發(fā)布時(shí)間：2020-07-28 11:03

【摘要】： 目的 β腎上腺素受體激酶(βARK_1)磷酸化激活態(tài)β受體，是長期應(yīng)用β受體激動(dòng)劑導(dǎo)致β受體下調(diào)的最主要的原因之一。我們構(gòu)建在肺部表達(dá)βARK_1抑制劑(βARKct)的表達(dá)質(zhì)粒，并通過基因轉(zhuǎn)染的方式來研究βARKct對(duì)哮喘小鼠和長期應(yīng)用β_2受體激動(dòng)劑小鼠肺部β受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)。 方法 1．取正常小鼠的腦組織作為模板，經(jīng)RT-PCR取得目的基因，構(gòu)建以pcDNA3.1為載體的表達(dá)質(zhì)粒。 2．建立哮喘動(dòng)物模型和長期應(yīng)用β受體激動(dòng)劑的哮喘動(dòng)物模型。 3．質(zhì)粒DNA經(jīng)脂質(zhì)體的包裹，通過尾靜脈注射和氣管內(nèi)滴入的轉(zhuǎn)染途徑進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染。 4．Western-blot檢測基因的表達(dá)。放免法檢測小鼠肺部的β受體和cAMP的水平。 結(jié)果 1．經(jīng)不同途徑轉(zhuǎn)染構(gòu)建的表達(dá)質(zhì)粒在肺部都有目的基因的表達(dá)，但表達(dá)的量不同。 2．哮喘小鼠，應(yīng)用β受體激動(dòng)劑的哮喘小鼠肺部β受體和cAMP水平都有下降，下降的程度不同。 3．pcDNA-βARKct轉(zhuǎn)染小鼠肺部β受體的數(shù)目和cAMP水平都有上調(diào)。 結(jié)論 1．構(gòu)建含有目的基因βARK_1抑制劑的質(zhì)粒在肺部有表達(dá)，表達(dá)的量與轉(zhuǎn)染途徑和DNA的量相關(guān)。 南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 2．基因轉(zhuǎn)染pARKct基因?qū)ο∈蠹伴L期應(yīng)用p受體激動(dòng)劑后 的哮喘小鼠肺部p受體和CAMP的下降都有抑制作用，但p ARKd 在兩者中的作用機(jī)理不同。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2772790