【摘要】： 目的:通過長期霧化吸入OVA建立大鼠難治性哮喘(Difficult asthma)模型,霧化吸入布地奈德(Budesonide)和維生素A(Vitamin A,VA)作為干預因素,根據(jù)支氣管-肺、脾病理變化、Western-blotting法及熒光免疫組化法檢測肺組織胸腺基質淋巴細胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)表達,探討維生素A和布地奈德對難治性哮喘的治療作用及對肺組織TSLP表達的影響。旨在為臨床防治哮喘提供一些有價值的參考。 方法:實驗第1天將48只成年雌性SD大鼠腹腔注射1ml 0.1%OVA致敏,第8天再次腹腔致敏。第3周起所有動物置于自制的86cm×40cm×40cm紙箱內霧化吸入1%OVA進行激發(fā),每天1次,每次30分鐘,共4周。激發(fā)后第3周起實驗動物隨機分成三組:哮喘組、布地奈德組和維生素A組。三組于1%OVA激發(fā)后8小時分別進行干預處理:布地奈德組霧化吸入0.02%布地奈德每次30分鐘,隔日1次,共3次;維生素A組霧化吸入1250IU/ml維生素A,每次30分鐘,隔日1次,共3次;哮喘組霧化吸入90%乙醇,每次30分鐘,隔日1次,共3次。激發(fā)后第4周、第5周分批處死1/2數(shù)量的動物。(1)制作大鼠支氣管肺病理切片,顯微鏡下觀察支氣管肺病理變化;(2)肺稱重后勻漿,提取肺組織總蛋白,Western-blotting法檢測肺組織TSLP表達水平;(3)制作肺組織冰凍切片,熒光免疫組化法檢測肺組織TSLP表達。 結果:(1)組織病理鏡檢:哮喘組:激發(fā)后第4周:氣管上皮杯狀細胞增多,黏膜下層淋巴細胞浸潤增多。肺內氣道上皮內杯狀細胞增多,周圍間質中淋巴細胞(Lymphocyte,LC)和嗜酸性粒細胞(Eosinophil,EOS)中-重度浸潤,肺泡隔明顯增寬,肺泡腔有紅細胞(RBC)、LC滲出。脾臟白髓LC區(qū)中度增生。激發(fā)后第5周:氣管假復層柱狀上皮,粘膜結締組織中浸潤LC數(shù)量減少。肺間質LC重度浸潤,肺泡隔增寬程度有所減輕。脾臟白髓LC區(qū)中度增生。維生素A組:激發(fā)后第4周:氣管假復層上皮,粘膜結締組織內LC增多。肺氣道杯狀細胞明顯增多,上皮細胞脫落,形成細胞栓,間質EOS和LC重度浸潤,肺泡隔明顯增寬,隔內LC浸潤,肺泡腔較多RBC滲出。脾臟白髓LC區(qū)中度增生。激發(fā)后第5周:氣管假復層上皮,杯狀細胞較前減少,粘膜結締組織內LC減輕,結構大致正常。肺內氣道上皮細胞恢復,基底層細胞完整,杯狀細胞明顯減少,周圍間質LC重度浸潤,肺泡腔內僅有LC滲出。脾臟白髓LC區(qū)增生不明顯。布地奈德組:激發(fā)后第4周:氣管假復層上皮,上皮細胞脫落較少,粘膜層浸潤LC較少。肺內氣道上皮中杯狀細胞明顯增多,周圍間質中LC浸潤較少,肺泡隔增寬。脾臟白髓LC區(qū)輕度增生。激發(fā)后第5周:肺內氣道上皮中杯狀細胞明顯增多,周圍間質LC重度浸潤,肺泡隔增寬明顯,肺泡腔有LC和RBC滲出。脾臟白髓LC區(qū)中度增生。(2)Western-blotting檢測結果:激發(fā)后第4、5周組間比較均為哮喘組肺組織TSLP表達最高(3454.750±410.715,2985.250±278.534),其次維生素A組(3055.000±307.115,3016.500±342.573),布地奈德組TSLP表達(2658.375±254.289,2297.500±134.481)最少(P＜0.05);同組比較,哮喘組及布地奈德組激發(fā)后第5周TSLP表達低于激發(fā)后第4周(P＜0.05),而維生素A組無明顯變化(P＞0.05)。(3)熒光免疫組化結果:表達TSLP陽性細胞主要分布在肺泡和氣道周圍間質內。激發(fā)后第4、5周組間比較均為哮喘組陽性細胞數(shù)目(39.875±4.224,35.375±3.926)(/1013505um~2)高于維生素A組(35.125±2.748,37.875±2.167),布地奈德組(30.875±1.808,28.500±1.927)最少(P＜0.05);同組比較,哮喘組及布地奈德組激發(fā)后第5周陽性細胞數(shù)目均低于激發(fā)后第4周(P＜0.05),而維生素A組激發(fā)后第5周高于激發(fā)后第4周(P＜0.05)。 結論:(1)霧化吸入維生素A對難治性哮喘大鼠肺部病理改變呈雙向性調節(jié)。能夠增加脾臟LC增生,肺LC的浸潤,加重炎癥反應,又通過減少杯狀細胞增生,氣道上皮和肺泡上皮結構修復,加快炎癥消散速度,縮短病程。(2)難治性哮喘大鼠常伴有激素依賴的表現(xiàn)。布地奈德能夠減輕哮喘大鼠肺部炎癥細胞浸潤,但停藥后炎癥復燃,病理變化明顯加重。(3)布地奈德具有很強的抑制TSLP表達的能力,作用持久。維生素A能夠抑制TSLP表達,但作用較弱。TSLP在難治性哮喘肺部表達明顯增高,但有時與病情嚴重程度沒有相關性。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R562.25
【圖文】：

xZ(X)哮喘組激發(fā)后第4周，肺內氣管上皮杯狀細胞增多(白色箭頭所示)，貓膜下層淋巴細胞浸潤增多(黑色箭頭所示)。圖2HE染色，x100哮咄組激發(fā)后第5周，肺泡隔增寬程度有所減輕，隔內仍有琳巴細胞漫潤(黑色箭頭所示)，肺泡腔有淋巴細胞、紅細胞滲出(白色箭頭所示).

xZ(X)哮喘組激發(fā)后第4周，肺內氣管上皮杯狀細胞增多(白色箭頭所示)，貓膜下層淋巴細胞浸潤增多(黑色箭頭所示)。圖2HE染色，x100哮咄組激發(fā)后第5周，肺泡隔增寬程度有所減輕，隔內仍有琳巴細胞漫潤(黑色箭頭所示)，肺泡腔有淋巴細胞、紅細胞滲出(白色箭頭所示).

xZ(X)哮喘組激發(fā)后第4周，肺內氣管上皮杯狀細胞增多(白色箭頭所示)，貓膜下層淋巴細胞浸潤增多(黑色箭頭所示)。圖2HE染色，x100哮咄組激發(fā)后第5周，肺泡隔增寬程度有所減輕，隔內仍有琳巴細胞漫潤(黑色箭頭所示)，肺泡腔有淋巴細胞、紅細胞滲出(白色箭頭所示).圖3隊S染色，xZ(X)維生素A組激發(fā)后第4周，肺氣道上皮脫落、杯狀細胞明顯增多，局部增加明圖4HE染色，x100維生素A組滋發(fā)后第5周，多數(shù)肺泡隔增寬程度有所減輕，確內有淋巴細胞浸潤

【引證文獻】

相關期刊論文 前1條

1 阮征;鄧澤元;伍國耀;印遇龍;;食物營養(yǎng)與機體健康的關系——腸胃始動論[J];食品科學;2012年11期

本文編號：2759262