【摘要】：目的特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一種慢性進(jìn)展性的病因不明的肺部疾病,且缺乏有效的治療手段。過(guò)多的肺成纖維細(xì)胞、肌成纖維細(xì)胞聚集和細(xì)胞外基質(zhì)的過(guò)度沉積是IPF的重要病理特點(diǎn)。micro RNA是一種小分子非編碼的RNA,在體內(nèi)眾多生理病理過(guò)程中扮演重要的角色。研究表明micro RNA同樣參與IPF的發(fā)病機(jī)理。本研究通過(guò)觀察mi R-29b對(duì)與A549細(xì)胞共培養(yǎng)的人胚肺成纖維細(xì)胞(MRC-5)合成I型膠原蛋白(Collagen I,Col I)的影響,探討其在抗肺纖維化中的作用,為探尋IPF新的治療靶點(diǎn)提供一定的研究依據(jù)。方法應(yīng)用Transwell小室構(gòu)建MRC-5與A549細(xì)胞跨室共培養(yǎng)模型,利用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將mi R-29b轉(zhuǎn)染至MRC-5細(xì)胞以及使用TGF-β1刺激相應(yīng)細(xì)胞組,并設(shè)空白對(duì)照組,TGF-β1刺激組,mi R-29b陰性轉(zhuǎn)染對(duì)照+TGF-β1刺激組,mi R-29b轉(zhuǎn)染+TGF-β1刺激組,mi R-29b轉(zhuǎn)染組。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞中Col I和mi R-29b的m RNA相對(duì)表達(dá)水平。Western blotting法檢測(cè)各組細(xì)胞中Col I蛋白表達(dá)水平。結(jié)果(1)PCR檢測(cè)分析顯示,與空白對(duì)照組相比,mi R-29b在轉(zhuǎn)染組表達(dá)水平增加了127倍(P0.01),使用Lipofectamin2000在MRC-5細(xì)胞轉(zhuǎn)染組中過(guò)表達(dá)mi R-29b成功。(2)通過(guò)PCR檢測(cè)分析顯示與TGF-β1刺激組和mi R-29b陰性轉(zhuǎn)染+TGF-β1刺激組相比,mi R-29b轉(zhuǎn)染+TGF-β1刺激組中Col I表達(dá)降低(P0.05)。(3)Western blotting法檢測(cè)各組細(xì)胞Col I蛋白表達(dá),mi R-29b轉(zhuǎn)染+TGF-β1刺激組中Col I表達(dá)較TGF-β1刺激組和mi R-29b陰性轉(zhuǎn)染+TGF-β1刺激組相比表達(dá)降低(P0.05)結(jié)論實(shí)驗(yàn)表明在mi R-29b轉(zhuǎn)染的MRC-5細(xì)胞中存在過(guò)表達(dá)mi R-29b,后者可減少與A549細(xì)胞共培養(yǎng)的MRC-5細(xì)胞TGF-β1刺激后Col I蛋白表達(dá)水平,進(jìn)而減少細(xì)胞外基質(zhì)的合成,顯示對(duì)肺纖維化有潛在的抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R563

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本文編號(hào)：2766247