發(fā)布時(shí)間：2020-07-17 09:30

【摘要】： 目的:通過(guò)長(zhǎng)期霧化吸入OVA建立大鼠難治性哮喘(Difficult asthma)模型,霧化吸入布地奈德(Budesonide)和維生素A(Vitamin A,VA)作為干預(yù)因素,根據(jù)支氣管-肺、脾病理變化、Western-blotting法及熒光免疫組化法檢測(cè)肺組織胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)表達(dá),探討維生素A和布地奈德對(duì)難治性哮喘的治療作用及對(duì)肺組織TSLP表達(dá)的影響。旨在為臨床防治哮喘提供一些有價(jià)值的參考。 方法:實(shí)驗(yàn)第1天將48只成年雌性SD大鼠腹腔注射1ml 0.1%OVA致敏,第8天再次腹腔致敏。第3周起所有動(dòng)物置于自制的86cm×40cm×40cm紙箱內(nèi)霧化吸入1%OVA進(jìn)行激發(fā),每天1次,每次30分鐘,共4周。激發(fā)后第3周起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成三組:哮喘組、布地奈德組和維生素A組。三組于1%OVA激發(fā)后8小時(shí)分別進(jìn)行干預(yù)處理:布地奈德組霧化吸入0.02%布地奈德每次30分鐘,隔日1次,共3次;維生素A組霧化吸入1250IU/ml維生素A,每次30分鐘,隔日1次,共3次;哮喘組霧化吸入90%乙醇,每次30分鐘,隔日1次,共3次。激發(fā)后第4周、第5周分批處死1/2數(shù)量的動(dòng)物。(1)制作大鼠支氣管肺病理切片,顯微鏡下觀察支氣管肺病理變化;(2)肺稱重后勻漿,提取肺組織總蛋白,Western-blotting法檢測(cè)肺組織TSLP表達(dá)水平;(3)制作肺組織冰凍切片,熒光免疫組化法檢測(cè)肺組織TSLP表達(dá)。 結(jié)果:(1)組織病理鏡檢:哮喘組:激發(fā)后第4周:氣管上皮杯狀細(xì)胞增多,黏膜下層淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)增多。肺內(nèi)氣道上皮內(nèi)杯狀細(xì)胞增多,周圍間質(zhì)中淋巴細(xì)胞(Lymphocyte,LC)和嗜酸性粒細(xì)胞(Eosinophil,EOS)中-重度浸潤(rùn),肺泡隔明顯增寬,肺泡腔有紅細(xì)胞(RBC)、LC滲出。脾臟白髓LC區(qū)中度增生。激發(fā)后第5周:氣管假?gòu)?fù)層柱狀上皮,粘膜結(jié)締組織中浸潤(rùn)LC數(shù)量減少。肺間質(zhì)LC重度浸潤(rùn),肺泡隔增寬程度有所減輕。脾臟白髓LC區(qū)中度增生。維生素A組:激發(fā)后第4周:氣管假?gòu)?fù)層上皮,粘膜結(jié)締組織內(nèi)LC增多。肺氣道杯狀細(xì)胞明顯增多,上皮細(xì)胞脫落,形成細(xì)胞栓,間質(zhì)EOS和LC重度浸潤(rùn),肺泡隔明顯增寬,隔內(nèi)LC浸潤(rùn),肺泡腔較多RBC滲出。脾臟白髓LC區(qū)中度增生。激發(fā)后第5周:氣管假?gòu)?fù)層上皮,杯狀細(xì)胞較前減少,粘膜結(jié)締組織內(nèi)LC減輕,結(jié)構(gòu)大致正常。肺內(nèi)氣道上皮細(xì)胞恢復(fù),基底層細(xì)胞完整,杯狀細(xì)胞明顯減少,周圍間質(zhì)LC重度浸潤(rùn),肺泡腔內(nèi)僅有LC滲出。脾臟白髓LC區(qū)增生不明顯。布地奈德組:激發(fā)后第4周:氣管假?gòu)?fù)層上皮,上皮細(xì)胞脫落較少,粘膜層浸潤(rùn)LC較少。肺內(nèi)氣道上皮中杯狀細(xì)胞明顯增多,周圍間質(zhì)中LC浸潤(rùn)較少,肺泡隔增寬。脾臟白髓LC區(qū)輕度增生。激發(fā)后第5周:肺內(nèi)氣道上皮中杯狀細(xì)胞明顯增多,周圍間質(zhì)LC重度浸潤(rùn),肺泡隔增寬明顯,肺泡腔有LC和RBC滲出。脾臟白髓LC區(qū)中度增生。(2)Western-blotting檢測(cè)結(jié)果:激發(fā)后第4、5周組間比較均為哮喘組肺組織TSLP表達(dá)最高(3454.750±410.715,2985.250±278.534),其次維生素A組(3055.000±307.115,3016.500±342.573),布地奈德組TSLP表達(dá)(2658.375±254.289,2297.500±134.481)最少(P＜0.05);同組比較,哮喘組及布地奈德組激發(fā)后第5周TSLP表達(dá)低于激發(fā)后第4周(P＜0.05),而維生素A組無(wú)明顯變化(P＞0.05)。(3)熒光免疫組化結(jié)果:表達(dá)TSLP陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在肺泡和氣道周圍間質(zhì)內(nèi)。激發(fā)后第4、5周組間比較均為哮喘組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目(39.875±4.224,35.375±3.926)(/1013505um~2)高于維生素A組(35.125±2.748,37.875±2.167),布地奈德組(30.875±1.808,28.500±1.927)最少(P＜0.05);同組比較,哮喘組及布地奈德組激發(fā)后第5周陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目均低于激發(fā)后第4周(P＜0.05),而維生素A組激發(fā)后第5周高于激發(fā)后第4周(P＜0.05)。 結(jié)論:(1)霧化吸入維生素A對(duì)難治性哮喘大鼠肺部病理改變呈雙向性調(diào)節(jié)。能夠增加脾臟LC增生,肺LC的浸潤(rùn),加重炎癥反應(yīng),又通過(guò)減少杯狀細(xì)胞增生,氣道上皮和肺泡上皮結(jié)構(gòu)修復(fù),加快炎癥消散速度,縮短病程。(2)難治性哮喘大鼠常伴有激素依賴的表現(xiàn)。布地奈德能夠減輕哮喘大鼠肺部炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),但停藥后炎癥復(fù)燃,病理變化明顯加重。(3)布地奈德具有很強(qiáng)的抑制TSLP表達(dá)的能力,作用持久。維生素A能夠抑制TSLP表達(dá),但作用較弱。TSLP在難治性哮喘肺部表達(dá)明顯增高,但有時(shí)與病情嚴(yán)重程度沒(méi)有相關(guān)性。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R562.25
【圖文】：

xZ(X)哮喘組激發(fā)后第4周，肺內(nèi)氣管上皮杯狀細(xì)胞增多(白色箭頭所示)，貓膜下層淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)增多(黑色箭頭所示)。圖2HE染色，x100哮咄組激發(fā)后第5周，肺泡隔增寬程度有所減輕，隔內(nèi)仍有琳巴細(xì)胞漫潤(rùn)(黑色箭頭所示)，肺泡腔有淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞滲出(白色箭頭所示).

xZ(X)哮喘組激發(fā)后第4周，肺內(nèi)氣管上皮杯狀細(xì)胞增多(白色箭頭所示)，貓膜下層淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)增多(黑色箭頭所示)。圖2HE染色，x100哮咄組激發(fā)后第5周，肺泡隔增寬程度有所減輕，隔內(nèi)仍有琳巴細(xì)胞漫潤(rùn)(黑色箭頭所示)，肺泡腔有淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞滲出(白色箭頭所示).

xZ(X)哮喘組激發(fā)后第4周，肺內(nèi)氣管上皮杯狀細(xì)胞增多(白色箭頭所示)，貓膜下層淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)增多(黑色箭頭所示)。圖2HE染色，x100哮咄組激發(fā)后第5周，肺泡隔增寬程度有所減輕，隔內(nèi)仍有琳巴細(xì)胞漫潤(rùn)(黑色箭頭所示)，肺泡腔有淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞滲出(白色箭頭所示).圖3隊(duì)S染色，xZ(X)維生素A組激發(fā)后第4周，肺氣道上皮脫落、杯狀細(xì)胞明顯增多，局部增加明圖4HE染色，x100維生素A組滋發(fā)后第5周，多數(shù)肺泡隔增寬程度有所減輕，確內(nèi)有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 阮征;鄧澤元;伍國(guó)耀;印遇龍;;食物營(yíng)養(yǎng)與機(jī)體健康的關(guān)系——腸胃始動(dòng)論[J];食品科學(xué);2012年11期

本文編號(hào)：2759262