【摘要】： 第一部分內(nèi)毒素急性肺損傷大鼠肺組織CXCR4的表達(dá)及其作用 【目的】 通過檢測內(nèi)毒素急性肺損傷(acute lung injury,ALI)時(shí)肺組織CXCR4的表達(dá),研究其與炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)以及肺損傷病理指標(biāo)變化之間的關(guān)系,探討其在內(nèi)毒素引起ALI過程中的作用。 【方法】 將SD大鼠分為5組:①對照組、②2 h組、③4 h組、④8 h組、⑤12 h組。尾靜脈注射LPS,復(fù)制ALI模型。在LPS注射后2、4、8、12小時(shí)分別用免疫組化、Western Blot及RT-PCR法檢測CXCR4、SDF-1α、TNF-α、IL-1β及IL-18在大鼠肺組織中的表達(dá)。 【結(jié)果】 SD大鼠肺組織中存在有CXCR4及SDF-1α的表達(dá)。LPS導(dǎo)致ALI時(shí),CXCR4及SDF-1α蛋白和mRNA表達(dá)明顯升高(P0.05),且與TNF-α、IL—1β及IL-18的表達(dá)具有相同的變化趨勢。 【結(jié)論】 LPS能促進(jìn)大鼠肺組織CXCR4及SDF-1α的表達(dá),進(jìn)而引起大量炎癥細(xì)胞因子的釋放,造成肺組織損害。CXCR4及SDF-1α可能在LPS引起ALI過程中發(fā)揮重要作用。 第二部分LPS作用下大鼠肺泡巨噬細(xì)胞CXCR4的表達(dá)及作用 【目的】 研究LPS作用下體外培養(yǎng)的肺泡巨噬細(xì)胞中CXCR4的表達(dá)變化與細(xì)胞因子表達(dá)間的關(guān)系,并通過應(yīng)用CXCR4阻斷劑AMD3100干預(yù)LPS對巨噬細(xì)胞的作用,檢測CXCR4與細(xì)胞因子的表達(dá)變化,進(jìn)一步探討CXCR4在LPS激活炎癥細(xì)胞因子過程中的作用�！痉椒ā� 將分離培養(yǎng)的大鼠肺泡巨噬細(xì)胞隨機(jī)分組: (1)單獨(dú)應(yīng)用LPS刺激肺泡巨噬細(xì)胞。 (2)用AMD3100預(yù)處理肺泡巨噬細(xì)胞30min后,再以LPS刺激肺泡巨噬細(xì)胞。 (3)同時(shí)應(yīng)用AMD3100和LPS刺激肺泡巨噬細(xì)胞。 (4)LPS刺激肺泡巨噬細(xì)胞30min后,再用AMD3100作用于肺泡巨噬細(xì)胞。在LPS刺激肺泡巨噬細(xì)胞后,分別應(yīng)用ELISA、Western Blot及RT-PCR法檢測肺泡巨噬細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-a和IL-6濃度以及肺泡巨噬細(xì)胞CXCR4蛋白和mRNA表達(dá)的變化。 【結(jié)果】 LPS刺激肺泡巨噬細(xì)胞后不同時(shí)間CXCR4蛋白和mRNA表達(dá)以及肺泡巨噬細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α和IL-6的濃度與正常對照組相比均明顯增加(P0.05)。 AMD3 100預(yù)處理、AMD3 100與LPS同時(shí)應(yīng)用及AMD3 100遲后于LPS應(yīng)用時(shí),在LPS作用下,CXCR4蛋白和mRNA均較正常對照組明顯增加(P0.05),與單獨(dú)應(yīng)用LPS時(shí)相比,CXCR4蛋白和mRNA在各時(shí)點(diǎn)的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 AMD3100預(yù)處理與正常對照組相比,肺泡巨噬細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α和IL-6的濃度均稍增加,差異無顯著性(P0.05);與單獨(dú)應(yīng)用LPS刺激時(shí)相比,培養(yǎng)液中TNF-α和IL-6的濃度降低,差異有顯著性(P0.05)。AMD3100預(yù)處理同與LPS同時(shí)應(yīng)用相比,培養(yǎng)液中TNF-α和IL-6的濃度稍低,差異有顯著性(P0.05)。 AMD3100遲后于LPS應(yīng)用時(shí),與正常對照組相比,肺泡巨噬細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α和IL-6的濃度均較正常對照組增加,差異有顯著性(P0.05),與單獨(dú)應(yīng)用LPS刺激時(shí)相比,肺泡巨噬細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α和IL-6的濃度降低,但差異無顯著性(P0.05)。 【結(jié)論】 LPS能夠刺激肺泡巨噬細(xì)胞CXCR4的表達(dá),進(jìn)而產(chǎn)生大量炎癥細(xì)胞因子。AMD3100阻斷CXCR4后,能夠抑制LPS引起的炎癥細(xì)胞因子釋放,表明CXCR4可能在LPS的受體識(shí)別及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中發(fā)揮作用。第三部分CXCR4在內(nèi)毒素耐受性中的作用機(jī)制 【目的】 通過檢測LPS預(yù)處理后LPS作用下肺組織和體外培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞中CXCR4的表達(dá),研究CXCR4與炎癥細(xì)胞因子表達(dá)之間的關(guān)系以及LPS預(yù)處理對內(nèi)毒素急性肺損傷的影響,更進(jìn)一步探討CXCR4在內(nèi)毒素引起ALI過程中的作用。 【方法】(一)CXCR4在LPS預(yù)處理肺組織的表達(dá) 將SD大鼠隨機(jī)分組: (1)LPS組以5mg/kg尾靜脈注射LPS,復(fù)制ALI模型。 (2)LPS預(yù)處理組首次經(jīng)腹腔注射LPS(0.25mg/kg),24小時(shí)后再經(jīng)腹腔注射LPS(0.5mg/kg),第2次腹腔注射72小時(shí)后,經(jīng)尾靜脈注射LPS(5mg/kg)。 尾靜脈注射LPS后2、4、8、12小時(shí)分別用免疫組化、Western Blot及RT-PCR法檢測CXCR4、TNF-α、IL-1β及IL-18在大鼠肺組織中的表達(dá)。 (二)CXCR4在LPS預(yù)處理肺泡巨噬細(xì)胞的表達(dá) 將培養(yǎng)好的肺泡巨噬細(xì)胞隨機(jī)分組: (1)LPS刺激肺泡巨噬細(xì)胞后4小時(shí),檢測肺泡巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子(TNF-a、IL-1β及IL-18)和CXCR4表達(dá)的變化。 (2)LPS預(yù)先刺激培養(yǎng)12小時(shí),再用LPS刺激肺泡巨噬細(xì)胞4小時(shí)后,檢測肺泡巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子(TNF-α、IL-1p及IL-18)和CXCR4表達(dá)的變化。 【結(jié)果】 LPS預(yù)處理后,LPS刺激引起的肺組織和肺泡巨噬細(xì)胞CXCR4、TNF-α、IL-1β及IL-18的表達(dá)均較單獨(dú)應(yīng)用LPS組減少,病理學(xué)檢查指標(biāo)有不同程度的減輕。 【結(jié)論】 LPS預(yù)處理能夠減輕內(nèi)毒素引起的肺損傷,在其過程中,CXCR4的表達(dá)下調(diào)可能發(fā)揮了重要作用。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R563.8
【圖文】：

圖1.對照組肺泡結(jié)構(gòu)清晰完整，肺泡、肺間質(zhì)均無水腫、炎癥病理改變 (HEx400)圖2.LPS注射Zh后，肺間質(zhì)增厚，大量中性粒細(xì)胞浸潤，部分肺泡腔出血 (HEx4oo)圖3.對照組肺組織CXCR4蛋白呈弱陽性表達(dá)(免化x200)圖4.LPS靜脈注射4h后，肺組織CXCR4蛋白呈強(qiáng)陽性表達(dá)(免化x200)

圖1.對照組肺泡結(jié)構(gòu)清晰完整，肺泡、肺間質(zhì)均無水腫、炎癥病理改變 (HEx400)圖2.LPS注射Zh后，肺間質(zhì)增厚，大量中性粒細(xì)胞浸潤，部分肺泡腔出血 (HEx4oo)圖3.對照組肺組織CXCR4蛋白呈弱陽性表達(dá)(免化x200)圖4.LPS靜脈注射4h后，肺組織CXCR4蛋白呈強(qiáng)陽性表達(dá)(免化x200)

平中科枚大母悶濟(jì)醫(yī)李此博士毋位份大圖1.對照組肺泡結(jié)構(gòu)清晰完整，肺泡、肺間質(zhì)均無水腫、炎癥病理改變 (HEx400)圖2.LPS注射Zh后，肺間質(zhì)增厚，大量中性粒細(xì)胞浸潤，部分肺泡腔出血 (HEx4oo)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 周向東,龍勉;內(nèi)毒素條件下血管內(nèi)皮細(xì)胞對中性粒細(xì)胞粘附性的動(dòng)態(tài)改變[J];微循環(huán)學(xué)雜志;1996年03期

2 郭禹標(biāo),陳永雄,謝燦茂,楊惠玲,尹培達(dá);巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子在油酸致急性肺損傷動(dòng)物模型肺組織中的表達(dá)[J];中國病理生理雜志;2001年01期

3 郭禹標(biāo),李志平,謝燦茂,陳永雄,尹培達(dá);巨噬細(xì)胞浸潤及細(xì)胞間粘附分子-1表達(dá)在油酸致大鼠急性肺損傷發(fā)病中的作用[J];中國病理生理雜志;2001年09期

4 徐興祥,孫耕耘,錢桂生,吳澤志,秦廷武;急性肺損傷大鼠白細(xì)胞變形性變化及山莨菪堿影響[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;1998年10期

本文編號(hào)：2749193