【摘要】：目的:探討不同濃度組胺(Hist)對(duì)哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖的影響,及Hist對(duì)大鼠氣道平滑肌細(xì)胞ERK mRNA、CyclinD1 mRNA表達(dá)的影響。 方法: 第一部分:卵蛋白霧化致敏4周,建立哮喘大鼠模型,HE染色、圖像分析判斷是否形成氣道重構(gòu)。原代培養(yǎng)正常大鼠和哮喘大鼠平滑肌細(xì)胞(airway smooth muscle cells,ASMCs),給予不同濃度的組胺(Hist)干預(yù)ASMCs生長(zhǎng),依處理方式不同分為5組:(1)正常對(duì)照組(2)哮喘模型組;(3) 0.1mmol/L Hist組;(4) 0.3mmol/L Hist組;(5) 0.5mmol/L Hist組。采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)氣道平滑肌細(xì)胞(ASMCs)增殖能力,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測(cè)定各組大鼠ASMCs細(xì)胞周期。 第二部分:原代培養(yǎng)正常大鼠和哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞,根據(jù)第一部分確定的Hist濃度0.5mmol/L和ERK特異性抑制劑PD98059干預(yù)ASMCs生長(zhǎng),根據(jù)處理方式不同分別分為4組:(1)正常對(duì)照組;(2)哮喘模型組;(3)0.5mmol/L Hist組;(4)PD98059+Hist組:加入PD98059 10μmol/L培養(yǎng)1小時(shí)后,加入濃度為0.5mmol/L的Hist。采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)氣道平滑肌細(xì)胞(ASMCs)吸光度A值,RT-PCR方法檢測(cè)ERK1/2和CyclinD1 mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果: 第一部分: (1)肺組織HE染色、圖像分析后哮喘模型組發(fā)生氣道重構(gòu),模型復(fù)制成功。 (2)哮喘模型組、0.1mmol/L Hist組、0.3mmol/L Hist組、0.5mmol/L Hist組與正常對(duì)照組比較,吸光度A值增高(P0.01),G0/G1期細(xì)胞比例下降(P0.01),S+G2期比例升高(P0.01);隨著組胺濃度增加,吸光度A值增高,G0/G1期細(xì)胞比例下降,S+G2期比例升高,0.5mmol/L Hist為第二部分實(shí)驗(yàn)干預(yù)濃度。 第二部分: (1)哮喘模型組、0.5mmol/L Hist組、PD98059+Hist組與正常對(duì)照組相比,吸光度A值增高(P0.01);PD98059+Hist組與0.5mmol/L Hist組相比,吸光度A值下降(P0.01);PD98059+ Hist組與哮喘模型組相比,吸光度A值升高(P0.05)。 (2)哮喘組、0.5mmol/L Hist組、PD98059+Hist組與正常對(duì)照組相比,ERK1/2 mRNA和CyclinD1 mRNA的表達(dá)升高(P0.05);PD98059+Hist組與0.5mmol/L Hist組相比,ERK1/2 mRNA和CyclinD1 mRNA的表達(dá)下降(P0.05);PD98059+Hist組與哮喘模型組相比,ERK1/2 mRNA和CyclinD1 mRNA的表達(dá)升高(P0.05)。ERK1/2 mRNA和CyclinD1 mRNA的表達(dá)趨勢(shì)基本一致。 結(jié)論: (1)組胺可以進(jìn)一步促進(jìn)哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖,在一定濃度范圍內(nèi)組胺對(duì)氣道平滑肌增殖的影響可能具有濃度依賴(lài)性。 (2)組胺可能通過(guò)了ERK信號(hào)通路上調(diào)CyclinD1 mRNA的表達(dá),促進(jìn)了哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖。 (3)在ERK信號(hào)通路之外,組胺可能還通過(guò)其他信號(hào)通路促進(jìn)氣道平滑肌細(xì)胞增殖。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R562.25
【圖文】：

正常對(duì)照組大鼠肺組織HE染色(100×)

哮喘模型組大鼠肺組織HE染色(100×)

大鼠氣道平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)(100×)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2767113