙熏第 1 天注射）D：DC-SOCS1 II 組 2×106回輸（0.1ml/10g）（煙熏第 1 天注射）E：imDCs 1×106回輸（0.1ml/10g）（煙熏第 1 天注射）F：DC-SOCS1 III 組 1×106回輸（0.1ml/10g）（煙熏第 7 天注射）G：DC-SOCS1 IV 組 2×106回輸（0.1ml/10g）（煙熏第 7 天注射）H：imDCs1×106回輸（0.1ml/10g）（煙熏第 7 天注射）

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 顧延會;符丹丹;饒習(xí)敏;歐陽瑤;;慢性阻塞性肺疾病大鼠支氣管肺泡灌洗液中CD80、CD86的變化及意義[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2015年06期

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相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張婧;慢性阻塞性肺疾病小鼠體內(nèi)CD83、Th17/Treg細(xì)胞的變化及意義[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2016年

本文編號：2773227